中草药  2016, Vol. 47 Issue (15): 2597-2600
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引用本文doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.15.003
李姗, 万传星, 袁慕华, 刘璇, 赵野, 张志锋 . 蓝玉簪龙胆黄酮苷类化学成分研究[J]. 中草药, 2016, 47(15): 2597-2600.
LI Shan, WAN Chuan-xing, YUAN Mu-hua, LIU Xuan, ZHAO Ye, ZHANG Zhi-feng . Study on flavonoid glycosides from Gentiana veitchiorum[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2016, 47(15): 2597-2600 .
蓝玉簪龙胆黄酮苷类化学成分研究
李姗1,2, 万传星2, 袁慕华1, 刘璇1, 赵野1, 张志锋1     
1. 西南民族大学青藏高原研究院 化学与环境保护学院, 四川 成都 610041 ;
2. 塔里木大学生命科学学院 新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室, 新疆 阿拉尔 843300
收稿日期: 2016-04-02
基金项目: 西南民族大学中央高校基本科研业务费专项资金项目（2015NZYQN79）；西南民族大学研究生创新型科研项目（CX2016SZ048）
作者简介: 李姗(1992-),女,硕士研究生,从事药用植物资源研究。E-mail:lishan_317@163.com
通信作者: 张志锋 E-mail:zhangzhf99@gmail.com
摘要: 目的 研究藏药蓝玉簪龙胆Gentiana veitchiorum地上部分中的黄酮苷类化学成分。 方法 采用硅胶柱色谱、ODS中压柱色谱及制备高效液相色谱等方法对化合物进行分离纯化，通过1D和2D NMR方法鉴定化合物结构。 结果 从蓝玉簪龙胆地上部分50%乙醇提取液中分离并鉴定了6个黄酮苷类化合物，分别为5,7,3',4'-四羟基黄酮-6-C-β-D-吡喃葡萄糖基-4'-O-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷（1）、异荭草素（2）、异牡荆苷（3）、异金雀花素（4）、异荭草素-4'-O-葡萄糖苷（5）和异皂草苷（6）。 结论 化合物1为新化合物，命名为异荭草素-4'-二葡萄糖苷；化合物5和6为首次从该植物中分离得到。
关键词: 蓝玉簪龙胆     黄酮苷类化合物     异荭草素-4'-二葡萄糖苷     异荭草素-4'-O-葡萄糖苷     异皂草苷    
Study on flavonoid glycosides from Gentiana veitchiorum
LI Shan1,2, WAN Chuan-xing2, YUAN Mu-hua1, LIU Xuan1, ZHAO Ye1, ZHANG Zhi-feng1     
1. School of Chemistry and Environmental Protection, Institute of Ethnic Medicine, Southwest University for Nationalities, Chengdu 610041, China ;
2. Key Laboratory of Protection and Utilization of Biological Resources in Tarim Basin, Xinjiang Production & Construction Corps College of Life Science, Tarim University, Alar 843300, China
Abstract: Objective To study the flavonoid glycosides from the aerial parts of Gentiana veitchiorum. Methods The compounds were isolated and purified by silica gel and ODS chromatography in addition to p-HPLC. The structures of the isolated compounds were identified on the basis of 1D & 2D NMR spectroscopy methods. Results Six compounds were isolated from the aerial parts of G. veitchiorum and identified as 5, 7, 3', 4'-tetrahydroxyl flavone-6-C-β-D-glucopyranosyl-4'-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside (1), isoorientin (2), isovitexin (3), isoscoparine (4), isoorientin-4'-O-glucoside (5), and isosaponarin (6). Conclusion Compound 1 is a new compound named isoorientin-4'-diglucoside, and compounds 5 and 6 are isolated from this plant for the first time.
Key words: Gentiana veitchiorum Hemsl.     flavonoid glycosides     isoorientin-4'-diglucoside     isoorientin-4'-O-glucoside     isosaponarin    

