白藜芦醇苷（polydatin，PD）是虎杖的主要成分，在植物中分布广泛。研究表明，PD对心肌细胞和血管平滑肌细胞等具有保护作用^[1]，可抗血小板聚集、改善微循环^[2]，同时具有抗菌^[3]、抗病毒、抗氧化^[4]、调血脂^[5-6]及抗肿瘤^[7]等作用。然而，PD在水中溶解度小，对光、温度不稳定，半衰期短^[8]，生物体内消除迅速^[9]等特性限制了其在临床上的应用。因此开发PD的相关剂型，改善PD的理化性质对开拓PD的临床应用具有重要的意义。目前，PD的相关剂型有脂质体、包合物等^[10-11]。

固体分散体（SD）是利用一定的技术使药物以固体溶液、微晶或无定型状态高度分散在载体中所形成的分散体系^[12]。药物粒子因粒径降低使其表面吉布斯能显著增大，从而提高难溶性药物的溶解度、溶出度和生物利用度^[13-14]。SD可以是最终产品，也可作为剂型中间体^[15-16]，这对于PD的产品化和后开发具有重要意义。本研究采用溶剂蒸发法制备PD-SD，对其理化性质进行表征，并进行生物利用度评价。

1 仪器与材料

AB135-S型十万分之一分析天平，德国梅特勒公司；KQ-300B型超声波清洗仪，昆山超声仪器有限公司；DZF-6050型真空干燥箱，上海博讯实业有限公司；UV-3150紫外分光光度计，日本岛津公司；Avater370傅里叶红外光谱仪，X射线衍射仪，荷兰菲利普公司；DSC204热分析仪，德国Netzsth公司；JSM-T20型扫描电镜，日本电子公司；岛津LC-15C高效液相色谱仪，日本岛津公司；LC-4016低速离心机，安徽中科中佳科学仪器有限公司；XW-80A微型旋涡混合仪，上海沪西分析仪器厂有限公司。

PD对照品，质量分数≥98%，批号W3890，成都西亚化工股份有限公司；PVPK30、P188，国药集团化学试剂有限公司；PEG 6000，天津市光复精细化工研究所；透析袋，美国biosharp公司；色谱甲醇，天津市大茂化学试剂厂；无水乙醇，上海苏懿化学试剂有限公司；其余试剂均为分析纯。

SD大鼠，许可证号：2011（皖）-002，雌雄各半，体质量（200±20）g，由安徽省实验动物中心提供。

2 方法 2.1 溶出度的测定 2.1.1 标准曲线的绘制

精密称取PD对照品5.00 mg，置于50 mL量瓶中，加入甲醇适量使其溶解，所得溶液作为储备液。精密吸取适量储备液，加水稀释，配制质量浓度为15、12、9、6、4、2 μg/mL的系列对照品溶液，以水为空白对照，在322 nm处测定吸光度（A）值。以A值对PD质量浓度（C）作线性回归，得线性方程：A=0.069 5 C-0.010 2，r=0.999 5，线性范围为2~15 μg/mL。

2.1.2 溶出度实验

精密称定相当于PD 4 mg的样品，置于透析袋中（截留相对分子质量为8 000~14 000），按《中国药典》2015年版二部第三法小杯法，以100 mL水为溶出介质，温度为（37.0±0.5）℃，转速设定为100 r/min。分别于15、30 min及1、1.5、2.5、3.5、5、7、9、12、24 h取样1 mL，同时补加等体积介质。样品稀释3倍，以水作为空白对照，在322 nm波长处测A值，根据“2.1.1”项下标准曲线方程计算累积溶出率。

2.2 PD-SD的制备

采用溶剂蒸发法制备PD-SD。精密称取定量的PD原料药和载体，加定量无水乙醇充分溶解。然后旋转蒸发除去溶剂，真空干燥24 h，最后将所得产物研细，即得PD-SD。

2.3 PD-SD处方比例的筛选与优化 2.3.1 载体材料的筛选

按药物与载体为1：2的比例分别称取PD、PVPK30^[17-18]、P188^[19-20]以及PEG 6000^{[12, 21]}，按“2.2”项下方法制备PD-SD，采用体外溶出方法筛选最优载体材料。当药物-载体比例相同时，不同的载体对药物的溶出行为有一定的影响^[22-23]。如图 1所示，当载体为PVPK30时，药物溶出速率较载体为P188和PEG 6000时快，24 h的累积溶出率为94.2%，相对于P188（68.1%）和PEG 6000（77.8%），溶出度的提高也更明显，因此，在这3种载体中，PVPK30为最优载体。

