2. 沈阳药科大学中药学院, 辽宁 沈阳 110016
2. School of Traditional Chinese Materia Medica, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China
半枝莲Scutellariae Barbatae Herba为唇形科(Lamiaceae)黄芩属Scutellaria Linn.植物半枝莲Scutellaria barbata D. Don的干燥全草,夏、秋二季茎叶茂盛时采挖,洗净,晒干[1]。半枝莲具有清热解毒、化瘀利尿的功效,临床常用于治疗疔疮肿毒、咽喉肿痛、黄疸、水肿和蛇虫咬伤。现代药理学研究表明,半枝莲具有良好的抗肿瘤活性,对原发性肝癌、肺癌和宫颈癌等具有良好的治疗作用[2]。半枝莲黄酮是其活性成分之一,为阐明其药效物质基础,本实验对半枝莲乙醇提取物进行化学成分研究,共分离鉴定了14个黄酮类化合物,分别为高车前素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯(hispidulin-7-O-β-D-methylgluzcuronide,1)、芹菜素(apigenin,2)、野黄芩苷(scutellarin,3)、野黄芩素(scutellarein,4)、木犀草素(luteolin,5)、野黄芩苷甲酯(scutellarein-7-O-β-D-glucuronide methyl ester,6)、异高山黄芩素-8-O-β-D-葡萄糖醛酸苷6″-甲酯(isoscutellarein-8-O-β-D-glucuronide-6″-methyl ester,7)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷-6″-甲酯(apigenin-7-O-β-D-glucuronide-6″-methyl ester,8)、4′-羟基汉黄芩素(4′-hydroxywogonin,9)、5, 4′-二羟基-6, 7, 3′, 5′-四甲氧基黄酮(5, 4′-dihydroxy-6, 7, 3′, 5′-tetramethoxy-flavone,10)、异高山黄芩素(isoscutellarein,11)、6-羟基木犀草素(6-hydroxyluteolin,12)、5-羟基-6, 7, 3′, 4′-四甲氧基黄酮(5-hydroxy-6, 7, 3′, 4′-tetramethoxyflavone,13)、三裂鼠尾草素(salvigenin,14)。其中化合物7为首次从唇形科植物中分离得到,化合物1和13为首次从黄芩属植物中分离得到,化合物6和12为首次从半枝莲中发现。
1 仪器与材料RE-52AA旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司);Bruker Avance 600型核磁共振仪(Bruker公司);ZF-1型三用紫外分析仪(上海精科实业有限公司);柱色谱用聚酰胺及聚酰胺薄膜均为浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂生产;柱色谱用硅胶及薄层色谱硅胶均为青岛海洋化工有限公司分厂制造;AB-8大孔吸附树脂为沧州宝恩吸附材料有限公司生产;ODS和Sephadex LH-20柱色谱为美国General Electric Healthcare公司生产;所有试剂均为分析纯。
药材购自辽宁省沈阳市文化路国大一致药店,经沈阳药科大学中药学院路金才教授鉴定为半枝莲Scutellaria barbata D. Don的干燥地上部分。
2 提取与分离半枝莲干燥的地上部分29.5 kg,用95%的工业乙醇回流提取3次,每次2 h,合并提取液后减压浓缩得浸膏约4 kg。浸膏用水混悬,依次用等体积石油醚(60~90 ℃)、二氯甲烷、醋酸乙酯、水饱和正丁醇各萃取3次。分别得到石油醚萃取物560 g、二氯甲烷萃取物230 g、醋酸乙酯萃取物200 g和正丁醇萃取物730 g。二氯甲烷萃取物经硅胶柱石油醚-丙酮(100:11→0:100)系统梯度洗脱,石油醚-丙酮100:20部分经ODS柱甲醇-水(5:95→100:0)系统梯度洗脱,得到化合物10(200 mg)、13(7 mg)和14(20 mg)。醋酸乙酯萃取物经硅胶柱二氯甲烷-甲醇(100:1→100:7)系统梯度洗脱,在二氯甲烷-甲醇100:0部位减压浓缩得到化合物9(500 mg);二氯甲烷-甲醇100:4部分经聚酰胺柱二氯甲烷-甲醇(35:1→0:1)系统梯度洗脱,得到化合物2(100 mg)、4(120 mg)和11(7 mg)。正丁醇萃取物经AB-8大孔树脂柱,乙醇-水(10:90→100:0)梯度洗脱,50%乙醇-水部位减压浓缩得到化合物3(200 mg);80%乙醇-水部分经聚酰胺柱二氯甲烷-甲醇(35:1→1:1)梯度洗脱,二氯甲烷-甲醇14:1部位减压浓缩得到化合物1(300 mg),二氯甲烷-甲醇13:1部分经Sephadex LH-20柱,甲醇洗脱,得到化合物8(20 mg),二氯甲烷-甲醇3:1部分经Sephadex LH-20柱,甲醇洗脱,得到化合物5(35 mg);60~70%乙醇-水部分经聚酰胺柱,二氯甲烷-甲醇(33:1→1:1)梯度洗脱,得到化合物6(55 mg)、7(9.5 mg)和12(10 mg)。
