东北岩高兰Empetrum nigrum L.var. japonicum K. Koch又名黑果子、夜明豆，为岩高兰科（Empetraceae）岩高兰属Empetrum L.常绿匍匐状小灌木，属药用珍稀植物，是岩高兰科在中国仅有的一个变种^[1]，全株可入药，具有补脾胃、滋阴保肝、明目等功能，用于治疗肚腹胀满和消化不良等症，还可作茶饮，具有助消化、提精神的养生功效^[2-3]。为进一步发掘研究岩高兰的药用价值，对东北岩高兰全草甲醇提取液正己烷萃取物的化学成分进行了研究，从中分离得到6个查耳酮类化合物，分别鉴定为2′, 5′-二羟基-3′-甲氧基-4′, 6′-二甲基二氢查耳酮（2′, 5′-dihydroxy-3′-methoxy-4′, 6′-dimethyl-dihydrochalcone，1）、2′-甲氧基-4′, 5′-二羟基-3′, 6′-二甲基二氢查耳酮（4′, 5′-dihydroxy-2′-methoxy-3′, 6′-dimethyl-dihydrochalcone，2）、2′, 4′-二羟基二氢查耳酮（2′, 4′-dihydroxy-dihydrochalcone，3）、2′, 4′-二羟基查耳酮（2′, 4′-dihydroxy-chalcone，4）、2′-甲氧基-4′-羟基二氢查耳酮（2′-methoxy-4′-hydroxy-dihydrochalcone，5）、2′, 4′, β-三羟基二氢查耳酮（2′, 4′, β-trihydroxy-dihydrochalcone，6）。其中，化合物1、2为新化合物，命名为岩高兰素A和B；化合物5、6为首次从该植物中分离得到。

X-6显微熔点测定仪（温度未校正，北京泰克仪器有限公司）；傅里叶变换红外光谱仪、紫外-可见吸收光谱仪（美国PE公司）；Waters Xevo QTOF质谱仪（美国沃特斯公司）；Bruker-600 MHz核磁共振仪（德国Bruker公司）；HITACHI L-7100高压液相色谱仪（日本日立公司）；HITACHI L-3350示差检测器（GL SCIRNCES Inc.）；Inertsil PREP-ODS（250 mm×10 mm，5 μm）和PREP-Sil（250 mm×10 mm，5 μm）不锈钢色谱柱；柱色谱用硅胶（200~300目）为青岛海洋化工厂产品；薄层色谱硅胶板为烟台化工厂生产。

药材于2013年8月购买于内蒙古自治区根河市，经齐齐哈尔大学裴世春教授鉴定为东北岩高兰Empetrum nigrum L. var. japonicum K. Koch，标本（YGL-201308）保存于齐齐哈尔大学天然产物研究室。

干燥的东北岩高兰全草7.5 kg粉碎后用甲醇室温浸泡提取4次，每次3 d，合并浸提液，浓缩，加水混悬，依次用正己烷、醋酸乙酯和正丁醇萃取4次，合并相同溶剂萃取液减压浓缩至恒定质量，得到正己烷萃取物384.2 g、醋酸乙酯萃取物598.5 g、正丁醇萃取物304.2 g。

取80.0 g正己烷萃取物，用硅胶柱色谱分离，依次用正己烷-醋酸乙酯8:2（8.0 L）、5:5（8.5 L）、0:1（6.0 L）梯度洗脱，得到13个组分Fr.1~13。Fr. 3（15.8 g）经硅胶柱色谱分离，正己烷-醋酸乙酯（9:1、8:2、0:1）梯度洗脱，得到9个组分Fr. 3-1~3-9。Fr. 3-4共3.7 g，取198.5 mg，经HPLC-SIL分离纯化得化合物1（43.2 mg）、2（9.8 mg）。Fr. 5（3.0 g）经硅胶柱色谱分离，正己烷-醋酸乙酯（8:2、7:3、0:1）梯度洗脱，得到8个组分Fr. 5-1~5-8。其中Fr. 5-3（562.1 mg）和Fr. 5-4（302.2 mg）重结晶后分别得到化合物3（126.1 mg）、4（123.3 mg）。Fr. 7（9.2 g）经硅胶柱色谱分离，正己烷-醋酸乙酯（8:2、7:3、0:1）梯度洗脱，得到9个组分Fr. 7-1~7-9。Fr. 7-7（430.9 mg）重结晶后得到化合物5（90.2 mg）。Fr. 7-5（482.7 mg）经HPLC-ODS分离纯化后得到化合物6（8.7 mg）。

