金钱草Lysimachiae Herba是中医治疗结石症最常用的中药。金钱草存在严重的同名异物现象，在全国范围内，至少有7个科14种植物在不同地方被用作金钱草^[1]，其中应用最为广泛的是报春花科（Primulaceae）珍珠菜属Lysimachia L. 植物过路黄Lysimachia christinae Hance. 的全草和豆科（Leguminosae sp.）山蚂蝗属Desmodium Desv. 植物广金钱草Desmodium styracifolium (Osb.) Merr. 的地上部分。尽管《中国药典》自1977年版就已确定正品金钱草的基原植物是过路黄，但目前国内很多中药店仍将广金钱草作为金钱草销售。

过路黄和广金钱草都具有利湿退黄、利尿通淋等作用，都被用于治疗热淋、砂淋、小便涩痛、黄疸尿赤、尿路结石、肝胆结石等^[2]。在临床治疗结石症上，过路黄和广金钱草常相互替代。但也有医家认为，过路黄偏向于肝胆疾病而广金钱草偏向于泌尿系统疾病^[3]。要判断过路黄和广金钱草的药用价值的异同，比较二者的化学成分就很有必要，尤其在二者的作用机制尚不明确的情况下。

曹进等^[4]已比较过过路黄和广金钱草的HPLC指纹图谱，但它们的图谱是采用340 nm波长检测的，检测到的成分多为黄酮类和酚酸类。文献报道过路黄和广金钱草都含有丰富的三萜类成分^{[5, 6, 7, 8, 9, 10]}，该类成分在近紫外区没有明显吸收。为更全面地比较过路黄和广金钱草的化学组成，本实验采用紫外（UV）和蒸发光散射（ELSD）2种检测器，在相同色谱条件下分别建立过路黄和广金钱草的RP-HPLC指纹图谱，并对二者的相应指纹图谱进行比较。

岛津LC-20AD型液相色谱仪，包括自动进样器、LC-20AD输液泵、SPD-20A检测器、岛津LCsolution色谱工作站，日本岛津公司；TXB-622L电子天平、AUW220D电子天平，岛津仪器有限公司；KQ5200E型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；SHB-IIIS循环水式真空泵，郑州长城科工贸有限公司；Heidolph Laborota 4001 Efficient旋转蒸发仪，北京莱比信科技发展有限公司。

甲醇、乙腈为色谱纯，美国Tedia 公司；冰醋酸为分析纯，成都市科龙化工试剂厂；水为超纯水；黄芪苷对照品（批号141022，质量分数≥98%）购自南京狄尔格医药科技有限公司。

过路黄Lysimachia christinae Hance. 和广金钱草Desmodium styracifolium (Osb.) Merr. 样品各13批，均经西南大学药学院邓君博士鉴定，分别为过路黄的干燥全草和广金钱草的地上部分。来源见表 1。

表 1 (Table 1)

表 1 样品编号及来源 Table 1 Numbers and sources of samples 品种 编号 产地 品种 编号 产地 过路黄 J1 重庆北碚 广金钱草 G1 湖北随州 过路黄 J2 重庆云阳 广金钱草 G2 广东茂名 过路黄 J3 四川宜宾 广金钱草 G3 广东清远 过路黄 J4 四川巴中 广金钱草 G4 广东湛江 过路黄 J5 四川资阳 广金钱草 G5 湖北武汉 过路黄 J6 四川南充 广金钱草 G6 广东江门 过路黄 J7 四川自贡 广金钱草 G7 广东揭阳 过路黄 J8 四川泸州 广金钱草 G8 广东广州 过路黄 J9 贵州贵阳 广金钱草 G9 广西南宁 过路黄 J10 云南昆明 广金钱草 G10 广东云浮 过路黄 J11 江西南昌 广金钱草 G11 广西贺州 过路黄 J12 四川成都 广金钱草 G12 广西桂林 过路黄 J13 江西九江 广金钱草 G13 广西玉林

表 1 样品编号及来源 Table 1 Numbers and sources of samples

色谱柱为Inertsil ODS-3 C₁₈（150 mm×4.6 mm，3 μm）；流动相为0.5%乙酸乙腈溶液（A）-0.5%乙酸水溶液（B），梯度洗脱程序：0～5 min，5% A；5～25 min，5%～15% A；25～45 min，15%～18% A；45～65 min，18%～25% A；65～95 min，25%～100% A；95～105 min，100% A；105～105.5 min，100%～5% A；105.5～120 min，5% A。体积流量1.0 mL/min，柱温30 ℃，进样量20 μL。UV检测波长255 nm；ELSD检测条件：漂移管温度60 ℃，雾化气体（空气）压力275.8 kPa（40 psi）。