3 结构鉴定化合物1:黄色粉末(甲醇),三氯化铁显色剂反应呈阳性。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 12.69 (1H, s, 5-OH), 10.44 (1H, brs, 4′-OH), 7.94 (2H, d, J=8.7 Hz, H-2′, 6′), 6.96 (2H, d, J=8.7 Hz, H-3′, 5′), 6.87 (1H, s, H-8), 6.67 (1H, s, H-3), 5.32 (1H, d, J=7.1 Hz, H-1″), 3.87 (3H, s, 6-OCH3), 3.67 (3H, s, 6″-OCH3);13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 164.2 (C-2), 102.9 (C-3), 182.2 (C-4), 149.1 (C-5), 129.2 (C-6), 156.0 (C-7), 98.4 (C-8), 155.6 (C-9), 105.2 (C-10), 121.2 (C-1′), 128.6 (C-2′, 6′), 116.2 (C-3′, 5′), 161.5 (C-4′), 99.5 (C-1″), 72.9 (C-2″), 75.6 (C-3″), 71.3 (C-4″), 75.1 (C-5″), 169.2 (C-6″), 61.4 (6-OCH3), 52.0 (6″-OCH3)。以上数据与文献报道基本一致[3],故鉴定化合物1为高车前素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯。
化合物2:浅黄色粉末(甲醇),mp 340~342 ℃,三氯化铁显色剂反应呈阳性。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 12.96 (1H, s, 5-OH), 10.78 (1H, brs, 7-OH), 10.40 (1H, brs, 4′-OH), 7.92 (2H, d, J=8.5 Hz, H-2′, 6′), 6.92 (2H, d, J=8.5 Hz, H-3′, 5′), 6.78 (1H, s, H-3), 6.48 (1H, brs, H-8), 6.19 (1H, brs, H-6);13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 164.2 (C-2), 102.8 (C-3), 181.8 (C-4), 157.3 (C-5), 98.8 (C-6), 163.7 (C-7), 94.0 (C-8), 161.4 (C-9), 103.7 (C-10), 121.2 (C-1′), 128.5 (C-2′, 6′), 116.0 (C-3′, 5′), 161.2 (C-4′)。以上数据与文献报道基本一致[4],故鉴定化合物2为芹菜素。
化合物3:黄色针状结晶(甲醇),mp 235 ℃,三氯化铁显色剂反应呈阳性。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 12.74 (1H, s, 5-OH), 10.38 (1H, brs, 4′-OH), 8.60 (1H, brs, 6-OH), 7.93 (2H, d, J=8.7 Hz, H-2′, 6′), 6.99 (1H, s, H-8), 6.94 (2H, d, J=8.7 Hz, H-3′, 5′), 6.82 (1H, s, H-3), 5.22 (1H, d, J=7.6 Hz, H-1″);13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 164.1 (C-2), 102.6 (C-3), 182.4 (C-4), 151.0 (C-5), 130.5 (C-6), 146.9 (C-7), 93.6 (C-8), 149.0 (C-9), 105.9 (C-10), 121.3 (C-1′), 128.4 (C-2′, 6′), 116.0 (C-3′, 5′), 161.2 (C-4′), 100.0 (C-1″), 71.3 (C-2″), 75.3 (C-3″), 75.5 (C-4″), 72.8 (C-5″), 170.1 (C-6″)。以上数据与文献报道基本一致[5],故鉴定化合物3为野黄芩苷。
