淫羊藿Epimedii Herba为用药悠久的传统中药之一，也是贵州常用的重要苗药，来源于小檗科（Berberidaceae）淫羊藿属Epimedium L. 植物，具有补肾阳、强筋骨、助阳益精等功效，主治阳痿遗精、筋骨痿软、风湿痹痛、麻木拘挛等症。现代临床上还常用于治疗骨质疏松、更年期综合症、乳房肿块、高血压、冠心病等疾病，另外尚具有免疫增强、抗衰老、抗肿瘤、抗艾滋病等作用，受到国内外广泛关注。淫羊藿药材为多来源品种，《中国药典》2010年版收载5种，即淫羊藿Epimedium brevicornu Maxim.、箭叶淫羊藿Epimedium sagittatum (Sieb.et Zucc.) Maxim.、柔毛淫羊藿Epimedium pubescens Maxim.、朝鲜淫羊藿Epimedium koreanum Nakai、巫山淫羊藿Epimedium wushanense T. S. Ying^[1]。《贵州省中药材、民族药材质量标准》2003年版收载4种，分别为粗毛淫羊藿Epimedium acuminatum Franch.、天平山淫羊藿Epimedium myrianthum Stearn、毡毛淫羊藿Epimedium coactum H. R. Liang et W. M. Yah、黔岭淫羊藿Epimedium leptorrhizum Stearn^[2]。

近年来，已有采用外标法（ESM）同时测定淫羊藿中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和淫羊藿苷4个指标成分的报道^{[3, 4, 5]}，这些方法由于朝藿定A、B、C对照品的价格昂贵且不容易获得，难以在实际工作中广泛应用，限制了该药材多指标成分质量控制模式的实现。针对这一问题，王智民等^[6]进行了“一测多评”（QAMS）的研究，即利用有效化学成分间内在的函数关系和比例关系，只测定1个成分（对照品可得到、廉价者），来实现对多个成分（对照品没有或难以得到者）的同步监控，该研究思路已经在众多药材或复方制剂中得到验证和广泛应用^{[7, 8, 9, 10]}，于霄等^[11]虽然建立QAMS法测定了巫山淫羊藿、柔毛淫羊藿及朝鲜淫羊藿共计12批药材含量，但根据QAMS法建立的技术指南，测定样品数据要求应≥30批验证QAMS法的可行性，方法可行性和可重复性的再验证样品应≥10批^[12]。所以对于该方法是否可作为淫羊藿药材多指标成分质控方法，有必要以更多样品测定进一步验证方法的可靠性。笔者自20世纪90年代以来对中国淫羊藿属药用植物的种类、地理分布、质量控制及民间用药情况等进行了研究，相继发现一些新种，目前中国淫羊藿属药用植物的种类近50种，除上述标准中收载的种类以外，其余大部分种类在贵州民间特别是苗族聚居地区长期作淫羊藿入药^{[13, 14, 15, 16]}，本实验收集了包括标准收载种类共计39种100批淫羊藿药材，采用HPLC法，以淫羊藿苷（易得、廉价、有效）为内参物，进行QAMS法方法学考察试验研究，同时采用ESM同步测定，以大量样本进一步验证QAMS法测定淫羊藿药材中多个黄酮类成分的方法可行性及适用性，为实现淫羊藿药材多成分的同步测定提供可靠的相对校正因子，计算朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C量及对其色谱峰保留值定位，克服多指标成分同时测定质量控制模式存在的对照品短缺、操作繁琐及检测成本高等缺点，为提高淫羊藿药材质量水平及相关产业生产提供理论依据，同时也为淫羊藿优良种质资源的内在品质评价奠定基础。

