2017, Vol. 48
引用本文 | doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2017.04.005 |
2. 哈尔滨商业大学 生命科学与环境科学研究中心, 黑龙江 哈尔滨 150076
2. Center of Research on Life Science and Environmental Science, Harbin University of Commerce, Harbin 150076, China
连翘Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl是我国的传统中药，早在《本草图经》中就有记载，其味苦，性微寒，归肺、心、小肠经，具有清热解毒、消肿散结之功效，常用于风热感冒、温病初起、温热入营、高热烦渴、热淋尿闭、痈疽、瘰疬、乳痈、丹毒和肿毒等症。连翘主要分布于我国山西、陕西、山东、安徽西部、河南等地[1]。本课题组曾对连翘的化学成分进行过系统的研究，从中得到了一系列结构新颖且具有药理活性的化合物[2-5]。为进一步研究其药效物质基础，寻找新的药理活性的先导化合物，本实验对连翘的50%乙醇提取物经多种柱色谱分离纯化，从中分离得到了13个单体化合物，分别鉴定为毛柳苷（salidroside，1）、连翘酯苷E（forsythoside E，2）、quinolacetic acid（3）、黄瑞烷酮（rengyolone，4）、千里光内酯（senecio lactone，5）、cleroindicin C（6）、4-羟基-4-异丙基-1-环己烯甲酸（4-hydroxy-4-isopropylcyclohex-1-enecarboxylic acid，7）、oleuropeic acid（8）、rel-(1S,2S,4S)-trihydroxy-p-menthane（9）、壬二酸（azelaic acid，10）、2-羟基-丁二酸-4-内酯（2-hydroxy-succinic acid 4-methylester，11）、glochidioboside（12）、(+)-异落叶松脂醇-9-O-β-D-葡萄糖苷 [(+)-isolariciresino-9-O-β-D-glucopyranoside，13]。其中化合物5～13为首次从连翘属中分离得到。
1 仪器与材料Bruker ARX 300 MHz、Bruker ARX 400 MHz核磁共振波谱仪（Bruker公司，TMS作内标）；Bruker micro-Q-Tof高分辨质谱仪（Bruker公司，瑞士）；Waters Pro 150制备高效液相色谱仪（Waters公司，美国）;YMC ODS-A制备色谱柱（250 mm×10 mm，5 μm）；YMC ODS-A分析色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）。
柱色谱硅胶（100～200目、200～300目）、薄层色谱硅胶H（300～400目）、GF254（青岛海洋化工厂）；ODS柱色谱填料（60～80 μm，德国Merck）；Sephadex LH-20（北京绿百草公司）；AB-8大孔吸附树脂（天津浩聚树脂科技有限公司）。
连翘药材于2009年购自河北安国药材公司（产地山西），经哈尔滨商业大学曲中原副教授鉴定为连翘Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl的干燥果实。
2 提取与分离连翘的干燥果实8.3 kg，以50%乙醇回流提取3次，每次2 h，合并提取液，浓缩得到的浸膏（出膏率6.51%）依次用氯仿、醋酸乙酯、正丁醇萃取3次，减压回收溶剂得氯仿部分40 g、醋酸乙酯部分100 g、正丁醇部分350 g。醋酸乙酯部分以适量水溶解后用大孔吸附树脂柱色谱分离，依次用纯水和10%、30%、50%、95%的乙醇-水梯度洗脱。其中30%乙醇部分（20 g）经硅胶柱色谱分离，依次用氯仿-甲醇（100∶1、50∶1、30∶1、20∶1、10∶1、8∶1、5∶1）梯度洗脱，得到流分Fr. 1～7。Fr. 7经过Sephadex LH-20柱色谱（50%甲醇-水）等梯度洗脱得到化合物1（11 mg）和2（20 mg）；Fr. 2通过硅胶柱色谱，依次用石油醚-醋酸乙酯（20∶1、15∶1、10∶1、5∶1）梯度洗脱，得到流分Fr. 2-1～2-4，其中Fr. 2-2通过制备液相色谱（35%乙腈-水）洗脱得到化合物3（10 mg）、4（11 mg）、5（18 mg）；Fr. 2-3通过制备液相色谱（30%乙腈-水）洗脱得到化合物6（12 mg）、7（14 mg）；Fr. 3通过硅胶柱色谱，依次用二氯甲烷-甲醇（50∶1、20∶1、15∶1、10∶1、5∶1）梯度洗脱，得到流分Fr. 3-1～3-5，其中Fr. 3-2通过制备液相色谱（20%乙腈-水）洗脱得到化合物8（10 mg）、9（10 mg）；Fr. 3-3通过制备液相色谱（20%乙腈-水）洗脱得到化合物10（19 mg）；Fr. 3-4通过制备液相色谱（15%乙腈-水）洗脱得到化合物11（20 mg）；Fr. 5通过硅胶柱色谱，依次用二氯甲烷-甲醇（20∶1、15∶1、10∶1、5∶1）梯度洗脱，得到流分Fr. 5-1～5-4，其中Fr. 5-2通过制备液相色谱（10%乙腈-水）洗脱得到化合物12（20 mg）、13（20 mg）。
