2016, Vol. 47
引用本文 | doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.20.004 |
多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua为多年生草本阴性植物，系百合科（Liliaceae）黄精属Polygonatum Mill. 药用植物，以其根茎入药，具有补气润肺、养阴生津、益肾补脾、延年益寿等功效。现代药理学研究证明，多花黄精具有抗衰老、抗肿瘤、降血糖、调血脂、抗粥样动脉硬化、抗病毒、抗菌、提高机体免疫功能等多种药理作用[1]。目前，对多花黄精化学成分的研究主要集中在块状根部分，主要化学成分为黄酮类、三萜皂苷类和木脂素类化合物[2-3]。但是，对其地上部分化学成分的研究尚未见文献报道，为了更好地开发利用多花黄精的地上部分，本实验对多花黄精地上部分的化学成分进行了研究，从其甲醇提取物中分离得到15个化合物，分别鉴定为 (3R)-5,7-dihydroxy-3-(2′-hydroxy-4′-methoxybenzyl)-chroman-4-one（1）、5,7-dihydroxy- 6-methyl-3-(2′,4′-dihydroxybenzyl)-chroman-4-one（2）、5,7-dihydroxy-6-methyl-3-(4′-hydroxybenzyl)- chroman-4-one（3）、(3S)-3,7-dihydroxy-8-methoxy-3-(3′,4′-methylenedioxybenzyl) chroman-4-one（4）、芹菜素（apigenin，5）、山柰酚（kaempferol，6）、香草酸（vanillic acid，7）、反式对羟基桂皮酸（trans-p-hydroxycinnamic acid，8）、反式对羟基桂皮酸甲酯（trans-p-hydroxycinnamic acid methyl ester，9）、水杨酸（saliylic acid，10）、(+)-丁香脂酸 [(+)-syringaresinol，11]、balanophonin B（12）、咖啡酸（caffeic acid，13）、苯丙氨酸（phenylalanine，14）和松柏醛（coniferaldehyde，15）。其中，化合物1、2、7、11、14和15为首次从多花黄精中分离得到，化合物3、4和12为首次从黄精属植物中分离得到。
1 仪器与材料XRC-1型显微熔点仪（四川大学科仪厂）；Bruker DRX-500型核磁共振仪（Bruker公司）；VG AUTO spec-3000质谱仪（VG仪器公司）。柱色谱用硅胶（100～200、200～300目）和薄层色谱用硅胶GF254均由青岛海洋化工厂生产。反相用材料RP18为Merck公司产品。Sephadex LH-20由Fluka公司生产。其余试剂均为分析纯。
本实验所用的多花黄精采自浙江临安天目山自然保护区，由浙江农林大学桂仁意副教授鉴定为多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua。植物标本（ZA140605）保存于浙江农林大学天然产物研究室。
2 提取与分离干燥的多花黄精地上部分（5 kg），粉碎，用甲醇室温浸提，合并提取液，减压浓缩得到甲醇总浸膏。将甲醇总浸膏分散在蒸馏水中悬浮，分别用石油醚、醋酸乙酯和正丁醇进行萃取，浓缩后分别得到石油醚浸膏（48 g）、醋酸乙酯浸膏（50 g）和正丁醇浸膏（77 g）。醋酸乙酯浸膏再经硅胶（200～300目）柱色谱，氯仿-甲醇（100∶0→0∶100）梯度洗脱，TLC检测合并为7个组分Fr. 1～7。Fr. 3再进行硅胶柱色谱分离，氯仿-丙酮（10∶1→1∶1）梯度洗脱，TLC检测后合并为4个部分Fr. 3A～3D。Fr. 3B用Sephadex LH-20（甲醇）纯化得到化合物7（9.2 mg）、9（8.8 mg）和13（10.2 mg）。Fr. 4进行硅胶柱色谱分离，用氯仿-甲醇（10∶1→1∶1）梯度洗脱，再用MCI和制备薄层色谱分离得到化合物8（7.9 mg）、10（9.1 mg）、14（9.7 mg）和15（9.7 mg）。Fr. 5进行RP18分离，用甲醇-水（10∶90→80∶20）梯度洗脱，TLC检测后合并为3个部分Fr. 5A～5C。Fr. 5B用Sephadex LH-20（氯仿-丙酮1∶1）分离得到化合物1（8.2 mg）、2（10.5 mg）、3（11.9 mg）和4（9.9 mg）。Fr. 6进行RP18分离，用甲醇-水梯度洗脱，再用Sephadex LH-20（甲醇）和制备薄层色谱分离得到化合物5（8.9 mg）、6（14.7 mg）、11（12.1 mg）和12（9.8 mg）。
