中草药  2016, Vol. 47 Issue (21): 3795-3797
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引用本文doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.21.007
谢雪, 张宏达, 温建辉, 宋亚玲, 王雪晶, 赵祎武, 黄文哲, 王振中, 萧伟 . 桂枝茯苓胶囊化学成分研究（VI）[J]. 中草药, 2016, 47(21): 3795-3797.
XIE Xue, ZHANG Hong-da, WEN Jian-hui, SONG Ya-ling, WANG Xue-jing, ZHAO Yi-wu, HUANG Wen-zhe, WANG Zhen-zhong, XIAO Wei . Studies on chemical constituents in Guizhi Fuling Capsule (VI)[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2016, 47(21): 3795-3797 .
桂枝茯苓胶囊化学成分研究（VI）
谢雪1,2,3, 张宏达1,2,3, 温建辉1,2,3, 宋亚玲1,2,3, 王雪晶1,2,3, 赵祎武1,2,3, 黄文哲1,2,3, 王振中1,2,3, 萧伟1,2,3     
1. 江苏康缘药业股份有限公司, 江苏 连云港 222000 ;
2. 中药制药过程新技术国家重点实验室, 江苏 连云港 222000 ;
3. 中药提取精制新技术重点研究室, 江苏 连云港 222000
收稿日期: 2016-06-13
基金项目: 科技部重大新药创制：现代中药创新集群与数字制药技术平台（2013ZX09402203）
作者简介: 谢雪, 女, 研究员, 主要从事中药化学成分研究工作.Tel:(0518)81152323 E-mail:0115jenny@163.com
摘要: 目的 对桂枝茯苓胶囊内容物正丁醇和醋酸乙酯萃取部位进行化学成分研究。 方法 采用多种色谱方法对桂枝茯苓胶囊内容物的正丁醇和醋酸乙酯萃取部位进行分离纯化，根据理化性质和波谱数据鉴定其结构。 结果 从醋酸乙酯和正丁醇层分离得到10个化合物，分别鉴定为对羟基苯甲酸（1）、反式邻甲氧基桂皮酸（2）、反式桂皮酸（3）、对香豆酸（4）、2，5-dihydroxy-4-methylacetophenone（5）、没食子酸乙酯（6）；从正丁醇层分离得到4个化合物，分别为香草酸（7）、原儿茶酸（8）、affinoside（9）、benzyl-β-D-glucopyranosyl-（1→6）-β-D-glucopyranoside（10）。 结论 化合物1~10均为首次从该复方中分离得到。
关键词: 桂枝茯苓胶囊     对香豆酸     2, 5-dihydroxy-4-methylacetophenone     原儿茶酸     affinoside     benzyl-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside    
Studies on chemical constituents in Guizhi Fuling Capsule (VI)
XIE Xue1,2,3, ZHANG Hong-da1,2,3, WEN Jian-hui1,2,3, SONG Ya-ling1,2,3, WANG Xue-jing1,2,3, ZHAO Yi-wu1,2,3, HUANG Wen-zhe1,2,3, WANG Zhen-zhong1,2,3, XIAO Wei1,2,3     
1. Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co., Ltd., Lianyungang 222000, China ;
2. State Key Laboratory of New-tech for Chinese Medicine Pharmaceutical Process, Lianyungang 222000 China ;
3. The Key Laboratory for the New Technique Research of TCM Extraction and Purification, Lianyungang 222000, China
Abstract: Objective To study the chemical constituents from the ethyl acetate and n-butanol extract of Guizhi Fuling Capsule. Methods The chemical constituents were isolated and purified by multiple chromatographic methods. Their structures were identified on the basis of the spectral data and physicochemical properties. Results Ten compounds were identified as 4-hydroxybenzoic acid (1), trans-O-methoxy cinnamic acid (2), trans-cinnamic acid (3), 4-hydroxycinnamic acid (4), 2, 5-dihydroxy-4-methylacetophenone (5), ethyl gallate (6), vanillic acid (7), protocatechuic acid (8), affinoside (9), and benzyl-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside (10). Conclusion Compounds 1—10 are isolated from this plant for the first time.
Key words: Guizhi Fuling Capsule     4-hydroxycinnamic acid     2, 5-dihydroxy-4-methylacetophenone     protocatechuic acid     affinoside     benzyl-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside    