2.3.2 药物-载体比例的筛选

按药物与载体比例为1：1、1：2、1：3、1：4分别称取PD和最优载体（PVPK30）^[17]，按“2.2”项下方法制备PD-SD，采用体外溶出方法筛选药物与载体的最适比例。当载体相同，药物-载体比例不同时，溶出结果显示，随着载体比例的增加，体外溶出速率及累积溶出率均呈现增加的趋势。如图 2所示，当药物-载体比例低于1：3时，可能载体没有完全包裹药物，药物的溶出速率虽有一定的增加，但并没有完全释放。当比例增加至1：3时，药物释放速率迅速增加，且累积溶出率达到96.2%。继续增加载体的量至1：4时，溶出速率几乎没有继续增加，进一步增加载体用量将会阻碍药物释放^[24]。同时考虑制剂的安全性，最佳处方的药物-载体比例选择为1：3。

2.4 PD-SD理化性质的表征 2.4.1 傅里叶变换红外光谱（FT-IR）分析

采用KBr压片，在波数为4 000~500 cm⁻¹分别对PD、最优载体（PVPK30）、PD-SD以及PD与PVPK30物理混合物进行FT-IR分析，考察药物与载体间是否有相互作用。由FT-IR图谱（图 3）可看出，PD-SD的FT-IR吸收峰几乎为PD与载体PVPK30的物理叠加。PD-SD中PD相对于PD原料药特征峰没有明显的变化，说明PD-SD在制备的过程中没有明显的化学键改变。

2.4.2 差示扫描量热（DSC）分析

分别对PD、最优载体（PVPK30）、PD-SD以及PD与PVPK30物理混合物进行DSC分析。将约10 mg的待测样品置于DSC坩埚中，以空白坩埚为对照，气体为N₂，升温速度10 ℃/min，扫描范围0~250 ℃。由图 4可知，原料药PD在223.45 ℃有尖锐熔融峰存在，说明PD主要为晶体结构。在PD与PVPK30的物理混合物中，该熔融峰虽然有所减小，但仍然存在，说明简单的物理混合虽然能使药物的结晶度减小，但药物仍以原来的晶形存在。而PD-SD中的药物PD熔融峰完全消失，说明PD在载体中的晶形发生了改变，可能以分子或无定形的形式存在于载体中。

2.4.3 粉末X射线衍射（XRD）分析

分别对PD、最优载体（PVPK30）、PD-SD以及PD与PVPK30物理混合物进行粉末XRD分析。XRD分析条件为Cu-K α辐射；电流：20 mA；电压：40 kV；扫描范围：10°~80°（2θ）；步长：0.05 ℃；扫描速率：5°/min。

图 5中（b）为载体PVPK30的衍射峰，峰宽而平缓，说明载体结晶程度较弱，主要呈无定形形式存在；（a）为PD原料药粉末的衍射峰，图中出现了尖锐的晶体衍射峰，表明PD结构为晶形结构；而PD-SD的衍射峰（c）中，PD的特征结晶峰完全消失，表明PD在载体中的晶形结构已发生变化，药物以无定形或分子存在于PD-SD中。这些结果证实了PD在形成PD-SD后，结构发生了变化，由晶形转变成无定形。这也解释了PD-SD提高体外溶出和生物利用度的原因。

2.4.4 扫描电子显微镜（SEM）观察

将PD和PD-SD涂于干净的铜片上，喷金后观测PD-SD的表面形态。

由图 6-a可知，PD原料药是以棒状晶体结构存在，而在图 6-b中PD-SD，PD在载体中分散均匀，并且粒径较原料药明显变小。PD以无定形的非规则形态存在，该结果进一步证实了PD以分子态或无定形的形态存在于PD-SD体系中，且比表面积小，从而实现溶出速率的变化。

2.5 药动学研究 2.5.1 给药方法及血样采集

将12只SD大鼠（体质量180~220 g）随机分为2组，每组6只。给药量以PD计为300 mg/kg，分别记录为A组、B组，大鼠禁食不禁水12 h。A组大鼠ig给于PD原料药溶液，B组大鼠ig给于PD-SD溶液。A组、B组分别于给药后5、15、30、60、90、120、180、240、360、480、600 min等时间点时眼底静脉丛取血300 μL，加入肝素化离心管中，3 000 r/min离心15 min，取上层血浆，−20 ℃条件下避光保存备用。

2.5.2 血浆样品的预处理

将血浆样品置于涂有肝素的EP管中，3 000 r/min离心15 min，取100 μL血浆，加入200 μL乙腈，涡旋振荡2 min，3 600 r/min离心15 min，吸取上清液过0.22 μm有机滤膜后，经HPLC测定。