取黄芪苷对照品适量，用甲醇配制成约100 μg/mL的溶液，贮于棕色瓶中4 ℃保存，备用。

取过路黄或广金钱草干燥药材适量，粉碎，精密称定粉末5.0 g，置于100 mL锥形瓶内，加入甲醇50 mL，称质量。超声提取30 min，冷至室温，用甲醇补至原质量，摇匀，滤过。弃初滤液，取续滤液15 mL，精密加入内标溶液1 mL，减压浓缩至干。残留物用1 mL甲醇溶解，0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液。

按“2.2.2”项下方法制备过路黄供试品溶液，用“2.1”项下色谱条件分析，连续进样6次，考察各色谱峰相对于内标峰的相对保留时间和相对峰面积的一致性。各主要色谱峰相对保留时间的RSD为0.04%～1.36%，相对峰面积的RSD为2.46%～4.32%。同法考察该色谱条件分析广金钱草供试品溶液的精密度，相对保留时间的RSD为0.03%～1.27%，相对峰面积的RSD为2.16%～3.62%，表明仪器精密度良好。

取同一批次过路黄（J1）样品，按“2.2.2”项下方法平行制备供试品溶液6份，用“2.1”项下色谱条件分析，考察各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的一致性。各主要色谱峰的相对保留时间的RSD为0.06%～1.82%，相对峰面积的RSD为3.18%～4.65%。同法考察该条件分析广金钱草的重复性，各色谱峰相对保留时间的RSD为0.04%～1.28%，相对峰面积的RSD为2.74%～3.68%，表明该分析方法重复性较好。

按“2.2.2”项下方法制备过路黄（J1）供试品溶液，用“2.1”项下色谱条件分析，分别在制样后0、4、8、12、24、36、48 h进样，考察各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的一致性。各主要色谱峰相对保留时间的RSD为0.06%～0.24%，相对峰面积的RSD为1.52%～4.83%。同法考察广金钱草供试品溶液的稳定性，相对保留时间的RSD为0.05%～0.22%，相对峰面积的RSD为1.35%～4.39%，表明过路黄和广金钱草供试品溶液在常温下48 h 内均较稳定。

取表 1中样品，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，记录色谱图，结果见图 1～2。

图 1

Fig. 1

图 1 过路黄 (A) 和广金钱草 (B) 的HPLC-UV图谱 Fig. 1 HPLC-UV fingerprints of L. christinae (A) and D. styracifolium (B)

图 2

Fig. 2

图 2 过路黄 (A) 和广金钱草 (B) 的HPLC-ELSD图谱 Fig. 2 HPLC-ELSD fingerprints of L. christinae (A) and D. styracifolium (B)

将“2.4”项下测定的指纹图谱采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”进行分析，生成13批过路黄的HPLC-UV对照指纹图谱，并对共有峰进行标定。同法生成13批广金钱草的HPLC-ELSD对照指纹图谱，并对共有峰进行标定。结果见图 3、4。

图 3

Fig. 3

图 3 过路黄 (A) 和广金钱草 (B) HPLC-UV对照图谱 Fig. 3 HPLC-UV fingerprints of L. christinae (A) and D. styracifolium (B)

图 4

Fig. 4

图 4 过路黄 (A) 和广金钱草 (B) HPLC-ELSD对照图谱 Fig. 4 HPLC-ELSD fingerprints of L. christinae (A) and D. styracifolium (B)

对过路黄和广金钱草的化学成分研究结果显示，它们都含有黄芪苷、新西兰牡荆苷、大豆皂苷I^{[6, 9, 11, 12, 13]}，故本实验拟选其中之一作为内标物。采用加样法确认该3个化合物在过路黄和广金钱草的HPLC图谱中的位置，结果显示，13批过路黄样品的共有峰中没有黄芪苷和大豆皂苷I，而在广金钱草中都没有检测到这2个成分；广金钱草的HPLC-UV对照图谱中，第17号峰是新西兰牡荆苷，但其HPLC-ELSD图谱中却没检测到该成分，而在过路黄中都没有检测到新西兰牡荆苷。比较3个对照品的保留时间以及加样样品中该3个化合物的峰与相邻峰的分离度，黄芪苷的保留时间为58.71 min，峰位居中，且与相邻峰基本无干扰，故本实验选择黄芪苷为内标物，定量添加至样品溶液中。

以“2.5”项下生成的对照指纹图谱为参照，采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”计算13批药材指纹图谱的相似度，结果见表 2。

表 2 (Table 2)

表 2 13批药材的指纹图谱相似度分析结果 Table 2 Similarity analysis of fringerprints of 13 batches of CMM 编号 相似度 编号 相似度 HPLC-UV HPLC-ELSD HPLC-ELSD HPLC-UV J1 0.834 0.999 G1 0.998 0.986 J2 0.830 0.996 G2 0.999 0.972 J3 0.711 0.997 G3 0.999 0.979 J4 0.852 0.998 G4 0.999 0.994 J5 0.710 0.998 G5 1.000 0.979 J6 0.519 0.999 G6 0.997 0.986 J7 0.774 0.996 G7 1.000 0.994 J8 0.802 0.969 G8 0.997 0.993 J9 0.771 0.997 G9 0.990 0.992 J10 0.740 0.999 G10 0.999 0.993 J11 0.786 0.987 G11 0.999 0.991 J12 0.809 0.999 G12 0.999 0.995 J13 0.873 0.996 G13 0.999 0.989