桂枝茯苓胶囊由桂枝、茯苓、牡丹皮、桃仁和赤芍5味中药组成，是东汉张仲景的经典名方桂枝茯苓汤的现代剂型，具有化瘀、消癥、活血等功效。临床上主要用于治疗卵巢囊肿、子宫肌瘤、痛经、慢性盆腔炎、子宫内膜异位等妇科疾病[1]，米内网数据显示其在妇科其他类产品中市场占有率达14.8%。目前桂枝茯苓胶囊在化学成分研究方面已取得较大成果，累计从制剂中分离得到化合物80余个[2-6]，为了进一步阐明该复方的药效物质基础，支持桂枝茯苓胶囊标准化建设工作，本研究将桂枝茯苓胶囊复方作为一个有机整体，采用现代中药化学方法对其中化学成分进行分离纯化、结构鉴定，探索其药效物质基础及药物配伍后是否有新的化学成分产生。在前期研究的基础上，本实验对桂枝茯苓胶囊进行了进一步的化学成分研究，从醋酸乙酯和正丁醇层分离得到10个化合物，分别鉴定为对羟基苯甲酸（4-hydroxybenzoic acid，1）、反式邻甲氧基桂皮酸（trans-O-methoxy cinnamic acid，2）、反式桂皮酸（trans-cinnamic acid，3）、对香豆酸（4-hydroxycinnamic acid，4）、2, 5-dihydroxy-4-methylacetophenone（5）、没食子酸乙酯（ethyl gallate，6）；从正丁醇层分离得到4个化合物，分别鉴定为香草酸（vanillic acid，7）、原儿茶酸（protocatechuic acid，8）、affinoside（9）、benzyl-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside（10）。化合物1～10为首次从该复方中分离得到。

1 仪器与材料

Bruker-AV-400型核磁共振光谱仪（Bruker公司）；Agilent 1260制备型高效液相色谱仪（Agilent公司）；Sephadex LH-20（Pharmacia公司）；柱色谱及薄层硅胶（青岛海洋化工厂）；Fuji C18（250 nm×50 nm，5 μm）；色谱纯乙腈（Oceanpak公司）；分析纯试剂（南京化学试剂有限公司）。桂枝茯苓胶囊（批号130201）由江苏康缘药业股份有限公司提供。

2 提取与分离

桂枝茯苓胶囊内容物15.0 kg，以95%乙醇回流提取4次，每次2 h，提取液经减压浓缩至浸膏，制成水混悬液后依次用石油醚、氯仿、醋酸乙酯和正丁醇萃取，各4次，合并萃取液后蒸干备用。取醋酸乙酯萃取部位浸膏（300 g），经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇（30:1→1:1）梯度洗脱，得9个流分Fr. A1～A9。其中Fr. A1经Sephadex LH-20柱色谱，二氯甲烷-甲醇（1:1）洗脱后，再经制备型HPLC，以35%乙腈为流动相洗脱，得到化合物1（27 mg）、2（16 mg）、3（15 mg）、4（35 mg）、5（7 mg）和6（100 mg）。

取正丁醇萃取部位浸膏（500 g），经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇（20:1→0:1）梯度洗脱，得7个流分Fr. B1～B7。将Fr. B3经Sephadex LH-20柱色谱，以二氯甲烷-甲醇（1:1）洗脱，经制备型HPLC分离，以15%乙腈反复纯化后，得到化合物7（100 mg）、8（20 mg）。Fr. B6经Sephadex LH-20柱色谱，以二氯甲烷-甲醇（1:1）洗脱，经制备型HPLC分离，以10%乙腈反复纯化后，得到化合物9（30 mg）、10（40 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：白色粉末，ESI-MS m/z: 137 [M－H]−。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.88 (2H, d, J=8.9 Hz, H-2, 6), 6.82 (2H, d, J=8.8 Hz, H-3, 5)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 170.1 (COOH), 163.4 (C-4), 133.0 (C-2, 6), 122.8 (C-1), 116.1 (C-3, 5)。以上数据与文献报道[7]一致，故鉴定化合物1为对羟基苯甲酸。

