水飞蓟Silybum marianum (L.) Gaertn. 别名水飞雉、奶蓟、老鼠筋和乳蓟子，为菊科（Compositae）水飞蓟属Silybum Adabs,一、二年生草本植物，原产于地中海沿岸，因叶表面有乳白色斑纹而得名^[1]，主要以瘦果入药，具有保肝利胆、健脑、抗癌和防辐射之功能。从确定了保肝的有效成分水飞蓟素后，水飞蓟已在许多地区广为种植^{[2, 3]}。近年来对水飞蓟的研究多集中在化学成分分析和测定、药理作用和栽培方面^{[2, 3, 4, 5]}，但有关水飞蓟种子质量检验方法的系统研究尚未见报道。为此，本实验对水飞蓟种子的净度、千粒质量、真实性鉴定、生活力的检验方法及发芽条件进行了系统研究，以期为制定水飞蓟种子检验规程和质量分级标准提供依据。

1 材料

样品由安徽省亳州市聚仁中药材种植有限责任公司提供。经西北师范大学王一锋教授鉴定为水飞蓟Silybum marianum (L.) Gaertn. 的干燥种子。

2 方法 2.1 千粒质量的测定^[6]

分别用百粒法、五百粒法和千粒法测定水飞蓟种子质量。

2.1.1 百粒法

随机从净种子中数取100粒，重复4次，分别记录百粒质量，计算标准差及变异系数；2.1.2 五百粒法 随机从净种子中数取500粒，重复4次，分别记录500粒质量，计算标准差及变异系数。

2.1.3 千粒法

随机从净种子中数取1 000粒，重复4次，分别记录1 000粒质量，计算标准差及变异系数。

2.2 种子真实性鉴定

采用种子外观形态法，逐粒观察水飞蓟种子形态特征并记录。并随机数取100粒种子，测定种子的大小，重复4次。

2.3 发芽率测定 2.3.1 发芽适宜温度和光照条件的确定

以双层滤纸为发芽床，置于5、10、15、20、25、30 ℃下培养，测定发芽率；并在20 ℃条件下进行光照和黑暗2个处理^[6]，测定发芽率。

2.3.2 发芽前种子处理方法

用自来水冲洗种子1、2、4、8、12、16、20、24 h后，计算种子发芽率^[6]。

2.3.3 适宜发芽床的确定

发芽床试验设5个处理：（1）在培养皿中铺1层湿润滤纸，然后置种；（2）在培养皿中铺2层湿润滤纸，然后置种；（3）在培养皿中铺2 cm厚消毒沙子，置种后再覆盖1 cm厚沙子；（4）把滤纸折叠，然后置种；（5）在培养皿中放入60目过筛并用高温消毒的沙子20 g，沙上放1层滤纸，然后置种。在20 ℃光照条件进行培养。发芽实验每处理4次重复，每重复100粒种子。

2.3.4 发芽计数时间的确定

根据种子发芽表现，确定初次计数和末次计数时间。以胚根伸出种皮2 mm时的天数为初次计数时间，以种子萌发数达到最高时，以后再无萌发种子出现时的天数为末次计数时间^[3]。

2.4 生活力测定

取水飞蓟种子4份，采用TTC染色法、红墨水染色法^[7]、电导率测定法^[8]分别测定水飞蓟种子的生活力，确定最佳方法。

2.5 种子的清选 2.5.1 筛选法

取待清选样品50 g，分别采用40、60、80、120目的标准筛，筛去植株残体、土粒和石子及微尘等杂质。每处理3个重复。

2.5.2 风选法

取待清选样品50 g，用风扇风选种子，风扇与待清选样品距离大约70 cm，风力由1档上升到3档，大约5 min后，将种子分为干净种子和植株残体。每处理3个重复。

2.5.3 水选法

取待清选样品50 g置于500 mL的烧杯中，立刻用玻璃棒顺时针搅拌，使种子沉入杯底，植株残体浮在水面。弃去植株残体，将种子倒入120目的网袋中，用流动自来水冲去多余尘土。将种子冲洗干净后，立刻用吸水纸擦干。每处理3个重复。

2.5.4 筛风水选法

取待清选样品50 g，先经120目的标准筛筛选后，用风扇风选种子，再将种子置于水中冲洗干净后，分别置于纸床上培养，每皿100粒，4次重复，培养温度为20 ℃、16 h光照，并记录其发芽情况，选出最适方法^[6]。