3 结构鉴定化合物1：浅黄色粉末。1H-NMR (500 MHz,CD3OD) δ: 6.88 (1H,d,J = 8.0 Hz,H-6′),6.31 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-3′),6.28 (1H,dd,J = 8.0,2.0 Hz,H-5′),5.76 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-6),5.70 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-8),4.14 (1H,dd,J = 11.5,4.5 Hz,H-2α),4.01 (1H,dd,J = 11.5,8.0 Hz,H-2β),3.73 (3H,s,4′-OCH3),3.15 (1H,dd,J = 13.5,4.5 Hz,H-9α),2.84 (1H,m,H-3),2.56 (1H,dd,J = 13.5,9.5 Hz,H-9β)；13C-NMR (125 MHz,CD3OD) δ: 200.9 (C-3),168.8 (C-7),165.7 (C-5),164.9 (C-8a),161.4 (C-4′),157.8 (C-2′),132.6 (C-6′),118.6 (C-1′),105.8 (C-5′),102.7 (C-4a),102.5 (C-3′),97.2 (C-6),96.1 (C-8),70.5 (C-2),55.9 (C-4′-OCH3),46.5 (C-3),28.3 (C-9)。以上数据与文献报道一致[4]，故鉴定化合物1为(3R)-5,7-dihydroxy- 3-(2′-hydroxy-4′-methoxybenzyl)-chroman-4-one。
化合物2：浅黄色粉末。1H-NMR (500 MHz,CD3OD) δ: 6.81 (1H,d,J = 8.5 Hz,H-6′),6.25 (1H,d,J = 2.5 Hz,H-3′),6.16 (1H,dd,J = 8.5,2.5 Hz,H-5′),5.80 (1H,s,H-8),4.15 (1H,dd,J = 11.5,4.0 Hz,H-2α),4.02 (1H,dd,J = 11.5,7.0 Hz,H-2β),3.07 (1H,dd,J = 13.5,5.0 Hz,H-9α),2.88 (1H,m,H-3),2.53 (1H,dd,J = 13.5,10.0 Hz,H-9β),1.88 (3H,s,6-CH3)；13C-NMR (125 MHz,CD3OD) δ: 200.1 (C-4),165.8 (C-5),162.9 (C-7),162.4 (C-8a),158.4 (C-4′),157.6 (C-2′),132.6 (C-6′),116.8 (C-1′),107.5 (C-5′),105.2 (C-6),103.6 (C-3′),102.5 (C-4a),94.9 (C-8),70.5 (C-2),46.5 (C-3),6.9 (6-CH3)。以上数据和文献报道一致[5]，故鉴定化合物2为5,7-dihydroxy-6-methyl-3-(2′,4′-dihydroxybenzyl)-chroman-4-one。
化合物3：浅黄色粉末。1H-NMR (500 MHz,CD3OD) δ: 7.04 (2H,dd,J = 8.5,2.5 Hz,H-2′,6′),6.74 (2H,dd,J = 8.5,2.5 Hz,H-3′,5′),5.95 (1H,s,H-8),4.21 (1H,dd,J = 11.5,4.0 Hz,H-2α),4.05 (1H,dd,J = 11.5,7.0 Hz,H-2β),3.09 (1H,dd,J = 13.5,5.0 Hz,H-9α),2.78 (1H,m,H-3),2.63 (1H,dd,J = 13.5,10.0 Hz,H-9β),1.94 (3H,s,6-CH3)；13C-NMR (125 MHz,CD3OD) δ: 200.0 (C-4),166.4 (C-5),163.3 (C-7),162.4 (C-8a),157.6 (C-4′),131.5 (C-2′,6′),130.6 (C-1′),116.8 (C-3′,5′),105.6 (C-6),102.9 (C-4a),95.2 (C-8),70.5 (C-2),48.5 (C-3),33.6 (C-9),7.4 (6-CH3)。以上数据和文献报道一致[6]，故鉴定化合物3为5,7-dihydroxy-6-methyl-3-(4′-hydroxybenzyl)- chroman-4-one。
化合物4：浅黄色粉末。1H-NMR (500 MHz,CDCl3) δ: 7.62 (1H,d,J = 8.5 Hz,H-5),6.76 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-6,5′),6.74 (1H,brs,H-2′),6.64 (1H,d,J = 8.5 Hz,H-6′),5.96 (2H,s,-OCH2O-),4.42 (1H,d,J = 11.5 Hz,H-2α),4.15 (1H,d,J = 11.5 Hz,H-2β),3.99 (3H,s,8-OCH3)；13C-NMR (125 MHz,CDCl3) δ: 194.5 (C-4),156.1 (C-7),154.6 (C-8a),147.6 (C-3′),146.7 (C-4′),134.9 (C-8),128.0 (C-1′),123.8 (C-5),123.5 (C-6′),113.1 (C-4a),110.9 (C-2′),110.5 (C-6′),108.2 (C-5′),100.9 (C-OCH2O-),72.8 (C-2),72.6 (C-3),61.5 (8-OCH3),40.8 (C-9)。以上数据和文献报道一致[7]，故鉴定化合物4为 (3S)-3,7-dihydroxy-8-methoxy-3-(3′,4′-methylenedioxybenzyl)-chroman-4-one。