藏药蓝玉簪龙胆Gentianae Vettchiorum cum Radice Herba为龙胆科（Gentianaceae）龙胆属Gentiana (Tourn.) L. 植物蓝玉簪龙胆Gentiana veitchiorum Hemsl. 的干燥地上部分，藏语学名为“邦见温保”[1-2]。其主要分布于西藏、四川、青海等地区，海拔3 200～4 700 m的高山草地或林地边。该药具有清热解毒功效，主治肝炎黄疸、咽喉肿痛、目赤淋浊。现代药理研究表明蓝玉簪龙胆可减轻肝肺部炎症，保护肝肺功能，抑制肝肺纤维化的形成[3-4]，并且对慢性支气管炎有较好的改善效果[5]。本课题组前期进行了蓝玉簪龙胆提取物对CCl4致大鼠肝损伤的实验，结果表明该提取物具有明显的护肝效果[6]。杨红澎等[7-8]从蓝玉簪龙胆花中分离鉴定了落干酸、熊果酸、2α-羟基熊果酸、远志脑苷、龙胆苦苷、异荭草素-3′-甲醚、异牡荆苷、异金雀花素和异荭草素等化合物。为进一步明确蓝玉簪龙胆中的化学成分，本实验采用现代色谱分离技术，从50%乙醇提取物中分离得到6个化合物，分别鉴定为5,7,3′,4′-四羟基黄酮-6-C-β-D-吡喃葡萄糖基-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖基- (1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷（5,7,3′,4′-tetrahydroxyl flavone-6-C-β-D-glucopyranosyl-4′-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside，1）、异荭草素（isoorientin，2）、异牡荆苷（isovitexin，3）、异金雀花素（isoscoparine，4）、异荭草素-4′-O-葡萄糖苷（isoorientin-4′-O-glucoside，5）和异皂草苷（isosaponarin，6）。其中化合物1为新化合物，化合物5和6为首次从该植物中分离得到。

1 仪器与药品

中压液相色谱仪（Büchi公司），Waters 2767制备型高效液相色谱仪（Waters公司），500 MHz核磁共振仪（Bruck公司）；负离子高分辨电喷雾飞行时间质谱（Waters公司），Evolution 201型紫外可见分光光度仪（Thermo公司），红外光谱仪（Thermo公司），柱色谱硅胶（200～300目）为青岛海洋化工厂产品，液相用溶剂为色谱甲醇，水为超纯水。

藏药蓝玉簪龙胆采于四川省红原县，由四川大学张浩教授鉴定为蓝玉簪龙胆Gentiana veitchiorum Hemsl.，标本（201509012）现保藏于西南民族大学第一实验楼标本室。

2 提取分离

干燥的蓝玉簪龙胆地上部分5.0 kg粉末，用50%乙醇浸泡3 d后热回流提取3次，减压浓缩后加3倍体积乙醇沉淀，上清液减压浓缩得浸膏210.0 g，取40.0 g浸膏用硅胶柱色谱分离，以二氯甲烷-甲醇溶剂系统（10∶1→3∶1）进行梯度洗脱，得组分IA～ID。其中，IC（14.5 g）经中压液相色谱，甲醇-水（20%、30%、70%、100%甲醇）梯度洗脱，20%～30%洗脱部位合并得ICa（3.0 g）；70%～100%洗脱部位合并得ICb（5.0 g）；ICa和ICb分别进行高效液相色谱制备，流动相为含0.1%冰乙酸的30%甲醇水溶液（A）-100%甲醇（B）溶剂系统，按如下程序洗脱：0～90 min，100%～79%A；90～120 min，79%～70%A，体积流量8mL/min；检测波长254 nm；得到化合物1～6。