表 2 13批药材的指纹图谱相似度分析结果 Table 2 Similarity analysis of fringerprints of 13 batches of CMM

实验中考察了甲醇-水、甲醇-0.1%磷酸水溶液、甲醇-0.5%乙酸水溶液、0.5%乙酸乙腈-0.5%乙酸水溶液等多种流动相系统，结果表明，以0.5%乙酸乙腈溶液-0.5%乙酸水溶液进行梯度洗脱，色谱峰的数目较多且各色谱峰分离度较好，因此选择0.5%乙酸乙腈溶液-0.5%乙酸水溶液作为流动相。将供试品溶液进行紫外全波长扫描，在255、360 nm有最大吸收。实验结果证明在255 nm进行检测时，基线平稳，各色谱峰吸收较强，因此选择255 nm作为过路黄和广金钱草HPLC-UV指纹图谱的检测波长。

13批过路黄的HPLC-UV指纹图谱中，色谱峰大致分散在整个洗脱时间段内；而HPLC-ELSD指纹图谱中，75 min前色谱峰很少（图 1、2），且在该保留时间段内没有共有峰（图 4）。表明过路黄的甲醇提取物中，高极性和中等极性的成分量很低。而13批广金钱草的HPLC-UV指纹图谱和HPLC-ELSD指纹图谱中，色谱峰均分散在整个洗脱时间段内（<图 1、2），且广金钱草的HPLC-ELSD指纹图谱中，20～35 min时间段内洗脱的组分量较多（图 2），表明广金钱草的甲醇提取物中，中等极性的成分量较高。

在进样等量药材的提取物时，过路黄的HPLC-UV色谱峰普遍低于广金钱草，尤其是30～40 min内的洗脱组分（图 1），提示过路黄所含对255 nm光波有较强吸收的化合物少于广金钱草，如黄酮类及酚酸类，该结果与Sun等^[14]的研究结果一致。

过路黄的HPLC-UV对照图谱和HPLC-ELSD对照图谱中，共有峰并不相对应（图 3、4）；对于广金钱草，只有HPLC-UV对照图谱的15号峰和HPLC-ELSD对照图谱的8号峰相对应（图 3、4）。可见，用UV检测到的强峰，所对应的成分（黄酮和酚酸类）量并不高；而量高的成分几乎都没有强的紫外吸收。因此，仅用HPLC-UV建立过路黄和广金钱草的指纹图谱，并不能真实反映它们的化学组成，而用ELSD检测能反映药材中量较高的非挥发性成分的全貌。

以黄芪苷为内标，计算各色谱峰的相对保留时间，初步确定：过路黄的HPLC-UV对照图谱中的6、7、13、14号峰分别与广金钱草的HPLC-UV对照图谱中的7、14、27、28号峰相对应；过路黄的HPLC-ELSD对照图谱中的1、5号峰分别与广金钱草的HPLC-ELSD对照图谱中的13、17号峰相对应。ELSD检测到的2个量较高的共有成分，可能是该2种药材相同疗效的物质基础。

13批过路黄药材的HPLC-UV指纹图谱的相似度在0.519～0.873，整体相似度较低，提示不同产地过路黄药材的化学组成差异较大；而13批广金钱草药材的HPLC-UV指纹图谱的相似度均高于0.97，且有28个共有峰，远多于过路黄的HPLC-UV指纹图谱的共有峰（14个），表明不同产地广金钱草的质量稳定。尽管过路黄的HPLC-ELSD指纹图谱的相似度几乎均高于0.97，但过路黄的HPLC-ELSD指纹图谱只有5个共有峰，不能说明过路黄的质量稳定；而广金钱草的HPLC-ELSD指纹图谱有18个共有峰，且相似度在0.99～1.00，再次证明不同产地广金钱草的质量稳定。

Sun等^[14]的研究结果也表明，不同批次广金钱草的黄酮类和酚酸类成分组成相似，而过路黄的该类成分组成差异很大。过路黄化学组成不稳定正好能解释过路黄的临床疗效不稳定的现象，这也提示了对过路黄实施GAP生产和规范加工、贮藏方法的必要性和迫切性，以及建立更科学的金钱草质量控制方法的迫切性。本研究表明过路黄和广金钱草的组分中，相同者很少，绝大多数不同，提示它们的临床功用应有所不同，即使对于同种疾病有效，作用机制也可能不同，应明确区分二者。