2.5.3 样品测定色谱条件

COSMOSIL 5C₁₈-MS-Ⅱ色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相为乙腈-水（20：80）；体积流量1 mL/min；柱温30 ℃；检测波长322 nm；进样量20 μL。

2.5.4 方法专属性实验

在上述色谱条件下，取空白血浆及血浆样品溶液，按照“2.5.2”项下方法进行操作，进样，记录色谱图。考察血浆对PD测定的影响，结果如图 7。从图中可以看出，该方法分离效果好，专属性强，血浆中杂质或内源性物质均不干扰测定。

2.5.5 标准曲线的制备

精密称取10 mg PD对照品至100 mL棕色量瓶中，用10 mL甲醇溶解，再用甲醇定容至100 mL，摇匀，即得质量浓度100 μg/mL的对照品储备液。精密吸取适量对照品储备液，用甲醇稀释得质量浓度为20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.312 5 μg/mL的系列对照品溶液。

分别精密吸取系列对照品溶液20 μL，加80 μL空白血浆，混合后按“2.5.2”项下血浆样品的预处理方法处理。分别取20 μL进样，以待测物质量浓度（C）为横坐标，待测物峰面积（A）为纵坐标，用加权最小二乘法进行回归计算，求得的直线回归方程为Y=27 179 X+2 330.1，r值为0.999 5，线性范围0.312 5~20 μg/mL。

2.5.6 精密度试验

分别制备高、中、低3种质量浓度（20、2.5、0.312 5 μg/mL）PD血浆样品，按“2.5.2”项下方法处理后，进样分析，同1日内批内平行测定5次，计算日内精密度；连续测定3 d，计算日间精密度。结果高、中、低3个质量浓度血浆样品的日内精密度分别为6.58%、6.26%和3.37%，日间精密度分别为3.33%、1.05%和0.91%。

2.5.7 方法回收率试验

分别制备高、中、低3种质量浓度（20、2.5、0.312 5 μg/mL）PD血浆样品，按照“2.5.2”项下方法操作，以测得的药物质量浓度与真实质量浓度之比表示方法回收率。计算高、中、低3个质量浓度血浆样品的方法回收率。结果高、中、低3个质量浓度血浆样品的平均回收率分别为96.71%、95.84%和96.04%，均符合要求。

2.5.8 稳定性试验

将血浆样品反复冻融3次；室温放置24 h；−20 ℃冷冻放置15 d。结果表明药物在放置和测定过程中均稳定，满足分析要求。

2.5.9 药动学参数

PD和PD-SD经大鼠ig给药后血药浓度-时间曲线见图 8，实验数据经3p97软件计算得到的主要药动学参数见表 1。由图 8和表 1可知，大鼠ig给药后，PD-SD血药浓度在30 min时达到峰值2.20 μg/mL，与原料药PD（1.08 μg/mL）相比血药浓度提高了2.04倍。PD和PD-SD的AUC_0-∞分别为（139.70±21.49）、（328.79±48.52）μg·min/mL。PD-SD的相对生物利用度是PD的2.35倍。

3 讨论

PD具有抗肿瘤、抗氧化、抗病毒等多种生物活性和广泛的药理作用^[4-7]，人们对它的研究越来越多^{[10-11, 25]}，然而水溶性较差和生物利用度较低等缺陷限制了其在临床上的应用。为了提高PD的生物利用度，本实验采用溶剂蒸发法^[26-27]制备PD-SD。在载体材料的筛选的阶段，当载体选择PVPK30时，药物溶出速率快于P188和PEG 6000，故采用PVPK30为载体材料。确定载体材料后，药物-载体比为1：3时，体外溶出度达到最大值。

本实验采用FT-IR、DSC、XRD、SEM对PD-SD的结构变化和形态进行表征，发现相比于原料药，PD形成PD-SD后结晶度显著降低，主要以无定型状态存在，主要由于载体的抑晶作用。同时由于药物分散在载体中，增加了药物的粒径，这些也解释了PD-SD累积溶出率增大的原因^[22]。越来越多的报道关于SD可以提高难溶性药物的口服生物利用度^[28-29]。药物的溶解性极大程度影响了口服药物在胃肠道吸收。PD具有较低的溶解性，对于难溶性药物而言，溶出是吸收的限速过程^[30]。

PD-SD经ig给药后其生物利用度为（328.79±48.52）μg·min/mL，而PD原料药生物利用度仅为（139.70±21.49）μg·min/mL，PD-SD明显提高了PD的生物利用度。主要因为PD-SD增加了药物的溶出，进而增大了药物在大鼠体内的吸收。可见SD技术可用于改善PD口服给药的体内生物利用度。本次研究成功制备了PD-SD，方法简单可行，以期能够为后期临床研究提供指导。