Agilent 1100和1260型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），安捷伦液相色谱系统化学工作站，DAD检测器；Waters2487型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；岛津LC-20AT型高效液相色谱仪（日本岛津公司）。AG135型电子分析天平（Mettler Toledo）。色谱柱Agilent Zorbax SB-C₁₈（150 mm×4.6 mm，5 μm），Agilent Zorbax XDB-C₁₈（150 mm×4.6 mm，5 μm），Agilent Zorbax Extend-C₁₈（250 mm×4.6 mm，5 μm），Diamonsil（钻石）-C₁₈（250 mm×4.6 mm，5 μm），Phenomenex（250 mm×4.6 mm，5 μm）；依利特 Hypersil-ODS2（250 mm×4.6 mm，5 μm），Agilent Zorbax SB-C₁₈（150 mm×4.6 mm,5 μm，USCM030053）等。

朝藿定A对照品（批号MUST-13040209，质量分数≥98%），朝藿定B对照品（批号MUST-13062312，质量分数≥98%），均购于北京神州科创生物科技有限公司；淫羊藿苷对照品（批号110737-200312）、朝藿定C对照品（批号110756-200110），均购于中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈（色谱纯），实验用水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。所有供试淫羊藿药材的叶，均于2013年4～5月在淫羊藿主产地贵州、四川、陕西、湖南、湖北、重庆、吉林等采集，并经贵阳中医学院何顺志教授鉴定，晒干，粉碎过三号筛，置于硅胶干燥器中备用，供试淫羊藿药材采集信息详见表 1。

表 1(Table 1)