化合物4:黄色针状结晶(乙醇-水),三氯化铁显色剂反应呈阳性。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 12.79 (1H, s, 5-OH), 10.15 (3H, brs, 6, 7, 4′-OH), 7.91 (2H, d, J=8.5 Hz, H-2′, 6′), 6.92 (2H, d, J=8.5 Hz, H-3′, 5′), 6.74 (1H, s, H-3), 6.57 (1H, s, H-8);13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 163.5 (C-2), 102.2 (C-3), 182.0 (C-4), 147.0 (C-5), 129.1 (C-6), 153.4 (C-7), 93.8 (C-8), 149.7 (C-9), 103.9 (C-10), 121.5 (C-1′), 128.3 (C-2′, 6′), 115.9 (C-3′, 5′), 161.0 (C-4′)。以上数据与文献报道基本一致[6],故鉴定化合物4为野黄芩素。
化合物5:黄色粉末(甲醇),三氯化铁显色剂反应呈阳性。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 12.97 (1H, s, 5-OH), 10.62 (1H, brs, 7-OH), 9.71 (2H, brs, 3′, 4′-OH), 7.41 (1H, dd, J=8.3, 2.3 Hz, H-6′), 7.39 (1H, d, J=2.3 Hz, H-2′), 6.89 (1H, d, J=8.3 Hz, H-5′), 6.67 (1H, s, H-3), 6.44 (1H, d, J=2.0 Hz, H-8), 6.19 (1H, d, J=2.0 Hz, H-6);13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 163.9 (C-2), 102.9 (C-3), 181.7 (C-4), 157.3 (C-5), 98.8 (C-6), 164.2 (C-7), 93.8 (C-8), 161.5 (C-9), 103.7 (C-10), 121.5 (C-1′), 113.4 (C-2′), 145.8 (C-3′), 149.7 (C-4′), 116.0 (C-5′), 119.0 (C-6′)。以上数据与文献报道基本一致[7],故鉴定化合物5为木犀草素。
化合物6:黄色粉末(甲醇),mp 253~255 ℃,三氯化铁显色剂反应呈阳性。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 12.74 (1H, s, 5-OH), 8.61 (1H, brs, 6-OH), 10.37 (1H, brs, 4′-OH), 7.93 (2H, d, J=8.7 Hz, H-2′, 6′), 7.00 (1H, s, H-8), 6.94 (2H, d, J=8.7 Hz, H-3′, 5′), 6.82 (1H, s, H-3), 5.27 (1H, d, J=7.6 Hz, H-1″), 3.67 (3H, s, 6″-OCH3);13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 164.1 (C-2), 102.6 (C-3), 182.4 (C-4), 146.9 (C-5), 130.5 (C-6), 151.0 (C-7), 93.5 (C-8), 149.0 (C-9), 105.9 (C-10), 121.3 (C-1′), 128.5 (C-2′, 6′), 116.0 (C-3′, 5′), 161.2 (C-4′), 99.8 (C-1″), 72.8 (C-2″), 75.3 (C-3″), 71.4 (C-4″), 75.0 (C-5″), 169.2 (C-6″), 52.0 (6″-OCH3)。以上数据与文献报道基本一致[8],故鉴定化合物6为野黄芩苷甲酯。