3 结构鉴定

化合物1：黄色无定形粉末，HR-ESI-Q-TOF-MS显示准分子离子峰为m/z: 771.197 8 [M－H]− （C33H39O21，计算值771.198 4），确定分子式为C33H40O21。UV λmax带I为336 nm，带II为274 nm；IR谱显示有羟基（3 414 cm−1）和羰基（1 649 cm−1）的伸缩振动，有苯环的骨架振动峰（1 615、1 518、1 467 cm−1）；10%硫酸乙醇显亮黄色，高温加热后显黑色，提示该化合物为黄酮苷类化合物。1H-NMR谱（表 1）中显示有2个芳氢单峰信号δ 6.79 (1H,s) 与6.52 (1H,s)，1个ABX系统 [δ 7.47 (1H,d,J = 2.0 Hz),7.50 (1H,dd,J = 8.5,2.0 Hz),7.41 (1H,d,J = 8.5 Hz)]；13C-NMR谱（表 1）显示有33个碳信号，包括1个羰基碳信号（δC 182.2），14个芳碳信号（其中6个被氧取代，δC147.3～165.0）；结合HSQC谱显示有3组糖端基碳氢信号 [δC 73.7与δH 4.60 (1H,d,J = 9.5 Hz),δC 101.8与δH 4.85 (1H,d,J = 7.5 Hz),δC 103.8与δH 4.25 (1H,d,J = 7.5 Hz)]，提示该化合物是黄酮的三糖苷。其中2个糖基以氧苷键相连；另1个糖基以碳苷键相连，该糖及苷元的13C-NMR谱与异荭草素相似[9-11]。在HMBC谱（图 1）中，δH 4.60 (H-1″) 与δC 161.1 (C-5),109.5 (C-6),165.0 (C-7) 相关，表明碳苷键位于C-6位；δH 4.85 (H-1′′′) 与δC 147.3 (C-3′),148.9 (C-4′),116.7 (C-5′) 相关，表明第2个糖基连于C-4′位；第3个糖基的端基氢δH 4.25 (H-1′′′′) 与δC 68.9 (C-6′′′) 相关，表明第3个糖基连于第2个糖的C-6′′′位，δH 3.57 (H-6′′′) 与δC 103.8 (C-1′′′′) 的HMBC相关关系以及δH 3.57 (H-6′′′) 和4.25 (H-1′′′′) 的ROESY关系（图 1）进一步证实了这种连接方式；13C-NMR谱结合HSQC和HMBC谱归属糖的信号表明3个糖基均是吡喃葡萄糖；3个葡萄糖基的端基质子的3J偶合常数分别为7.5、7.5、9.5 Hz，表明葡萄糖基均是β构型。综上所述，化合物1为5,7,3′,4′-四羟基黄酮-6-C-β-D-吡喃葡萄糖基- 4′-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷，命名为异荭草素-4′-二葡萄糖苷。

表 1 化合物1的1H-NMR和13C-NMR数据 (500/125 MHz,DMSO-d6) Table 1 1H-NMR and 13C-NMR data of compound 1 (500/125 MHz,DMSO-d6)

图 1 化合物1的结构和主要HMBC和ROESY关系 Fig.1 Structure of compound 1 and its keyHMBC and ROESY correlations

化合物2：黄色无定形粉末。HR-ESI-Q-TOF-MS m/z: 447.092 5 [M－H]−。1H-NMR (500 MHz,CD3OD) δ: 7.43 (1H,dd,J = 7.8,2.0 Hz,H-6′),7.41 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-2′),6.90 (1H,d,J = 7.8 Hz,H-5′),6.69 (1H,s,H-3),6.50 (1H,s,H-8),4.60 (1H,d,J = 10.0 Hz,H-1″)；13C-NMR (125 MHz,CD3OD) δ: 163.7 (C-2),102.8 (C-3),181.9 (C-4),160.7 (C-5),108.9 (C-6),163.3 (C-7),93.6 (C-8),156.3 (C-9),103.4 (C-10),121.5 (C-1′),113.3 (C-2′),145.8 (C-3′),149.8 (C-4′),116.1 (C-5′),119.0 (C-6′),73.1 (C-1″),70.3 (C-2″),79.0 (C-3″),70.7 (C-4″),81.6 (C-5″),61.5 (C-6″)。以上数据与文献报道一致[9]，故确定化合物2为异荭草素。

化合物3：黄色无定形粉末。HR-ESI-QTOF-MS m/z: 431.097 6 [M－H]−。1H-NMR (500 MHz,CD3OD) δ: 7.66 (2H,d,J = 8.0 Hz,H-2′,6′),6.78 (2H,d,J = 8.0 Hz,H-3′,5′),6.42 (1H,s,H-3),6.33 (1H,s,H-8),4.79 (1H,d,J = 10.0 Hz,H-1″)；13C-NMR (125 MHz,CD3OD) δ: 164.7 (C-2),102.4 (C-3),182.5 (C-4),160.6 (C-5),107.7 (C-6),163.4 (C-7),93.9 (C-8),157.2 (C-9),103.8 (C-10),121.6 (C-1′),128.0 (C-2′),115.6 (C-3′),161.3 (C-4′),115.6 (C-5′),128.0 (C-6′),73.9 (C-1″),71.2 (C-2″),78.7 (C-3″),70.4 (C-4″),81.2 (C-5″),61.5 (C-6″)。以上数据与文献报道一致[7]，故确定化合物3为异牡荆苷。