表 1 样本信息 Table 1 Information of samples 序号 种类 拉丁学名 产地 序号 种类 拉丁学名 产地 1 柔毛淫羊藿 E. pubescens 四川 51 拟巫山淫羊藿 贵州 2 柔毛淫羊藿 陕西南镇 52 拟巫山淫羊藿 贵州雷山连城河口 3 箭叶淫羊藿 E. sagittatum 广东 53 拟巫山淫羊藿 贵州雷山黄泥 4 箭叶淫羊藿 湖南 54 拟巫山淫羊藿 贵州龙里湾寨 5 箭叶淫羊藿 安徽黄山 55 拟巫山淫羊藿 贵州雷山西江 6 箭叶淫羊藿 不详 56 拟巫山淫羊藿 贵州雷山桃子寨 7 箭叶淫羊藿 安徽金寨 57 拟巫山淫羊藿 贵州龙里猴子沟 8 朝鲜淫羊藿 E. koreanum 吉林 58 直距淫羊藿 E. mikinorii 湖北恩施 9 淫羊藿 E. brevicornu 甘肃榆中 59 直距淫羊藿 湖北咸丰 10 巫山淫羊藿 E. wushanense 不详 60 直距淫羊藿 不详 11 巫山淫羊藿 四川巴中 61 直距淫羊藿 不详 12 巫山淫羊藿 不详 62 直距淫羊藿 不详 13 巫山淫羊藿 湖北巴东 63 绿药淫羊藿 E. chlorandrum 不详 14 巫山淫羊藿 不详 64 绿药淫羊藿 不详 15 粗毛淫羊藿 E. acuminatum 不详 65 湖南淫羊藿 E. hunanense 湖南新宁 16 粗毛淫羊藿 重庆武隆 66 湖南淫羊藿 广西资源 17 粗毛淫羊藿 不详 67 湖南淫羊藿 湖北鹤峰 18 粗毛淫羊藿 贵州 68 德务淫羊藿 E. dewuense 贵州德江 19 粗毛淫羊藿 贵州 69 竹山淫羊藿 E. zhushanense 湖北竹山 20 粗毛淫羊藿 贵州龙里草原 70 保靖淫羊藿 E. baojingense 湖南吉首 21 粗毛淫羊藿 贵州贵阳二戈寨 71 保靖淫羊藿 湖南永顺 22 粗毛淫羊藿 贵州贵定 72 保靖淫羊藿 湖南城步 23 粗毛淫羊藿 贵州龙里湾寨 73 偏斜淫羊藿 E. truncatum 湖南张家界 24 粗毛淫羊藿 贵州桐梓 74 无距淫羊藿 E. ecalcaratum 四川宝兴 25 粗毛淫羊藿 贵州贵阳永乐 75 川鄂淫羊藿 E. fargesii 重庆巫溪 26 粗毛淫羊藿 贵州开阳 76 恩施淫羊藿 E. enshiense 湖北恩施 27 粗毛淫羊藿 贵州龙里大草原 77 长蕊淫羊藿 E. dolichostemon 湖北利川 28 粗毛淫羊藿 贵州务川 78 长蕊淫羊藿 贵州务川 29 粗毛淫羊藿 贵州贵阳乌当水田 79 单叶淫羊藿 E. simplicifolium 贵州绥阳 30 粗毛淫羊藿 贵州贵阳乌当百宜 80 黔北淫羊藿 E. boreali-guizhouense 贵州沿河 31 粗毛淫羊藿 贵州金沙 81 普定淫羊藿 E. pudingense 贵州普定 32 天平山淫羊藿 E. myrianthum 贵州天柱1 82 时珍淫羊藿 E. lishihchenii 江西 33 天平山淫羊藿 贵州 83 时珍淫羊藿 贵州万山 34 天平山淫羊藿 湖南 84 木鱼坪淫羊藿 E. franchetii 不详 35 天平山淫羊藿 贵州江口 85 木鱼坪淫羊藿 湖北建始 36 天平山淫羊藿 不详 86 茂汶淫羊藿 E. platypetalum 四川泸定 37 天平山淫羊藿 湖南芷江 87 星花淫羊藿 E. stellulatum 不详 38 天平山淫羊藿 广东革乐 88 腺毛淫羊藿 E. glandulosopilosum 不详 39 天平山淫羊藿 贵州天柱2 89 天全淫羊藿 E. flavum 不详 40 天平山淫羊藿 贵州剑河 90 膜质淫羊藿 E. membranaceum 贵州赫章 41 天平山淫羊藿 贵州 91 膜质淫羊藿 不详 42 天平山淫羊藿 湖南桑植 92 膜质淫羊藿 不详 43 天平山淫羊藿 令同 93 少花淫羊藿 E. pauciflorum 四川汶川 44 黔岭淫羊藿 E. leptorrhizum 不详 94 四川淫羊藿 E. sutchuenense 贵州务川 45 黔岭淫羊藿 贵州 95 宝兴淫羊藿 E. davidii 四川宝兴 46 黔岭淫羊藿 贵州龙里猴子沟 96 方氏淫羊藿 E. fangii 四川 47 黔岭淫羊藿 贵州余庆兴关 97 川西淫羊藿 E. elongatum 四川 48 毡毛淫羊藿 E. coactum 贵州剑河南脚 98 贵州淫羊藿 E. sagittatum var. guizhouense 贵州开阳 49 毡毛淫羊藿 贵州剑河岩寨 99 万山淫羊藿（待定） E. wanshanense 贵州万山 50 拟巫山淫羊藿 E. pseudowushanense 贵州 100 荔波淫羊藿（待定） E. liboense 贵州荔波

表 1 样本信息 Table 1 Information of samples

Agilent Zorbax SB-C₁₈柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈-水（23∶77）；体积流量1.0 mL/min；检测波长270 nm；柱温30 ℃；进样量10 μL。

分别精密称取朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷对照品适量，加甲醇溶解并分别制成质量浓度分别为0.225 6 mg/mL的朝藿定A溶液，0.221 2 mg/mL的朝藿定B溶液，1.310 mg/mL的朝藿定C溶液，0.450 0 mg/mL的淫羊藿苷单一对照品储备液。

取淫羊藿药材粉末约0.2 g，精密称定，置于50 mL具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20 mL，称定质量，超声提取（功率为100 W）1 h，取出放冷，再称定质量，加稀乙醇补足减失质量，滤过，取续滤液，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，测定，记录色谱图，结果表明，供试品图谱中1、2、3、4号色谱峰的保留时间和与4个对照品一致，且其纯度因子依次为979.820、981.999、987.338、975.646，峰纯度良好，表明该方法具有专属性，结果见图 1。