化合物5：黄色粉末。1H-NMR (500 MHz,CD3OD) δ: 7.94 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-2′,6′),6.93 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-3′,5′),6.77 (1H,s,H-3),6.49 (1H,brs,H-8),6.18 (1H,brs,H-6)；13C-NMR (125 MHz,CD3OD) δ: 181.8 (C-4),164.0 (C-2),163.8 (C-7),161.5 (C-5),161.2 (C-4′),157.4 (C-9),128.6 (C-2′,6′),121.3 (C-1′),115.9 (C-3′,5′),103.8 (C-10),102.7 (C-3),98.9 (C-6),93.8 (C-8)。以上数据与文献报道一致[8]，故鉴定化合物5为芹菜素。
化合物6：黄色粉末。1H-NMR (500 MHz,CD3OD) δ: 8.04 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-2′,6′),6.89 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-3′,5′),6.38 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-8),6.16 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-6)；13C-NMR (125 MHz,CD3OD) δ: 177.4 (C-4),165.6 (C-7),162.6 (C-5),160.5 (C-4′),158.3 (C-9),148.0 (C-2),137.0 (C-3),130.7 (C-2′,6′),123.7 (C-1′),116.2 (C-3′,5′),104.6 (C-10),99.3 (C-6),94.6 (C-8)。以上数据与文献报道一致[9]，故鉴定化合物6为山柰酚。
化合物7：无色粉末。1H-NMR (500 MHz,CD3OD) δ: 7.57 (1H,brs,H-2),7.55 (1H,dd,J = 8.5,2.0 Hz,H-6),6.83 (1H,d,J = 8.5 Hz,H-5),3.89 (3H,s,4-OCH3)；13C-NMR (125 MHz,CD3OD) δ: 170.1 (COOH),152.6 (C-3),148.7 (C-4),125.3 (C-6),123.1 (C-1),115.7 (C-2),113.9 (C-5),56.5 (4-OCH3)。以上数据和文献报道一致[10]，故鉴定化合物7为香草酸。
化合物8：白色针状晶体（甲醇）。1H-NMR (500 MHz,CD3OD) δ: 7.58 (1H,d,J = 15.5 Hz,H-7),7.43 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-2,6),6.80 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-3,5),6.29 (1H,d,J = 15.5 Hz,H-8)；13C-NMR (125 MHz,CD3OD) δ: 171.1 (C-9),161.0 (C-4),146.4 (C-7),131.0 (C-2,6),127.2 (C-1),116.7 (C-3,5),116.0 (C-8)。以上数据和文献报道一致[11]，故鉴定化合物8为反式对羟基桂皮酸。
化合物9：白色针状晶体（甲醇）。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6) δ: 10.09 (1H,brs,H-OH),7.58 (1H,d,J = 15.5 Hz,H-7),7.55 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-2,6),6.79 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-3,5),6.40 (1H,d,J = 15.5 Hz,H-8),3.68 (3H,s,9-OCH3)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6) δ: 170.1 (C-9),159.8 (C-4),144.8 (C-7),130.4 (C-2,6),125.0 (C-1),115.8 (C-3,5),113.7 (C-8),51.1 (9-OCH3)。以上数据和文献报道一致[11]，故鉴定化合物9为反式对羟基桂皮酸甲酯。
化合物10：无色针状晶体（甲醇）。1H-NMR (500 MHz,CDCl3) δ: 7.94 (1H,dd,J = 8.0,2.0 Hz,H-6),7.52 (1H,m,H-4),7.01 (1H,d,J = 8.0 Hz,H-3),6.94 (1H,m,H-5)；13C-NMR (125 MHz,CDCl3) δ: 174.0 (C-7),162.1 (C-2),136.9 (C-4),119.4 (C-5),111.4 (C-1),117.7 (C-3),130.9 (C-6)。以上数据和文献报道一致[12]，故鉴定化合物10为水杨酸。
