摘要:
目的 通过网络药理学、分子动力学模拟及动物实验,探讨二至丸通过抑制异常糖酵解改善肾纤维化的作用机制。方法 从TCMSP、ETCM、BATMAN-TCM数据库获得二至丸的活性成分并预测作用靶点;结合GeneCards、DisGeNET、DrugBank数据库获取肾纤维化交集靶点。构建蛋白质相互作用(PPI)网络筛选核心靶标,并进行基因本体(GO)与京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。利用AutoDock Vina和Gromacs 2022软件对核心成分与靶标进行分子对接及分子动力学模拟。建立腺嘌呤诱导的大鼠肾纤维化模型,予以二至丸(1.5、3.0 g/kg)及氯沙坦干预。检测大鼠肾功能指标 [血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白];采用HE、Masson染色及免疫组化评估肾组织损伤与纤维化指标[α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)];采用Western blotting检测肾组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)磷酸化及糖酵解关键酶[6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶3(PFKFB3)、己糖激酶2(HK2)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、丙酮酸激酶M2型(PKM2)]蛋白表达。结果 网络药理学筛选获得16个活性成分,与肾纤维化交集靶点297个。PPI网络识别出木犀草素、山柰酚等核心成分,以及Akt1、PFKFB3、低氧诱导因子-1A(HIF-1A)等核心靶点。KEGG分析显示二至丸主要通过调控PI3K/Akt信号通路发挥作用。分子对接及动力学模拟结果显示,木犀草素与糖酵解关键酶PFKFB3结合能最低且在100 ns模拟中结合构象极其稳定。动物实验表明,二至丸能显著降低模型大鼠Scr、BUN、24h UP水平(P<0.05、0.01),改善肾小管扩张及间质胶原沉积,α-SMA、Vimentin表达显著下调(P<0.01)。Western blotting结果显示,二至丸组大鼠肾组织中p-PI3K、p-Akt、PFKFB3、HK2、GLUT1、PKM2蛋白表达显著降低(P<0.05、0.01)。结论 二至丸改善肾纤维化的作用与PI3K/Akt/PFKFB3通路调控异常糖酵解代谢重编程有关。