1-朝藿定A 2-朝藿定B 3-朝藿定C 4-淫羊藿苷 1-epimendin A 2-epimendin B 3-epimendin C4-icariin图 1 混合对照品 (A) 和淫羊藿样品 (B) 的HPLC色谱图 Fig.1 HPLC of mixed reference substances (A) and sample (B)

分别精密吸取不同体积“2.2”项下制备的单一对照品储备液，混合稀释制成6个系列质量浓度混合对照品溶液（朝藿定A：4.230、14.10、28.20、56.40、112.8、225.6 μg/mL；朝藿定B：4.148、13.82、27.63、55.30、110.6、221.2 μg/mL；朝藿定C：13.41、33.54、83.84、209.6、524.0、1 310 μg/mL；淫羊藿苷：2.304、11.52、28.80、72.00、180.0、450.0 μg/mL），分别精密吸取系列质量浓度混合对照品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定其峰面积，每个质量浓度重复进样3次，取平均值，以对照品进样量为横坐标（X），峰面积平均值为纵坐标（Y），进行回归计算，得朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷的回归方程及相关系数，结果见表 2。

表 2(Table 2)

表 2 淫羊藿药材中4个黄酮成分回归方程和线性范围 Table 2 Standard curves of four flavonoids in Epimedii Herba 成分 回归方程 r 线性范围/μg 朝藿定A Y＝1 604.758 45 X＋3.667 073 9 0.999 99 0.042 30～2.256 朝藿定B Y＝1 560.200 06 X＋8.349 361 1 0.999 99 0.041 48～2.212 朝藿定C Y＝1 606.268 97 X＋48.535 437 0.999 97 0.134 10～13.100 淫羊藿苷 Y＝2 178.084 11 X＋2.801 849 7 1.000 00 0.023 04～4.500

表 2 淫羊藿药材中4个黄酮成分回归方程和线性范围 Table 2 Standard curves of four flavonoids in Epimedii Herba

2.6 校正因子的计算

分别精密吸取“2.5”项下制备的系列质量浓度混合对照品溶液10 μL，在上述色谱条件下，进样测定，以淫羊藿苷为内参物，按公式f_si＝f_s/f_i＝(A_s×C_i)/(A_i×C_s)（A_s、C_s分别为内参物对照品的峰面积和浓度，A_i、C_i分别为待测成分对照品的峰面积和浓度）计算淫羊藿苷（简称S）对朝藿定A（简称A）、朝藿定B（简称B）、朝藿定C（简称C）的相对校正因子f_S/A、f_S/B、f_S/C，结果见表 3。

表 3(Table 3)

表 3 淫羊藿药材中4个黄酮成分的相对校正因子 Table 3 RCFS of four flavonoids in Epimedii Herba 实验编号 fS/A fS/B fS/C 1 1.334 1.376 1.331 2 1.365 1.390 1.368 3 1.341 1.380 1.322 4 1.352 1.377 1.332 5 1.366 1.384 1.331 6 1.354 1.395 1.356 平均值 1.352 1.384 1.340 RSD/% 0.940 0.55 1.300

表 3 淫羊藿药材中4个黄酮成分的相对校正因子 Table 3 RCFS of four flavonoids in Epimedii Herba

2.7 精密度试验

精密吸取上述混合对照品溶液10 μL，在上述色谱条件下，重复进样7次，测得峰面积，计算峰面积的RSD，朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷的RSD分别为0.74%、0.96%、0.51%、0.33%，均小于2.0%，表明仪器精密度良好。

精密吸取同一供试品溶液（15号样品）10 μL，分别于0、3、6、9、12、24 h，注入液相色谱仪进行分析，计算各组分峰面积的RSD，朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷的RSD分别为0.42%、0.35%、0.32%、1.0%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

取同一淫羊藿样品（15号样品）6份，每份约0.2 g，精密称定，按“2.3”项方法制备供试液，在上述色谱条件下进行测定，计算朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷的平均质量分数分别为0.28%、0.36%、1.71%、0.21%，其RSD分别为2.2%、2.1%、2.0%、2.2%，结果表明用本法测定时重复性良好。