化合物1：黄色粉末（正己烷-醋酸乙酯），三氯化铁反应呈暗绿色悬浊液。mp 75.5~76.7 ℃。HR-ESI-MS m/z: 301.145 5 [M+H]⁺（计算值301.144 0），确定分子式为C₁₈H₂₀O₄。UVλ_max^MeOH(nm): 210, 290；IRv_max^KBr(cm⁻¹): 3 428, 3 026, 1 706, 1 613, 1 372。¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃)中δ 7.29 (2H, t, J=7.2 Hz), 7.24 (2H, d, J=7.2 Hz), 7.19 (1H, t, J=7.2 Hz)处显示1组单取代苯的质子信号，δ 3.40 (2H, t, J=7.8 Hz), 3.03 (2H, t, J=7.8 Hz)处给出2个亚甲基信号峰，δ 3.67 (3H, s)处给出1个-OCH₃，δ 2.12 (3H, s), 2.10 (3H, s)给出2个与不饱和碳相连的甲基，δ 13.46 (1H, s), 5.34 (1H, s)给出2个羟基质子峰。¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃)及DEPT数据显示有18个碳信号，其中有1个羰基碳信号，12个不饱和碳信号，1个甲氧基碳信号，2个甲基碳信号和2个亚甲基碳信号。初步推测该化合物为查耳酮骨架。根据HMBC中δ 13.46 (1H, s)处羟基质子与C-1′, 2′, 3′相关可推断2′-位有羟基存在；δ 3.67 (3H, s)处单峰甲基与C-3′相关可推断出甲氧基位于C-3′位；由δ 2.12 (3H, s), 2.10 (3H, s)处2个单峰甲基分别与C-3′, 4′, 5′及C-1′, 5′, 6′相关，以及δ 5.34 (1H, s)处羟基质子与C-4′, 6′相关可推断出C-4′, 6′位有甲基取代，C-5′位有羟基取代。另外，根据H-α与C=O，H-β与C-α, 1, 2之间存在相关性，确定了化合物1的结构为2′, 5′-二羟基-3′-甲氧基-4, 6′-二甲基二氢查耳酮（图 1）。经Scifinder数据库检索，确定为新化合物，命名为岩高兰素A，其¹H-NMR和¹³C-NMR数据见表 1。

图 1 化合物1, 2的主要HMBC相关图 Fig.1 Key HMBC correlations of compounds 1 and 2

表 1(Table 1)

表 1 化合物1和2的NMR数据 Table 1 MR data of compounds 1 and 2 碳位 1 2 δH δC δH δC 1 - 141.5 (s) - 141.6 (s) 2, 6 7.24 (2H, d, J=7.2 Hz) 128.5 (d) 7.25 (2H, d, J=7.2 Hz) 128.5 (d) 3, 5 7.29 (2H, t, J=7.2 Hz) 128.5 (d) 7.29 (2H, t, J=7.2 Hz) 128.5 (d) 4 7.19 (1H, t, J=7.2 Hz) 126.0 (d) 7.20 (1H, t, J=7.2 Hz) 126.0 (d) 1′ - 108.8 (s) - 107.0 (s) 2′ - 161.4 (s) - 162.7 (s) 3′ - 159.0 (s) - 108.6 (s) 4′ - 108.5 (s) - 158.2 (s) 5′ - 159.0 (s) - 158.2 (s) 6′ - 106.5 (s) - 108.6 (s) C=O - 205.2 (s) - 205.7 (s) α 3.40 (2H, t, J=7.8 Hz) 44.4 (t) 3.45 (2H, t, J=7.8 Hz) 46.2 (t) β 3.02 (2H, t, J=7.8 Hz) 30.8 (t) 3.03 (2H, t, J=7.8 Hz) 30.6 (t) 2′-R R=OH, 13.46 (1H, s) R=OCH3, 3.71 (3H, s) 60.4 (q) 3′-R R=OCH3, 3.67 (3H, s) 61.9 (q) R=CH3, 2.11 (3H, s) 8.2 (q) 4′-R R=CH3, 2.10 (3H, s) 8.6 (q) R=OH, 9.40 (1H, brs) 5′-R R=OH, 5.34 (1H, s) R=OH, 9.40 (1H, brs) 6′-R R=CH3, 2.12 (3H, s) 7.5 (q) R=CH3, 2.11 (3H, s) 8.2 (q)