3 结构鉴定化合物1：无色油状物，易溶于甲醇。1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ: 2.73 (2H,m,H-7),3.56 (1H,m,H-8a),3.87 (1H,m,H-8b),4.16 (1H,d,J = 7.9 Hz,H-1′),6.66 (2H,d,J= 8.4 Hz,H-3,5),7.04 (2H,d,J = 8.4 Hz,H-2,6)；13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6) δ:128.4(C-1),129.7 (C-2,6),115.1 (C-3,5),155.7 (C-4),70.1 (C-8),34.8 (C-7),102.9 (C-1′),73.4 (C-2′),77.0 (C-3′),69.9 (C-4′),76.3 (C-5′),61.1 (C-6′)。以上波谱数据与文献报道[6]基本一致，故鉴定化合物1为毛柳苷。
化合物2：无色油状物，易溶于甲醇。1H-NMR (400 MHz,MeOD-d4)δ: 2.77 (2H,m,H-7),4.26 (1H,m,H-8a),4.74 (1H,m,H-8b),6.57 (1H,dd,J = 7.8,2.1 Hz,H-6),6.72 (1H,d,J = 7.8 Hz,H-5),6.60(1H,d,J = 2.1 Hz,H-2),1.25 (3H,d,J = 6.2 Hz,H-6″)；13C-NMR (100 MHz,MeOD-d4) δ: 130.4 (C-1),117.2 (C-2),146.7 (C-3),145.2 (C-4),116.4 (C-5),120.4 (C-6),34.8 (C-7),70.1 (C-8),104.4 (C-1′),74.8 (C-2′),78.3 (C-3′),71.6 (C-4′),76.8 (C-5′),68.1 (C-6′),102.2 (C-1″),72.5 (C-2″),72.0 (C-3″),73.7 (C-4″),69.6 (C-5″),18.5 (C-6″)。以上波谱数据与文献报道[7]基本一致，故鉴定化合物2为连翘酯苷E。
化合物3：无色针状结晶（甲醇）。1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ: 7.02 (2H,d,J = 9.8 Hz,H-2,6),6.03 (2H,d,J = 9.8Hz,H-3,5),2.56 (2H,s,H-7)；13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6)δ: 185.7 (C-1),126.9 (C-2,6),152.4 (C-3,5),67.0 (C-4),45.4 (C-7),170.4 (C-8)。以上波谱数据与文献报道[8]基本一致，故鉴定化合物3为quinolacetic acid。
化合物4：白色结晶（甲醇）。1H-NMR (400 MHz,MeOD-d4)δ: 5.87 (1H,d,J = 10.2 Hz,H-2),6.77 (1H,d,J = 10.2Hz,H-3),4.13 (1H,m,H-5),2.50 (1H,dd,J = 16.6,4.3 Hz,H-6a),2.79(1H,dd,J = 16.6,4.3 Hz,H-6b),2.26 (1H,m,H-7a),2.20 (1H,m,H-7b),3.93 (1H,m,H-8a),3.79 (1H,m,H-8b)；13C-NMR (100MHz,MeOH-d4) δ: 196.7 (C-1),128.3 (C-2),149.6(C-3),75.3 (C-4),81.9 (C-5),40.3 (C-6),40.3 (C-7),66.3 (C-8)。以上波谱数据与文献报道[9]基本一致，故鉴定化合物4为黄瑞烷酮。