取已测定的淫羊藿样品（15号样品）9份，每份约0.1 g，精密称定，分别精密加入朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷对照品溶液适量，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下分别测定，分别计算朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷的平均回收率依次为102.21%、100.56%、104.15%、100.44%，RSD值依次为2.5%、2.3%、0.63%、1.2%，表明本方法测定准确度高。

本实验考察了4个实验室的“1.1”项下的4种高效液相色谱系统和8只不同型号色谱柱。分别精密吸取“2.5”项下制备的系列质量浓度混合对照品溶液10 μL，在上述色谱条件下，进样测定，计算朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C对淫羊藿苷的相对校正因子，依次在1.274～1.361、1.330～1.494、1.242～1.340，不同仪器不同色谱柱所得相对校正因子的RSD值在0.74%～3.7%，不同仪器同一色谱柱所得相对校正因子的 RSD值在0.28%～4.8%，表明不同仪器和色谱柱对各成分的相对校正因子无显著影响，结果见表 4。

表 4(Table 4)

表 4 相对校正因子、保留时间差及相对保留时间考察结果 (n = 3) Table 4 Investigation on RCF,retention time difference,and relative retention time (n = 3) 仪器型号 色谱柱 相对校正因子 保留时间差/min 相对保留时间 fS/A fS/B fS/C ΔtA ΔtB ΔtC tRA tRB tRC Agilent 1100型 Agilent Zorbax SB-C18（USCM014766） 1.274 1.332 1.301 8.96 6.21 3.12 0.67 0.77 0.88 Agilent Zorbax SB-C18（USCM030053） 1.282 1.346 1.311 8.98 6.18 2.86 0.68 0.78 0.90 Agilent Zorbax XDB-C18 1.309 1.354 1.309 8.15 5.65 2.73 0.67 0.77 0.89 Agilent Zorbax Extend-C18 1.301 1.365 1.340 8.76 6.26 3.14 0.68 0.77 0.88 Phenomenex synergi 4u Hydro-RP 80A 1.332 1.349 1.309 17.46 11.40 4.06 0.71 0.81 0.93 依利特Hypersil-ODS2 1.343 1.379 1.333 11.32 7.09 2.25 0.74 0.84 0.95 Welchrom-C18 1.337 1.364 1.300 18.35 12.41 4.89 0.70 0.80 0.92 Diamonsil（钻石）-C18 1.354 1.494 1.242 24.34 15.83 6.90 0.70 0.80 0.92 RSD/% 2.200 3.700 2.300 45.30 43.00 40.60 3.40 3.10 2.80 续表 4 仪器型号 色谱柱 相对校正因子 保留时间差/min 相对保留时间 fS/A fS/B fS/C ΔtA ΔtB ΔtC tRA tRB tRC Agilent 1260型 Agilent Zorbax SB-C18（USCM014766） 1.306 1.366 1.332 7.00 4.93 2.70 0.66 0.76 0.87 Agilent Zorbax SB-C18（USCM030053） 1.297 1.362 1.338 7.01 4.92 2.50 0.67 0.77 0.88 Agilent Zorbax XDB-C18 1.300 1.352 1.337 6.31 4.47 2.35 0.66 0.76 0.87 Agilent Zorbax Extend-C18 1.304 1.357 1.332 7.51 5.44 2.92 0.67 0.76 0.87 Phenomenex synergi 4u Hydro-RP 80A 1.293 1.330 1.310 15.46 10.29 4.15 0.70 0.80 0.92 依利特Hypersil-ODS2 1.318 1.355 1.338 9.69 6.23 2.31 0.73 0.83 0.94 Welchrom- C18 1.285 1.346 1.334 15.40 10.67 4.79 0.69 0.78 0.90 Diamonsil（钻石）-C18 1.314 1.350 1.321 20.54 13.69 6.66 0.68 0.79 0.90 RSD/% 0.830 0.820 0.740 47.80 45.80 43.60 3.50 3.20 2.90 日本岛津LC-20AT型 Agilent Zorbax SB-C18（USCM014766） 1.291 1.345 1.308 8.15 5.83 3.38 0.65 0.75 0.86 Agilent Zorbax SB-C18（USCM030053） 1.299 1.342 1.318 8.25 5.86 3.16 0.66 0.76 0.87 Agilent Zorbax XDB-C18 1.300 1.346 1.326 7.27 5.22 2.91 0.66 0.75 0.86 Agilent Zorbax Extend-C18 1.295 1.352 1.331 8.79 6.41 3.56 0.67 0.76 0.87 Phenomenex synergi 4u Hydro-RP 80A 1.308 1.355 1.293 18.51 12.50 5.37 0.70 0.80 0.91 依利特Hypersil-ODS2 1.330 1.366 1.329 11.55 7.48 2.97 0.72 0.82 0.93 Welchrom- C18 1.302 1.358 1.317 17.77 12.49 5.92 0.68 0.78 0.89 Diamonsil（钻石）-C18 1.361 1.440 1.320 24.86 16.77 8.69 0.67 0.78 0.89 RSD/% 1.800 2.4000 0.940 49.20 47.10 45.40 3.40 3.20 2.80 Waters 2487型 Agilent Zorbax SB-C18（USCM014766） 1.299 1.358 1.328 8.51 6.01 3.33 0.65 0.75 0.86 Agilent Zorbax SB-C18（USCM030053） 1.304 1.363 1.333 8.47 5.77 3.00 0.67 0.77 0.88 Agilent Zorbax XDB-C18 1.304 1.341 1.319 7.40 5.27 2.81 0.67 0.76 0.87 Agilent Zorbax Extend-C18 1.298 1.348 1.325 9.42 6.77 3.63 0.66 0.76 0.87 Phenomenex synergi 4u Hydro-RP 80A 1.293 1.336 1.307 18.99 12.79 5.16 0.71 0.80 0.92 依利特Hypersil-ODS2 1.326 1.365 1.333 12.19 7.71 2.89 0.72 0.83 0.94 Welchrom-C18 1.301 1.361 1.327 18.66 12.94 5.84 0.68 0.78 0.90 Diamonsil（钻石）-C18 1.327 1.361 1.303 25.37 16.85 8.22 0.68 0.79 0.90 RSD/% 0.98 0.82 0.86 48.30 46.70 44.00 3.50 3.40 3.10

