脓毒症（Sepsis）是由细菌感染所致的全身炎症反应综合征（Systemic Inflammatory Response Syndrome，SIRS），是诱发多脏器功能障碍综合症（Multiple Organ Disfunction Syndrome，MODS）的重要原因。急性肺损伤（acute lung injury，ALI）是各种原因造成弥漫性肺间质及肺泡水肿，而导致的急性低氧性呼吸功能不全。引起ALI的原因多样，其中脓毒症被认为是造成ALI进展的最主要高风险因素^[1]。肺组织髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）是主要存在于中性粒细胞和单核细胞中的一种代谢酶^[2]，其水平及活性变化可反映中性粒细胞的功能与活性状态，反应肺组织的损伤程度^[3]。丙二醛（malondialdehyde，MDA）作为脂质过氧化标记物，可用于评价机体的应激水平^[4]，在脓毒症时其水平可显著增加^[5]，并与脓毒症预后相关^[6]。脓毒症ALI一直作为重症医学科中医药治疗的重点研究方向，在长期临床观察的基础上，认为其发病初期以实证为主，温热邪毒侵犯肺及大肠为重要病机，据此提出运用通腑活血、凉营解毒法进行治疗，并创立炎调方。前期临床及动物实验表明，炎调方具有凉血解毒、通腑活血之功效，对脓毒症血清炎症因子的释放具有调控作用^[7-9]。本研究制备脓毒症ALI大鼠模型，观察炎调方对脓毒症ALI大鼠肺组织MPO、MDA水平的影响。

50只清洁级健康雄性SD大鼠，体质量（200～220）g，由上海中医药大学实验动物中心提供，合格证号SCXK（沪）2008-0016，饲养于清洁级动物房内，温度23 ℃，湿度50%，12 h照明，动物自由进食饮水。

炎调方由桃仁、生大黄、芒硝、玄参、赤芍、当归等药物组成，所有药物均为符合《中国药典》2015年版规定并加工炮制合格的饮片，由上海中医药大学附属上海市中医医院中药房提供。煎煮方法：以10倍体积的蒸馏水浸泡饮片30 min，先用武火煮桃仁、玄参、赤芍、当归，沸腾后改用文火煎煮20 min，再加入大黄继续煎煮10 min后熄火取药液；第二煎加入相当于饮片6倍体积的蒸馏水，用武火煎煮至沸腾后改文火煎煮20 min，熄火取药液，两次药液混合，用四层无菌纱布过滤，最后纳入芒硝并充分溶解，将药液浓缩成含生药1.0 g/mL的棕色透明液体，置4 ℃冰箱保存备用^[8]。

注射用地塞米松磷酸钠（马鞍山丰原制药有限公司，批号140612-1，每支5 mg）；MPO和MDA检测试剂盒（上海富勒生物科技有限公司）。

DENLEY DRAGON Wellscan MK 2全自动多功能酶标仪（芬兰Thermo公司）；TGL-168离心机（上海安亭科学仪器厂）；LEICA HI1220烘片机、LEICA RM2035旋转切片机、LEICA ASP300自动脱水机、LEICA EG1160石蜡包埋机（德国徕卡仪器公司）。

采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症ALI大鼠模型^[10]：大鼠经10%水合氯醛（0.5 mL/kg）麻醉后，以腹正中作一1.5 cm长的切口，找到盲肠，在其根部结扎，用5 mL注射器针头穿通3次，轻挤出少量肠内容物，留置2 mm皮瓣防止针孔闭合，还纳盲肠于腹腔，逐层缝合腹壁切口，术毕sc生理盐水（30 mL/kg）抗休克^[7-8]。假手术组经麻醉后开腹，轻轻翻动肠道后关腹。

大鼠按随机数字表分为5组：对照组、假手术组、模型组、炎调方组、地塞米松组，每组10只，适应性饲养1周。炎调方组ig炎调方（生药量为9.9 g/kg，按原方临床剂量换算为动物等效剂量^{[7-8, 14]}），地塞米松组ig地塞米松（0.45 mg/kg），给药体积为10 mL/kg，每天给药1次，连续给药3 d。对照组、假手术组、模型组ig等体积生理盐水。末次ig 2 h后，进行CLP手术，术后24 h取材。

ip 10%水合氯醛麻醉处死大鼠后，沿大鼠左右肋软骨迅速打开胸腔，快速取出左右肺，冰上切取左、右肺组织。

取左肺测定肺湿/干重比（W/D）。用滤纸吸去组织多余水分后称重（湿重），后置于60 ℃烤箱内干烤72 h，再次称重（干重），计算肺湿/干重比（W/D）。

右肺用冰生理盐水冲洗表面，取1/3组织标本，经甲醛固定后，常规石蜡包埋、切片、二甲苯脱蜡，再经各级乙醇至水洗，苏木素、伊红染色后常规脱水，透明，封片。

剩余肺组织以生理盐水制备成10%匀浆，按照MPO和MDA检测试剂盒说明书操作，分别在460和532 nm处测吸光度（A）值，根据标准品计算肺组织中MPO和MDA水平。

计量资料以x±s表示，应用SPSS 18.0统计软件，组间均数比较采用单因素方差分析。

对照组和假手术组大鼠形态、饮食、呼吸、活动量无明显异常，大便正常；模型组大鼠术后精神萎软，体毛竖立、凌乱，活动少，呈蜷缩状，眼鼻处分泌物多，不欲饮食，呼吸频率增快，腹部膨隆，无大便；炎调方与地塞米松组大鼠术后精神状况、活动量及眼鼻分泌物好于模型组。