化合物11：白色片状晶体（甲醇）。1H-NMR (500 MHz,CD3OD) δ: 6.67 (4H,s,H-2,2′,6,6′),4.72 (2H,d,J = 4.5 Hz,H-7,7′),4.25 (2H,dd,J = 9.0,7.0 Hz,H-9α,9′α),3.88 (2H,dd,J = 9.0,3.5 Hz,H-9β,9′β),3.86 (12H,s,3,3′,5,5′-OCH3),3.16 (2H,m,H-8,8′)；13C-NMR (125 MHz,CD3OD) δ: 149.6 (C-3,3′,5,5′),136.3 (C-4,4′),133.3 (C-1,1′),104.4 (C-2,2′,6,6′),87.9 (C-7,7′),72.9 (C-9,9′),56.8 (3,3′,5,5′-OCH3),55.6 (C-8,8′)。以上数据和文献报道一致[13]，故鉴定化合物11为 (+)-丁香脂酸。
化合物12：白色粉末。1H-NMR (500 MHz,CD3OD) δ: 6.98 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-3′),6.94 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-3),6.87 (1H,dd,J = 8.0,2.0 Hz,H-5′),6.85 (1H,dd,J = 8.0,2.0 Hz,H-5),6.82 (1H,d,J = 8.0 Hz,H-6′),6.80 (1H,d,J = 8.0 Hz,H-6),5.40 (1H,d,J = 4.5 Hz,H-7′),5.23 (1H,d,J = 4.5 Hz,H-7),4.30 (1H,m,H-9α),4.04 (1H,m,H-9β),3.88 (3H,s,2′-OCH3),3.86 (3H,s,2-OCH3),3.66 (1H,m,H-8′),3.36 (1H,d,J = 4.5 Hz,H-8)；13C-NMR (125 MHz,CD3OD) δ: 179.9 (C-9),149.7 (C-2′),149.5 (C-2),148.6 (C-1′),147.8 (C-1),133.5 (C-4′),132.6 (C-4),120.1 (C-5′),119.8 (C-5),116.8 (C-6′),116.4 (C-6),111.0 (C-3′),110.9 (C-3),87.4 (C-7′),85.4 (C-7),74.1 (C-9′),56.8 (2′-OCH3),56.7 (2-OCH3),54.8 (C-8′),51.3 (C-8)。以上数据和文献报道一致[14]，故鉴定化合物12为balanophonin B。
化合物13：淡黄色粉末。1H-NMR (500 MHz,CD3OD) δ: 6.19 (1H,d,J = 16.0 Hz,H-8),6.78 (1H,d,J = 8.0 Hz,H-5),6.93 (1H,dd,J = 8.0,2.0 Hz,H-6),7.00 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-2),7.52 (1H,d,J = 16.0 Hz,H-7)；13C-NMR (125 MHz,CD3OD) δ: 127.9 (C-1),115.8 (C-2),146.9 (C-3),149.4 (C-4),116.7 (C-5),122.8 (C-6),147.1 (C-7),115.1 (C-8),171.3 (C-9)。以上数据和文献报道基本一致[15]，故鉴定化合物13为咖啡酸。
化合物14：白色粉末。1H-NMR (500 MHz,D2O) δ: 7.36 (2H,d,J = 8.0 Hz,H-2,6),7.30 (1H,dd,J = 8.0,1.5 Hz,H-4),7.24 (2H,d,J = 8.0 Hz,H-3,5),3.90 (1H,t,J = 6.5 Hz,H-8),3.21 (1H,dd,J = 14.5,5.0 Hz,H-7α),3.04 (1H,dd,J = 14.5,5.0 Hz,H-7β)；13C-NMR (125 MHz,D2O) δ: 173.9 (C-9),135.2 (C-1),129.4 (C-3,5),129.2 (C-2,6),127.6 (C-4),56.1 (C-8),36.4 (C-7)。以上数据和文献报道基本一致[16]，故鉴定化合物14为苯丙氨酸。
化合物15：淡黄色粉末。1H-NMR (500 MHz,CDCl3) δ: 9.63 (1H,d,J = 7.5 Hz,H-9),7.39 (1H,d,J = 16.0 Hz,H-7),7.12 (1H,dd,J = 8.0,2.0 Hz,H-5),7.09 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-2),6.93 (1H,d,J = 8.0 Hz,H-6),6.58 (1H,dd,J = 16.0,8.0 Hz,H-8),3.95 (3H,s,2-OCH3)；13C-NMR (125 MHz,CDCl3) δ: 193.8 (C-8),153.5 (C-7),149.2 (C-1),147.0 (C-2),126.9 (C-4),126.5 (C-8),124.4 (C-5),115.2 (C-6),109.7 (C-3),56.1 (2-OCH3)。以上数据和文献报道一致[17]，故鉴定化合物15为松柏醛。
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