表 4 相对校正因子、保留时间差及相对保留时间考察结果 (n = 3) Table 4 Investigation on RCF,retention time difference,and relative retention time (n = 3)

2.12 待测组分色谱峰的定位参数考察

建立QAMS法的目的是只使用一种对照品即淫羊藿苷，利用待测成分朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C对于淫羊藿苷的保留时间差或相对保留时间作为定位标准，本实验考察了这2个参数在不同仪器和不同规格色谱柱中的重复性。结果表明：不同仪器不同色谱柱各成分的保留时间差波动较大，RSD值为40.6%～49.2%。而在同样条件下，不同仪器不同色谱柱各成分的相对保留时间波动较小，朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C相对保留时间的RSD值分别为0.65%～0.74%、0.75%～0.84%、0.86%～0.95%，不同仪器、不同色谱柱各成分的相对保留时间RSD值为2.8%～3.5%，不同仪器、同一色谱柱各成分相对保留时间的 RSD值为0.57%～1.8%。因此认为选用相对保留时间这一参数作为淫羊藿药材中待测成分色谱峰的定位指标是比较合理的，结果见表 4。

2.13 样品测定

取淫羊藿药材样品，共计100批次，分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，进样测定，记录朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷色谱峰峰面积，分别采用外标一点法和QAMS法，分别计算干品药材中4个成分的量，并对2种方法测定结果进行比较，结果见表 5。

表 5(Table 5)