化合物5：白色结晶（丙酮）。1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ: 6.02 (1H,d,J = 10.2 Hz,H-2),6.83 (1H,d,J = 10.2Hz,H-3),4.78 (1H,t,J = 6.5,5.0 Hz,H-5),2.90 (1H,dd,J =16.9,5.0 Hz,H-6a),2.73 (1H,dd,J = 16.9,6.6 Hz,H-6b),2.95 (1H,d,J = 17.0 Hz,H-7a),2.85 (1H,d,J = 17.0,H-7b)；13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6) δ: 195.5 (C-1),128.3 (C-2),148.5 (C-3),71.8 (C-4),82.5 (C-5),39.7 (C-6),41.9 (C-7),173.9(C-8)。以上波谱数据与文献报道[10]基本一致，故鉴定化合物5为千里光内酯。
化合物6：无色油状物，易溶于甲醇。FAB-MS m/z: 155 [M－H]-；1H-NMR (400MHz,CD3COCD3) δ: 4.36 (1H,m,H-2),3.88 (2H,m,H-8),2.96 (1H,dd,J = 15.8,4.5 Hz,H-3a),2.72 (1H,m,H-3b),2.35(1H,m,H-5a),2.24 (1H,m,H-7a),2.13 (2H,m,H-6),2.02 (1H,m,H-7b),1.63(1H,m,H-5b)；13C-NMR (100 MHz,CD3COCD3) δ: 77.0(C-1),84.5 (C-2),42.9 (C-3),209.9 (C-4),34.1 (C-5),35.5 (C-6),40.9 (C-7),66.2 (C-8)。以上波谱数据与文献报道[9]基本一致，故鉴定化合物6为cleroindicin C。
化合物7：白色结晶（甲醇）。FAB-MS m/z: 182.9 [M－H]-，分子式为C10H16O3，1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ: 6.73 (1H,brs,H-2),0.86 (3H,d,J = 6.3 Hz,-CH3),0.84 (3H,d,J= 6.3 Hz,-CH3),2.20 (2H,m,H-3),1.97 (2H,m,H-6),1.58 (2H,m,H-5),1.36 (1H,m,H-7)；13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6)δ: 168.2 (-COOH),137.1 (C-2),129.7 (C-1),69.6 (C-4),36.8 (C-3),34.7(C-7),30.2 (C-5),21.2 (C-6),16.9 (-CH3),16.9 (-CH3)。以上波谱数据与文献报道[11] 基本一致，故鉴定化合物7为4-羟基-4-异丙基-1-环己烯甲酸。
化合物8：白色结晶（甲醇），易溶于甲醇。1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ: 6.86 (1H,brs,H-2),0.85 (6H,s,-CH3)；13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6) δ: 130.2 (C-1),139.2 (C-2),25.0 (C-3),43.8 (C-4),23.1 (C-5),26.6 (C-6),168.2 (-COOH),70.3 (C-8),27.1 (C-9,10)。以上波谱数据与文献报道[12]基本一致，故鉴定化合物8为oleuropeic acid。
化合物9：白色结晶（甲醇）。ESI-MS m/z: 184。1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ: 4.14 (1H,brs,1-OH),5.13 (1H,d,J = 6.9 Hz,2-OH),4.55(1H,s,4-OH),1.10 (3H,s,H-7),1.75 (2H,m,H-3),1.38 (1H,m,H-5a),1.65(1H,m,H-5b),1.27 (1H,m,H-6a),1.40 (1H,m,H-6b),3.35 (1H,m,H-2),1.46(1H,m,H-8),0.82 (6H,d,J = 6.8 Hz,H-9,10)；13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6) δ: 73.3 (C-1),69.9 (C-2),37.4 (C-3),73.8 (C-4),29.2 (C-5),29.5 (C-6),27.1 (C-7),34.0 (C-8),16.9 (C-9,10)。以上波谱数据与文献报道[13]基本一致，故鉴定化合物9为rel-(1S,2S,4S)-trihydroxy-p-menthane。