化合物4：黄色粉末。1H-NMR (500 MHz,CD3OD) δ: 7.33 (1H,d,J = 7.0 Hz,H-6′),7.27 (1H,s,H-2′),6.86 (1H,d,J = 7.0 Hz,H-5′),6.45 (1H,s,H-3),6.35 (1H,s,H-8),4.92 (1H,d,J = 10.0 Hz,H-1″),3.84 (3H,s,-OMe)；13C-NMR (125 MHz,CD3OD) δ: 164.3 (C-2),102.7 (C-3),182.4 (C-4),160.5 (C-5),108.9 (C-6),163.3 (C-7),93.9 (C-8),157.1 (C-9),103.8 (C-10),121.9 (C-1′),108.9 (C-2′),147.9 (C-3′),150.6 (C-4′),115.3 (C-5′),120.2 (C-6′),73.9 (C-1″),70.4 (C-2″),78.7 (C-3″),71.3 (C-4″),81.2 (C-5″),61.4 (C-6″),58.2 (-OMe)。以上数据与文献报道一致[10]，故确定化合物4为异金雀花素。

化合物5：黄色无定形粉末。HR-ESI-QTOF-MS m/z: 609.145 7 [M－H]−。1H-NMR (500 MHz,DMSO- d6) δ: 7.50 (1H,d,J = 8.0,2.0 Hz,H-6′),7.49 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-2′),7.24 (1H,d,J = 8.0 Hz,H-5′),6.79 (1H,s,H-3),6.52 (1H,s,H-8),4.60 (1H,d,J = 9.5 Hz,H-1″),4.89 (1H,d,J = 7.0 Hz,H-1′′′)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6) δ: 163.2 (C-2),104.3 (C-3),182.2 (C-4),161.1 (C-5),109.5 (C-6),165.0 (C-7),94.3 (C-8),156.8 (C-9),103.6 (C-10),125.2 (C-1′),114.0 (C-2′),147.6 (C-3′),149.0 (C-4′),116.5 (C-5′),118.8 (C-6′),73.6 (C-1″),70.6 (C-2″),79.5 (C-3″),70.2 (C-4″),82.0 (C-5″),61.9 (C-6″),101.7 (C-1′′′),71.1 (C-2′′′),76.4 (C-3′′′),70.2 (C-4′′′),77.8 (C-5′′′),61.2 (C-6′′′)。以上数据与文献报道一致[11]，故确定化合物5为异荭草素-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物6：黄色无定形粉末。HR-ESI-QTOF-MS m/z: 593.150 4 [M－H]−。1H-NMR (500 MHz,DMSO- d6) δ: 8.03 (2H,d,J = 7.5 Hz,H-2′,6′),7.19 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-3′,5′),6.86 (1H,s,H-3),6.52 (1H,s,H-8),5.03 (1H,d,J = 5.6 Hz,H-1′′′),4.60 (1H,d,J = 9.5 Hz,H-1″)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6) δ: 163.1 (C-2),104.2 (C-3),182.3 (C-4),160.7 (C-5),109.6 (C-6),163.1 (C-7),94.4 (C-8),156.9 (C-9),103.5 (C-10),124.5 (C-1′),128.6 (C-2′),117.1 (C-3′),161.1 (C-4′),117.1 (C-5′),128.6 (C-6′),73.7 (C-1″),70.7 (C-2″),79.5 (C-3″),70.1 (C-4″),82.0 (C-5″),61.9 (C-6″),100.4 (C-1′′′),71.1 (C-2′′′),77.0 (C-3′′′),70.1 (C-4′′′),77.6 (C-5′′′),61.1 (C-6′′′)。以上数据与文献报道一致[12]，故确定化合物6为异皂草苷。

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