化合物7:黄色粉末(甲醇),三氯化铁显色剂反应呈阳性。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 12.80 (1H, s, 5-OH), 10.37 (2H, brs, 7, 4′-OH), 8.02 (2H, d, J=8.8 Hz, H-2′, 6′), 6.89 (2H, d, J=8.8 Hz, H-3′, 5′), 6.83 (1H, s, H-3), 6.27 (1H, s, H-6), 4.83 (1H, d, J=8.0 Hz, H-1″), 3.58 (3H, s, 6″-OCH3);13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 163.8 (C-2), 102.4 (C-3), 181.8 (C-4), 157.4 (C-5), 98.9 (C-6), 156.9 (C-7), 125.2 (C-8), 149.3 (C-9), 103.4 (C-10), 121.1 (C-1′), 128.8 (C-2′, 6′), 115.9 (C-3′, 5′), 161.2 (C-4′), 106.4 (C-1″), 73.8 (C-2″), 75.6 (C-3″), 71.5 (C-4″), 75.0 (C-5″), 169.4 (C-6″), 51.9 (6″-OCH3)。以上数据与文献报道基本一致[9],故鉴定化合物7为异高山黄芩素-8-O-β-D-葡萄糖醛酸苷-6″-甲酯。
化合物8:黄色粉末(甲醇),三氯化铁显色剂反应呈阳性。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 12.98 (1H, s, 5-OH), 10.41 (1H, brs, 4′-OH), 7.96 (2H, d, J=8.7 Hz, H-2′, 6′), 6.94 (2H, d, J=8.7 Hz, H-3′, 5′), 6.87 (1H, s, H-3), 6.86 (1H, d, J=1.9 Hz, H-8), 6.47 (1H, d, J=1.9 Hz, H-6), 5.32 (1H, d, J=7.6 Hz, H-1″), 3.67 (3H, s, 6″-OCH3);13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 164.3 (C-2), 103.2 (C-3), 182.0 (C-4), 161.4 (C-5), 99.3 (C-6), 162.4 (C-7), 94.6 (C-8), 157.0 (C-9), 105.5 (C-10), 121.0 (C-1′), 128.6 (C-2′, 6′), 116.0 (C-3′, 5′), 161.2 (C-4′), 99.0 (C-1″), 72.7 (C-2″), 75.4 (C-3″), 71.3 (C-4″), 75.2 (C-5″), 169.2 (C-6″), 52.0 (6″-OCH3)。以上数据与文献报道基本一致[10],故鉴定化合物8为芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷-6″-甲酯。
化合物9:黄色针状结晶(甲醇),mp 299~301 ℃,三氯化铁显色剂反应呈阳性。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 12.64 (1H, s, 5-OH), 10.72 (1H, brs, 7-OH), 10.38 (1H, brs, 4′-OH), 7.93 (2H, d, J=8.8 Hz, H-2′, 6′), 6.96 (2H, d, J=8.8 Hz, H-3′, 5′), 6.81 (1H, s, H-3), 6.27 (1H, s, H-6), 3.84 (3H, s, 8-OCH3);13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 163.6 (C-2), 102.7 (C-3), 181.9 (C-4), 157.1 (C-5), 99.0 (C-6), 156.2 (C-7), 127.7 (C-8), 149.5 (C-9), 103.5 (C-10), 121.3 (C-1′), 128.4 (C-2′, 6′), 116.1 (C-3′, 5′), 161.2 (C-4′), 61.0 (8-OCH3)。以上数据与文献报道基本一致[11],故鉴定化合物9为4′-羟基汉黄芩素。
化合物10:黄色针晶(甲醇),mp 240~242 ℃,三氯化铁显色剂反应呈阳性。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 12.95 (1H, s, 5-OH), 9.35 (1H, brs, 4′-OH), 7.37 (2H, s, H-2′, 6′), 7.06 (1H, s, H-3), 7.00 (1H, s, H-8), 3.95 (3H, s, 7-OCH3), 3.90 (6H, s, 3′, 5′-OCH3), 3.74 (3H, s, 6-OCH3);13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 164.0 (C-2), 105.1 (C-3), 182.3 (C-4), 152.7 (C-5), 131.9 (C-6), 158.6 (C-7), 91.8 (C-8), 152.0 (C-9), 103.4 (C-10), 60.0 (6-OCH3), 56.4 (7-OCH3), 120.2 (C-1′), 104.4 (C-2′, 6′), 148.2 (C-3′, 5′), 140.1 (C-4′), 56.4 (3′, 5′-OCH3)。以上数据与文献报道基本一致[12],故鉴定化合物10为5, 4′-二羟基-6, 7, 3′, 5′-四甲氧基黄酮。