表 5 样品测定结果 (n = 3) Table 5 Determination of samples (n = 3) 序号 淫羊藿苷/% 朝藿定A/% 朝藿定B/% 朝藿定C/% 序号 淫羊藿苷/% 朝藿定A/% 朝藿定B/% 朝藿定C/% ESM ESM QAMS ESM QAMS ESM QAMS ESM ESM QAMS ESM QAMS ESM QAMS 1 2.18 0.50 0.50 0.65 0.65 0.90 0.92 51 0.18 0.13 0.13 0.15 0.15 0.70 0.69 2 0.56 0.36 0.36 0.57 0.57 1.29 1.31 52 0.49 0.30 0.31 0.35 0.39 4.75 4.58 3 0.08 0.06 0.07 0.01 0.01 2.32 2.40 53 0.40 0.23 0.23 0.28 0.28 4.38 4.39 4 2.51 0.18 0.18 0.22 0.22 5.92 5.98 54 0.36 0.16 0.16 0.17 0.17 5.23 5.26 5 0.06 0.06 0.06 0.07 0.07 0.12 0.12 55 0.99 0.38 0.38 0.40 0.39 5.89 5.90 6 0.36 0.12 0.13 0.17 0.17 3.64 3.67 56 1.02 0.29 0.29 0.31 0.31 8.77 8.81 7 0.39 0.90 0.89 1.34 1.34 0.39 0.40 57 0.92 0.30 0.31 0.38 0.35 4.53 4.72 8 1.62 0.46 0.45 0.80 0.80 0.49 0.48 58 0.06 0.04 0.04 0.03 0.04 0.27 0.25 9 1.35 0.35 0.35 2.30 2.27 0.76 0.77 59 — — — — — — — 10 0.34 0.20 0.20 0.25 0.25 3.13 3.15 60 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.63 0.62 11 1.10 0.10 0.10 0.18 0.18 3.61 3.69 61 — — — — — — — 12 0.35 0.24 0.24 0.24 0.28 3.22 3.25 62 0.01 0.01 0.01 — — 0.09 0.04 13 0.26 0.26 0.26 0.27 0.27 2.15 2.16 63 0.01 — — — — 1.02 1.22 14 0.16 0.12 0.13 0.17 0.19 1.00 1.06 64 0.63 — — — — 0.01 0.01 15 0.24 0.32 0.22 0.32 0.32 1.79 1.81 65 0.48 0.54 0.54 0.77 0.72 1.02 1.03 16 0.41 0.32 0.33 0.44 0.44 1.11 1.12 66 0.21 0.13 0.13 0.19 0.18 0.49 0.49 17 0.16 0.16 0.15 0.22 0.22 0.94 0.93 67 0.12 0.17 0.17 0.22 0.22 0.56 0.56 18 0.30 0.22 0.23 0.37 0.37 1.79 1.80 68 0.32 0.30 0.30 0.27 0.33 2.67 2.70 19 0.25 0.07 0.07 0.10 0.11 2.26 2.29 69 — — — — — — — 20 0.73 0.31 0.31 0.36 0.36 2.71 2.72 70 — — — — — — — 21 0.99 0.39 0.39 0.43 0.43 3.45 3.47 71 — — — — — — — 22 1.80 0.83 0.84 0.97 0.97 8.65 8.71 72 — — — — — — — 23 0.53 0.34 0.34 0.39 0.39 2.28 2.29 73 0.01 0.29 — — — 6.07 7.21 24 0.19 0.06 0.07 0.11 0.11 0.58 0.59 74 0.83 0.42 0.42 0.50 0.50 0.83 0.83 25 0.81 0.24 0.24 0.27 0.27 2.84 2.85 75 0.28 0.21 0.22 0.26 0.26 1.51 1.56 26 0.43 0.23 0.23 0.26 0.26 1.53 1.55 76 — — — — — — — 27 0.70 0.29 0.29 0.34 0.34 2.38 2.39 77 0.37 0.15 0.16 0.19 0.19 0.95 0.96 28 0.97 0.41 0.41 0.46 0.46 3.15 3.17 78 0.19 0.08 0.08 0.10 0.10 0.49 0.48 29 0.43 0.16 0.17 0.18 0.18 1.56 1.58 79 0.53 0.53 0.52 0.69 0.69 3.27 3.29 30 0.44 0.26 0.27 0.31 0.31 1.42 1.44 80 1.07 0.41 0.41 0.00 0.00 3.19 3.20 31 0.35 0.14 0.14 0.19 0.20 1.08 1.10 81 0.81 0.46 0.46 0.53 0.53 2.59 2.61 32 0.28 0.05 0.05 0.18 0.18 6.76 6.91 82 — — — — — — — 33 0.64 0.46 0.46 0.53 0.53 0.93 0.94 83 — — — — — — — 34 0.58 0.62 0.62 0.72 0.72 4.29 4.31 84 — — — — — — — 35 4.60 0.65 0.65 0.63 0.63 4.31 4.35 85 0.13 0.08 0.08 0.12 0.12 0.20 0.22 36 0.50 0.40 0.40 0.38 0.38 0.89 0.90 86 0.60 0.24 0.25 0.28 0.28 0.79 0.80 37 0.36 0.33 0.34 0.37 0.37 3.76 3.80 87 — — — — — — — 38 0.07 — — — — 4.58 4.62 88 — — — — — — — 39 0.20 0.21 0.20 0.15 0.15 4.06 3.91 89 0.36 0.33 0.33 0.40 0.40 0.56 0.57 40 0.25 0.27 0.27 0.23 0.23 2.43 2.46 90 0.50 0.14 0.10 0.13 0.14 1.19 1.20 41 0.43 0.47 0.47 0.43 0.43 2.64 2.67 91 0.33 0.26 0.26 0.38 0.37 1.19 1.21 42 0.44 0.56 0.56 0.66 0.67 2.92 2.95 92 0.65 0.34 0.34 0.45 0.45 0.57 0.58 43 0.08 0.12 0.14 0.05 0.07 6.75 6.83 93 0.91 0.14 0.15 0.19 0.20 0.97 0.98 44 — — — — — — — 94 — — — — — — — 45 — — — — — — — 95 2.49 0.53 0.54 0.59 0.60 1.74 1.76 46 — — — — — — — 96 2.91 0.55 0.56 0.49 0.50 4.47 4.49 47 — — — — — — — 97 5.36 0.66 0.66 0.74 0.75 5.21 5.25 48 0.25 — — 0.04 0.04 12.93 12.75 98 0.07 0.00 — 0.20 0.22 3.92 4.65 49 0.07 — — — — 10.75 12.53 99 0.97 0.58 0.38 0.47 0.47 2.06 2.08 50 0.29 0.22 0.22 0.27 0.27 3.93 3.94 100 1.80 0.35 0.35 0.39 0.39 5.62 5.66