化合物2：白色粉末，ESI-MS m/z: 177 [M－H]−。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.97 (1H, d, J=16.1 Hz, H-7), 7.56 (1H, dd, J=7.7, 1.4 Hz, H-6), 7.37 (2H, td, J=7.7, 1.4 Hz, H-4, 6), 7.03 (1H, d, J=8.3 Hz, H-3), 6.96 (1H, t, J=7.5 Hz, H-5), 6.51 (1H, d, J=16.1 Hz, H-8), 3.89 (3H, s, OCH3)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 169.8 (C=O), 158.3 (C-2), 140.0 (C-7), 131.4 (C-4), 128.2 (C-6), 123.0 (C-1), 120.4 (C-8), 118.3 (C-5), 111.0 (C-3), 54.7 (OCH3)。以上数据与文献报道[8]一致，故鉴定化合物2为反式邻甲氧基桂皮酸。

化合物3：无色针晶（甲醇），ESI-MS m/z: 147 [M－H]−。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.68 (1H, d, J=16.0 Hz, H-7), 7.57 (2H, m, H-3, 5), 7.39 (3H, m, H-2, 4, 6), 6.48 (1H, d, J=16.0 Hz, H-8)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 169.0 (C-9), 145.0 (C-8), 134.4 (C-1), 130.0 (C-4), 128.6 (C-2, 6), 127.8 (C-3, 5), 118.0 (C-7)。以上数据与文献报道[9]一致，故鉴定化合物3为反式桂皮酸。

化合物4：无色针晶（甲醇），ESI-MS m/z: 163 [M－H]−。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.60 (1H, d, J=15.9 Hz, H-α), 7.45 (2H, d, J=8.6 Hz, H-2, 6), 6.81 (2H, d, J=8.6 Hz, H-3, 5), 6.28 (1H, d, J=15.9 Hz, H-β)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 171.1 (C-9), 161.2 (C-4), 146.7 (C-7), 131.1 (C-2), 127.3 (C-1), 116.9 (C-3, 5), 115.7 (C-8)。以上数据与文献报道[10]一致，故鉴定化合物4为对香豆酸。

化合物5：白色粉末，ESI-MS m/z: 165 [M－H]−。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.12 (1H, s, H-6), 6.66 (1H, s, H-3), 2.53 (3H, s, COCH3), 2.20 (3H, s, CH3)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 202.3 (C-7), 153.8 (C-5), 146.0 (C-2), 134.8 (C-4), 117.3 (C-3), 115.7 (C-1), 112.3 (C-6), 23.7 (C-8), 14.0 (C-9)。以上数据与文献报道[11]一致，故鉴定化合物5为2, 5-dihydroxy-4-methylacetophenone。

化合物6：无色针晶（甲醇），ESI-MS m/z: 197 [M－H]−。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.05 (2H, s, H-2, 6), 4.27 (2H, q, J=7.0 Hz, H-8), 1.34 (3H, t, J=7.0 Hz, H-9)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 167.2 (C-7), 145.1 (C-3, 5), 138.3 (C-4), 120.4 (C-1), 108.6 (C-2, 6), 60.3 (C-8), 13.2 (C-9)。以上数据与文献报道[12]一致，故鉴定化合物6为没食子酸乙酯。

化合物7：白色粉末，ESI-MS m/z: 167 [M－H]−。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.56 (2H, m, H-2, 6), 6.84 (1H, d, J=7.8 Hz, H-5), 3.89 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 170.0 (COOH), 152.5 (C-4), 148.5 (C-3), 125.1 (C-6), 123.0 (C-1), 115.7 (C-5), 113.7 (C-2), 56.2 (OCH3)。以上数据与文献报道[7]一致，故鉴定化合物7为香草酸。