表 1 化合物1和2的NMR数据 Table 1 MR data of compounds 1 and 2

化合物2：黄色片状结晶（甲醇），三氯化铁反应呈深绿色。mp 61.0~63.4 ℃。HR-ESI-MS m/z: 301.144 6 [M+H]⁺（计算值301.144 0），确定分子式为C₁₈H₂₀O₄。UVλ_max^MeOH (nm): 204, 281；IRv_max^KBr(cm⁻¹): 3 441, 3 022, 1 706, 1 596, 1 374。¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃)中δ 7.29 (2H, t, J=7.2 Hz), 7.25 (2H, d, J=7.2 Hz), 7.20 (1H, t, J=7.2 Hz)处显示1组单取代苯的质子信号，δ 3.45 (2H, t, J=7.8 Hz), 3.03 (2H, t, J=7.8 Hz)处显示2个亚甲基信号峰，δ 3.71 (3H, s)处给出1个-OCH₃，δ 2.11 (6H, s)给出2个与不饱和碳相连的甲基，δ 9.40 (2H, brs)处显示2个酚羟基质子信号。¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃)及DEPT数据显示有18个碳信号，包括1个羰基碳信号，12个烯碳信号，2个甲基碳信号，1个甲氧基碳信号，2个亚甲基碳信号。化合物2与化合物1的波谱数据相似，推测也为二氢查耳酮骨架。HMBC中3′-CH₃与C-2′, 3′, 4′，以及6′-CH₃与C-1′, 5′, 6′的相关性可推断出3′、6′位有甲基取代；由δ 3.71处单峰甲基与C-2′相关可推断出甲氧基位于2′位。根据H-α与C=O、C-1，H-β与C=O、C-α、C-2之间存在相关性推断化合物2的结构为4′, 5′-二羟基-2′-甲氧基-3′, 6′-二甲基二氢查耳酮（图 1）。经Scifinder数据库检索，确定为新化合物，命名为岩高兰素B。其¹H-NMR和¹³C-NMR数据见表 1。

化合物3：黄色粉末（甲醇），mp 68.7~70.4 ℃。¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ: 12.73 (1H, s, 2′-OH), 7.64 (1H, d, J=8.7 Hz, H-6′), 7.31 (2H, t, J=7.2 Hz H-3, 5), 7.24 (2H, d, J=7.2 Hz, H-2, 6), 7.22 (1H, t, J=7.2 Hz, H-4), 6.38 (1H, d, J=2.4 Hz, H-3′), 6.36 (1H, dd, J=8.7, 2.4 Hz, H-5′), 3.22 (2H, t, J=9.6 Hz, H-α), 3.04 (2H, t, J=9.6 Hz, H-β)；¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ: 140.8 (C-1), 128.4 (C-2), 128.6 (C-3), 126.3 (C-4), 128.6 (C-5), 128.4 (C-6), 39.7 (C-α), 30.3 (C-β), 203.7 (C=O), 113.9 (C-1′), 162.5 (C-2′), 103.6 (C-3′), 165.2 (C-4′), 107.7 (C-5′), 132.2 (C-6′)。以上数据与文献报道^[4]基本一致，故鉴定化合物3为2′, 4′-二羟基二氢查耳酮。