化合物10：无色油状物。HR-ESI-MS m/z: 187.095 4 [M－H]-。1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ: 2.17 (4H,t,J= 2.4 Hz,H-2,8),1.47 (4H,t,J = 6.0 Hz,H-3,7),1.24 (6H,brs,H-4,5,6)；13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6) δ: 173.3 (C-1,9),33.7 (C-2,8),24.5 (C-3,7),28.4 (C-4,5,6)。以上波谱数据与文献报道[14] 基本一致，故鉴定化合物10为壬二酸。
化合物11：无色油状物。1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ: 4.32 (1H,dd,J = 7.3,5.4 Hz,H-2),2.46 (1H,d,J =7.3 Hz,H-3a),2.61 (1H,d,J = 5.4 Hz,H-3b)；13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6) δ: 171.6 (C-4),173.3 (C-1),67.0 (C-2),51.9 (C-5),39.3 (C-3)。以上波谱数据与文献报道[15]基本一致，故鉴定化合物11为2-羟基-丁二酸-4-内酯。
化合物12：黄色无定形粉末，易溶于甲醇。UV λmaxMeOH(nm):229.2、281.6、278.6nm；1H-NMR (300 MHz,DMSO-d6) δ: 6.89 (1H,brs,H-2),6.72 (1H,d,J = 8.5 Hz,H-5),6.71 (1H,d,J = 8.5 Hz,H-6),5.39 (1H,d,J = 6.5 Hz,H-7),3.40 (1H,m,H-8),3.58 (1H,m,H-9a),3.68 (1H,m,H-9b),6.71 (2H,s,H-2′,6′),2.57 (2H,t,J = 7.5Hz,H-7′),1.77 (2H,m,H-8′),3.39 (1H,m,H-9a′),3.78 (1H,m,H-9b′),3.73(3H,s,3-OCH3),3.75 (3H,s,3′-OCH3),4.12 (1H,d,J= 7.8 Hz,H-1″)；13C-NMR (75 MHz,DMSO-d6)δ: 132.5 (C-1),110.3 (C-2),147.5 (C-3),146.3 (C-4),115.3 (C-5),118.5 (C-6),86.9 (C-7),53.3 (C-8),63.0 (C-9),134.6 (C-1′),112.5 (C-2′),143.3 (C-3′),145.6 (C-4′),129.0 (C-5′),116.5 (C-6′),31.4 (C-7′),31.4 (C-8′),67.9 (C-9′),55.6 (3-OCH3),55.7 (3′-OCH3),glc: 103.0(C-1),73.5 (C-2),76.8 (C-3),70.1 (C-4),76.7 (C-5),61.1 (C-6)。以上波谱数据与文献报道[16]基本一致，故鉴定化合物12为的 (7S,8R)-二氢脱氢二松柏醇9′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。
化合物13：黄色油状物，易溶于甲醇。1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6)δ: 6.35～6.70(6H,m,Arom H),2.70 (1H,m,H-7),3.69 (6H,s,2×OCH3),1.90 (1H,m,H-8),3.54 (1H,m,H-9a),3.16 (1H,m,H-9b),3.77 (1H,m,H-7′),1.65 (1H,m,H-8′),3.45 (2H,d,J = 9.0 Hz,H-9),4.30 (1H,d,J = 6.9Hz,H-1″)；13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6) δ: 136.9 (C-1),113.9 (C-2),147.2 (C-3),144.4 (C-4),115.5 (C-5),121.1 (C-6),45.5 (C-7),44.1 (C-8),67.7 (C-9),127.0 (C-1′),111.9 (C-2′),145.5 (C-3′),144.5 (C-4′),116.3 (C-5′),136.9 (C-6′),32.2 (C-7′),37.5 (C-8′),62.3 (C-9′),104.1 (C-1″),73.5 (C-2″),76.7 (C-3″),70.8 (C-4″),76.7 (C-5″),61.1 (C-6″),55.5 (-OCH3),55.6 (-OCH3)。以上波谱数据与文献报道[17]基本一致，故鉴定化合物13为(+)-异落叶松脂醇-9-O-β-D-葡萄糖苷。
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