对照组及假手术组肺组织形态、结构正常，肺泡量多，其腔内清晰，肺泡间隔无明显水肿、炎症等病理改变；模型组可见肺间质水肿明显，炎症细胞大量浸润，肺泡明显减少，肺组织实变明显；炎调方及地塞米松组与模型组比较，损伤范围较小，肺泡量较多，肺间质水肿及炎性细胞浸润减轻，肺实变减轻。结果见图 1。

图 1 各组大鼠肺组织HE染色 Fig. 1 HE staining of lung tissue of rats in each group

模型组肺组织W/D值较对照组及假手术组明显升高，差异显著（P＜0.01）；炎调方组及地塞米松组肺组织W/D值较模型组明显降低（P＜0.01）；地塞米松组肺组织W/D值较炎调方组降低（P＜0.05）。结果见表 1。

表 1(Table 1)

表 1 各组大鼠肺组织W/D值比较(x±s, n = 10) Table 1 Comparsion of W/D value in lung tissue of rats in each group(x±s,n = 10) 组别 剂量/(mg∙kg−1) W/D 对照 — 3.722±0.125 假手术 — 3.939±0.103 模型 — 6.297±0.155**## 炎调方 9900 5.303±0.128∆∆ 地塞米松 0.45 4.884±0.097∆∆☆ 与对照组比较：**P＜0.01；与假手术组比较：##P＜0.01；与模型组比较：∆∆P＜0.01；与炎调方组比较：☆P＜0.05 **P < 0.01 vs control group; ##P < 0.01 vs shamgroup; ∆∆P < 0.01 vs model group; ☆P < 0.05 vs Yantiaofang group

表 1 各组大鼠肺组织W/D值比较(x±s, n = 10) Table 1 Comparsion of W/D value in lung tissue of rats in each group(x±s,n = 10)

模型组MPO水平明显高于对照组及假手术组（P＜0.01）；炎调方及地塞米松组MDA、MPO水平较模型组均有不同程度的下降（P＜0.05），而炎调方与地塞米松组MDA、MPO水平差异不显著。结果见表 2。

表 2(Table 2)

表 2 各组大鼠肺组织MDA和MPO水平比较(x±s±s, n = 10) Table 2 Comparison of MDA and MPO levels in lung tissue of rats in each group(x±s±s, n = 10) 组别 剂量/ (mg∙kg−1) MDA/ (nmol∙mL−1) MPO/ (U∙g−1) 对照 — 1.493±0.962 1.255±0.101 假手术 — 1.739±0.131 1.579±0.102 模型 — 4.458±0.426**## 3.383±0.361**## 炎调方 9900 2.488±0.177∆ 1.998±0.153∆ 地塞米松 0.45 2.100±0.103∆∆ 1.624±0.159∆∆ 与对照组比较：**P＜0.01；与假手术组比较：##P＜0.01；与模型组比较：∆P＜0.05 ∆∆P＜0.01 **P < 0.01 vs control group; ##P < 0.01 vs sham group; ∆P < 0.05 ∆∆P < 0.01 vs modelgroup

表 2 各组大鼠肺组织MDA和MPO水平比较(x±s±s, n = 10) Table 2 Comparison of MDA and MPO levels in lung tissue of rats in each group(x±s±s, n = 10)

研究表明，氧化应激在ALI的发生发展过程中起着重要的作用。MPO是一种亚铁血红素酶，其为髓细胞的特异性标志，主要存在于中性粒细胞中，可催化氯离子生成次氯酸和具有氧化能力的自由基，从而启动脂质过氧化反应^[11]。MDA是自由基与生物膜多聚不饱和脂肪酸发生脂质过氧化的产物，可反应组织的过氧化程度^[12]。当机体处于炎症及氧化应激状态时，体内产生的氧化物超过机体的抗氧化能力，即会产生组织损伤。

脓毒症ALI发生率及病死率高，对人类健康造成重大威胁。近年来随着抗生素的不断面世及治疗方法日趋多样化，仍未能明显改善其预后。既往脓毒症的研究多集中在炎症反应方面，近年来，氧化应激在脓毒症发展过程中所起的作用越来越受到人们的重视。脓毒症在中医学理论体系中并无相应的病名，根据症状体征和疾病演变过程，脓毒症当属中医学“温病”“热病”范畴。脓毒症ALI则属于中医“喘证”、“暴喘”、“喘脱”范畴。诸多临床研究证明中药联合西医治疗脓毒症ALI比单纯西医治疗效果显著，且已有研究表明中药可改善机体氧化应激状态，减轻机体损伤的严重程度^[13]。

炎调方由大黄、芒硝、桃仁、赤芍、玄参、当归等组成，方中大黄、芒硝、桃仁清热、通腑、活血为君药；赤芍、玄参清营、凉血、滋阴，为臣药；当归活血补血为佐药。全方配伍共奏通腑清营活血之功。本研究显示，炎调方能减轻脓毒症肺组织病理变化，降低肺组织W/D，降低脓毒症大鼠肺组织中MPO及MDA水平，减轻脓毒症ALI大鼠的炎症及氧化应激反应，与地塞米松作用相似。由此揭示炎调方除了前期研究证实的可通过减少炎症因子的释放，减轻组织损伤以外^[14]，其减轻氧化应激反应可能也作为另一个途径改善脓毒症肺组织损伤，其作用机制可作进一步深入研究。