表 5 样品测定结果 (n = 3) Table 5 Determination of samples (n = 3)

本实验无论是不同仪器、不同色谱柱还是不同仪器、同一色谱柱，测定得到淫羊藿各成分相对校正因子、相对保留时间的RSD均小于5%，符合QAMS法方法学研究的耐用性考察要求，所测定的各成分相对校正因子重现性好，相对保留时间定位准确。采用ESM测定淫羊藿各成分的含量与通过QAMS法计算得到的量进行比较，t检验结果为P＞0.05，表明两种方法测定所得的量没有显著性的差异，结果准确可靠，方法可行且适用性强，进一步验证了QAMS法可作为淫羊藿药材多指标成分质控方法，各成分峰位以其相对保留时间定位，应在规定值的5%～−5%内，朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C的相对保留时间/相对校正因子规定值分别为0.68/1.352、0.78/1.384、0.90/1.340。

由于样品中大部分产地的天平山淫羊藿Epimedii Herba药材中所含黄酮类成分种类较多，且量也较高，本实验在文献报道^[11]的基础上调整流动相为乙腈-水（23∶77），才能使朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C及淫羊藿苷彼此完全分离。供试品溶液的提取方法与文献方法^[11]不同，仍然采用《中国药典》收载淫羊藿测定项下方法^[3]，以保证待测成分采用外标法测定与通过QAMS法计算得到结果的可靠性。