化合物4：黄色粉末（甲醇），mp 151.4~152.1 ℃。¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ: 13.36 (1H, s, 2′-OH), 7.89 (1H, d, J=15.4 Hz, H-β), 7.85 (1H, d, J=8.5 Hz, H-6′), 7.66 (2H, m, H-3, 5), 7.59 (1H, d, J=15.4 Hz, H-α), 7.43 (3H, m, H-2, 4, 6), 6.46 (1H, dd, J=8.5, 2.5 Hz, H-5′), 6.44 (1H, d, J=2.5 Hz, H-3′)；¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ: 134.7 (C-1), 129.0 (C-2), 128.6 (C-3), 130.8 (C-4), 128.6 (C-5), 129.0 (C-6), 120.3 (C-α), 144.7 (C-β), 192.0 (C=O), 114.6 (C-1′), 166.5 (C-2′), 103.8 (C-3′), 162.7 (C-4′), 107.8 (C-5′), 132.1 (C-6′)。以上数据与文献报道^[5]基本一致，故鉴定化合物4为2′, 4′-二羟基查耳酮。

化合物5：黄色粉末（甲醇），mp 131.4~133.7 ℃。¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ: 7.74 (1H, d, J=9.2 Hz, H-6′), 7.28 (2H, t, J=7.2 Hz, H-3, 5), 7.23 (2H, d, J=7.2 Hz, H-2, 6), 7.17 (1H, t, J=7.2 Hz, H-4), 6.45 (1H, dd, J=9.2, 2.2 Hz, H-5′), 6.44 (1H, d, J=2.2 Hz, H-3′), 3.83 (3H, s, 2′-OMe), 3.28 (2H, t, J=7.5 Hz, H-α), 3.00 (2H, t, J=7.5 Hz, H-β)；¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ: 141.8 (C-1), 128.5 (C-2), 128.4 (C-3), 125.9 (C-4), 128.4 (C-5), 128.5 (C-6), 30.7 (C-α), 45.3 (C-β), 200.3 (C=O), 120.5 (C-1′), 161.5 (C-2′), 99.0 (C-3′), 161.3 (C-4′), 108.0 (C-5′), 133.0 (C-6′), 55.4 (2′-OMe)。以上数据与文献报道^[5]基本一致，故鉴定化合物5为2′-甲氧基-4′-羟基二氢查耳酮。

化合物6：无色粉末（甲醇），mp 165.5~167.0 ℃。¹H-NMR (600 MHz, CDCl₃) δ: 7.87 (1H, d, J=8.4 Hz, H-6′), 7.47 (2H, d, J=7.2 Hz, H-2, 6), 7.43 (2H, t, J=7.2 Hz, H-3, 5), 7.39 (1H, t, J=7.2 Hz, H-4), 6.54 (1H, dd, J=8.4, 2.4 Hz, H-5′), 6.47 (1H, d, J=2.4 Hz, H-3′), 5.47 (1H, dd, J=13.2, 3.0 Hz, H-β), 3.04 (1H, t, J=16.8, 13.2 Hz, H-α), 2.84 (1H, dd, J=16.8, 3.0 Hz, H-α)；¹³C-NMR (150 MHz, CDCl₃) δ: 138.7 (C-1), 128.9 (C-2), 128.8 (C-3), 126.2 (C-4), 128.8 (C-5), 128.9 (C-6), 44.3 (C-a), 79.9 (C-β), 190.8 (C=O), 115.2 (C-1′), 162.7 (C-2′), 103.5 (C-3′), 163.6 (C-4′), 110.6 (C-5′), 129.4 (C-6′)。根据其¹H-NMR、¹³C-NMR及HMBC等波谱数据鉴定化合物6为2′, 4′, β-三羟基二氢查耳酮。经查阅文献，只报道了该化合物的结构^[6]，未报道其波谱数据。

为研究东北岩高兰中查耳酮类化合物的抗肿瘤活性，采用MTT法，测试了6种查耳酮类单体化合物对人宫颈癌细胞HeLa体外增殖抑制作用，结果显示，化合物6有一定抑制作用，IC₅₀值为49.8 μg/mL，其余化合物无明显抑制作用。