化合物11:黄色粉末(甲醇),mp 244~246 ℃,三氯化铁显色剂反应呈阳性。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 12.39 (1H, s, 5-OH), 10.11 (3H, brs, 7, 8, 4′-OH), 7.01 (2H, d, J=8.2 Hz, H-2′, 6′), 6.94 (2H, d, J=8.2 Hz, H-3′, 5′), 6.74 (1H, s, H-3), 6.27 (1H, s, H-6);13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 163.6 (C-2), 102.4 (C-3), 182.1 (C-4), 153.0 (C-5), 98.6 (C-6), 153.4 (C-7), 125.0 (C-8), 145.5 (C-9), 103.3 (C-10), 121.4 (C-1′), 128.6 (C-2′, 6′), 115.9 (C-3′, 5′), 161.1 (C-4′)。以上数据与文献报道基本一致[13],故鉴定化合物11为异高山黄芩素。
化合物12:黄色粉末(甲醇),三氯化铁显色剂反应呈阳性。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 12.80 (1H, s, 5-OH), 9.49 (4H, m, 6, 7, 3′, 4′-OH), 7.40 (1H, dd, J=8.3, 2.2 Hz, H-6′), 7.38 (1H, d, J=2.2 Hz, H-2′), 6.88 (1H, d, J=8.3 Hz, H-5′), 6.63 (1H, s, H-3), 6.54 (1H, s, H-8);13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 163.6 (C-2), 102.3 (C-3), 181.9 (C-4), 147.1 (C-5), 129.1 (C-6), 153.3 (C-7), 93.7 (C-8), 149.5 (C-9), 104.0 (C-10), 121.8 (C-1′), 113.3 (C-2′), 145.7 (C-3′), 149.6 (C-4′), 116.0 (C-5′), 118.8 (C-6′)。以上数据与文献报道基本一致[14],故鉴定化合物12为6-羟基木犀草素。
化合物13:浅黄色针晶(丙酮),mp 190~192 ℃,盐酸-镁粉反应阳性。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 12.89 (1H, s, 5-OH), 7.71 (1H, dd, J=8.5, 2.2 Hz, H-6′), 7.58 (1H, d, J=2.2 Hz, H-2′), 7.13 (1H, d, J=8.5 Hz, H-5′), 7.02 (1H, s, H-8), 6.96 (1H, s, H-3), 3.93 (3H, s, 4′-OCH3), 3.89 (3H, s, 3′-OCH3), 3.86 (3H, s, 7-OCH3), 3.74 (3H, s, 6-OCH3)。以上数据与文献报道基本一致[15],故鉴定化合物13为5-羟基-6, 7, 3′, 4′-四甲氧基黄酮。
化合物14:淡黄色无定形粉末(甲醇),盐酸-镁粉反应阳性。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 12.88 (1H, s, 5-OH), 8.07 (2H, d, J=9.0 Hz, H-2′, 6′), 7.12 (2H, d, J=9.0 Hz, H-3′, 5′), 6.95 (1H, s, H-8), 6.93 (1H, s, H-3), 3.93 (3H, s, 7-OCH3), 3.86 (3H, s, 4′-OCH3), 3.74 (3H, s, 6-OCH3)。以上数据与文献报道基本一致[16],故鉴定化合物14为三裂鼠尾草素。
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