2.6 种子的净度分析

从样本中分取试验样本50 g。将试样分离成干净种子、重型混杂物、瘪种及残茎杆、其他植物种子4种成分后分别称定质量，重复4次，计算净种子质量百分率^[6]。

3 结果与分析 3.1 千粒质量的测定

分别用百粒法、五百粒法和千粒法对种子的千粒质量进行测定（表 1）。结果表明，百粒法测定的水飞蓟种子误差较大，五百粒法和千粒法得到的千粒质量差异不显著，但千粒法的变异系数显著低于五百粒法，因此水飞蓟种子质量测定宜采用千粒法。

3.2 真实性鉴定

水飞蓟果实外部形态特征：瘦果压扁，长椭圆形或长倒卵形，长5.68～7.14 mm，宽2.1～3.0 mm，厚0.84～2.28 mm，褐色，有线状长椭形的深褐色色斑，顶端有果缘，果缘边缘全缘，无锯齿。

3.3 发芽率测定 3.3.1 种子发芽前处理

发芽前水飞蓟种子用自来水冲洗处理1、2、4、8、12、16、20、24 h，发芽率分别为54%、61%、47%、49%、45%、44%、45%、40%，由此可知，水飞蓟种子发芽前，用自来水冲洗处理最适冲洗时间为2 h。

3.3.2 发芽床选择

发芽床对种子的发芽有一定影响。表 2表明，5种发芽床中，以沙中间处理水飞蓟种子的发芽率最低，仅为20.42%；双层滤纸床种子发芽率最高，为64.56%，与其他处理差异极显著。其中，双层滤纸床优于沙滤纸床，沙滤纸床优于单层滤纸床，单层滤纸优于折叠滤纸，折叠滤纸优于沙中间。因此，用双层滤纸床作为发芽床最好。

3.3.3 发芽温度和光照

随着温度的升高，水飞蓟种子的发芽率呈现先升后降的趋势，以20 ℃条件下发芽率最高，除与25 ℃下差异不明显，与其他处理均达极显著水平（表 3）。在20 ℃条件下，光照与黑暗条件相比，8 000 lx光照可显著提高水飞蓟种子发芽率。所以选择20 ℃培养结合8 000 lx光照条件最适宜水飞蓟种子的萌发。

3.3.4 发芽计数时间的确定

从发芽实验过程可知，水飞蓟种子吸水后，第4天开始发芽，发芽10 d后水飞蓟种子发芽速度明显下降，并趋于平缓，14 d后再无种子发芽。因此，整个发芽时间计数时间在4～14 d，第4天可作为初次计数时间，第14天可作为末次计数时间。

3.4 种子生活力的测定

采用红墨水染色法、TTC染色法^[7]、电导率测定法^[8]分别测定水飞蓟种子的生活力。结果表明，用TTC染色法种子生活力为84.46%、用红墨水染色法为69.91%，电导率法为92.38%。由此说明，可采用电导率法来测定水飞蓟种子的生活力。

3.5 净度分析

水飞蓟种子清选用筛选法、风选法、水选法清选水飞蓟种子后种子的净度分别为80.94%、79.88%、82.04%，而筛风水选法的清选净度为97.80%。根据该方法做净度分析，各重复种子的增失差均没有偏离原始质量的5%（表 4）。

将4种方法清选出的水飞蓟种子进行发芽试验，水选后的种子发芽率最高可达60.66%。而筛风水选后的种子发芽率只有44.5%（表 5）。虽然筛风水选法筛选种子净度的效率极高，但筛风水选法筛出的种子发芽率明显低于其他3种方法，除筛风水选与未清选间差异不显著外，其他处理方法间差异极显著，因此，用筛风水选法只适合测定净度，不宜清选种子，从种子安全贮存角度和操作方便的角度，清选种子用风选法。

4 讨论

水飞蓟以种子繁殖，种子质量是影响规范化栽培生产的关键因素之一。目前，农作物种子质量国家有成熟的标准，中药只有个别品种有标准^{[9, 10]}，其他中药种子缺乏相应的检测方法和质量控制手段，药材市场存在以次充好，以假乱真的现象。因此，制定水飞蓟种子检验规程和质量分级标准是药材质量的保征。

种子检验是保证种子质量的主要手段^[6]。通过净度分析、真实性鉴定、千粒质量、发芽率及生活力6方面对水飞蓟种子质量检验方法进行研究，结果表明，种子的清选采用风选法；真实性鉴定采用外观形态比较；用千粒法测定千粒质量；发芽条件为在种子发芽前用自来水冲洗2 h，以双层滤纸为发芽床，在20 ℃条件下、8 000 lx光照培养，计数时间为4～14 d；用电导率法测定生活力。

进行种子质量检验标准化研究是发展药材必不可少的手段。由于水飞蓟有保肝利胆的功效，许多地方都开始引种栽培，且区域面积不断扩大，因此建立水飞蓟种子的质量检验方法意义深远。