化合物8：白色粉末，ESI-MS m/z: 153 [M－H]−。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.42 (2H, m, H-2, 6), 6.79 (1H, d, J=8.1 Hz, H-5)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 170.3 (C-7), 151.4 (C-4), 145.9 (C-3), 123.8 (C-5), 123.3 (C-1), 117.6 (C-2), 115.6 (C-6)。以上数据与文献报道[10]一致，故鉴定化合物8为原儿茶酸。

化合物9：白色粉末，ESI-MS m/z: 459 [M－H]−。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.75 (1H, d, J=8.8 Hz, H-6), 6.85 (1H, d, J=2.1 Hz, H-3), 6.67 (1H, dd, J=8.8, 2.1 Hz, H-5), 5.06 (1H, d, J=7.5 Hz, H-1′), 4.26 (1H, d, J=6.8 Hz, H-1″), 4.12 (1H, dd, J=11.3, 1.9 Hz, H-6′b), 3.88 (3H, s, OCH3), 3.83 (1H, dd, J=12.4, 5.1 Hz, H-5″b), 3.78 (1H, dd, J=11.6, 6.6 Hz, H-6′a), 3.70 (2H, m, H-2′, 5′), 3.57～3.38 (5H, m, H-3′, 4′, 2″, 3″, 5″a), 2.64 (3H, s, CH3)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 199.1 (C=O), 164.9 (C-4), 159.1 (C-2), 131.6 (C-6), 121.4 (C-1), 107.9 (C-5), 103.8 (C-1″), 101.6 (C-3), 101.0 (C-1′), 76.7 (C-3′), 76.0 (C-3″), 73.5 (C-5′), 72.8 (C-2″), 71.0 (C-2′), 69.9 (C-4′), 68.4 (C-4″), 68.1 (C-6′), 65.4 (C-5″), 55.1 (OCH3), 30.7 (CH3)。以上数据与文献报道[13]一致，故鉴定化合物9为affinoside。

化合物10：白色粉末，ESI-MS m/z: 433 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.43～7.26 (5H, m, H-2～6), 4.92 (1H, d, J=11.8 Hz, H-7), 4.66 (1H, d, J=11.8 Hz, H-7), 4.42 (1H, d, J=7.7 Hz, H-1′), 4.37 (1H, d, J=7.7 Hz, H-1″), 4.17 (1H, dd, J=11.6, 1.9 Hz, H-6′), 3.87 (1H, dd, J=11.9, 1.8 Hz, H-6″), 3.81 (1H, dd, J=11.6, 5.8 Hz, H-6′), 3.67 (1H, dd, J=11.9, 5.3 Hz, H-6″), 3.47 (1H, m, H-4′), 3.39～3.21 (7H, m, H-2′, 3′, 5′, 2′′, 3′′, 4′′, 5′′)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 139.1 (C-1), 129.3 (C-2, 6), 129.3 (C-3, 5), 128.7 (C-4), 104.9 (C-1″), 103.5 (C-1′), 78.1 (C-3′), 78.0 (C-5″), 77.2 (C-5′), 75.2 (C-2″), 75.1 (C-2′), 72.0 (C-7), 71.6 (C-4″), 71.5 (C-4′), 69.8 (C-6′), 62.8 (C-6″)。以上数据与文献报道[14]一致，故鉴定化合物10为benzyl-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside。

4 讨论

桂枝茯苓胶囊是江苏康缘药业股份有限公司在桂枝茯苓丸的基础上研发而成。目前报道的关于桂枝茯苓胶囊的相关研究较为深入，研究内容包括药材及成品化学成分、药理、药代、质量标准、生产工艺等方面，显现出了系统化的研究思路，即以药理药代研究指认的功效成分为基础，开展产品功效相关的质量标准、自动化控制体系建设研究，形成了“以桂枝茯苓胶囊为示范的现代中药功效相关质量标准体系”，获得2015年度国家科技进步二等奖。本研究进一步明确了桂枝茯苓胶囊成分基础，为产品的质量标准提升、过程控制体系完善以及桂枝茯苓方系列产品的标准化建设、指标成分筛选等方面提供了参考。

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