中草药  2014, Vol. 45 Issue (19): 2770-2775
0
  PDF    
引用本文doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.19.008
沈成英, 申宝德, 徐平华, 李晓荣, 闵红燕, 韩晋, 袁海龙. 灵芝三萜纳米混悬凝胶剂的制备及其体外透皮研究[J]. 中草药, 2014, 45(19): 2770-2775.
SHEN Cheng-ying, SHEN Bao-de, XU Ping-hua, LI Xiao-rong, MIN Hong-yan, HAN Jin, YUAN Hai-long. Preparation of nanosuspension-based gel of Ganoderma lucidum triterpenoids and its in vitro transdermal diffusion characteristics[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2014, 45(19): 2770-2775.
灵芝三萜纳米混悬凝胶剂的制备及其体外透皮研究
沈成英1,2, 申宝德2, 徐平华2, 李晓荣1,2, 闵红燕2, 韩晋2 , 袁海龙2     
1. 成都中医药大学药学院, 四川 成都 611137;
2. 中国人民解放军第三〇二医院, 北京 100039
收稿日期: 2014-5-21;
基金项目： 家新药创制重大专项（2014ZX09J14106-01A）;北京市自然科学基金资助项目（7122176）
作者简介：沈成英（1989—），女，硕士研究生，研究方向为中药新制剂、新剂型、新技术研究。E-mail: shenchengying0728@163.com
通讯作者：韩 晋，硕士，博士生导师，研究方向为医院药学。Tel: (010)66933225 E-mail: hanjin302emba@163.com;袁海龙，博士，研究员，博士生导师，研究方向为中药新型给药系统。Tel: (010)66933367 E-mail: yhlpharm@126.com
摘要：目的 研制灵芝三萜纳米混悬凝胶剂（GT-NS-gel），并进行体外透皮研究。方法 采用高压均质法制备灵芝三萜纳米混悬剂（GT-NS），然后进一步制成凝胶剂。以24 h体外累积释放率和24 h后皮肤中的滞留量为指标，通过效应面法优化GT-NS-gel的处方；比较优化后的GT-NS-gel和灵芝三萜凝胶剂（GT-gel）的体外经皮渗透量及滞留量。结果 以最优处方：5 mg/g卡波姆940、30 mg/g GT、47.2 mg/g卵磷脂制得的GT-NS-gel在24 h时的体外累积释放率为（56.28±2.16）%，24 h皮肤滞留量为（472.89±8.74）μg/cm2，理论预测值与实测值接近，模型具有良好的预测性；GT-NS-gel 24 h药物累积渗透量和皮肤滞留量分别为（50.73±4.97）和（475.89±10.74）μg/cm2，明显高于GT-gel的（14.79±3.45）和（101.32±7.02）μg/cm2（P<0.05）。结论 将灵芝三萜制成纳米混悬凝胶剂，能够增加药物的皮肤滞留量，提高药物在皮肤局部的生物利用度。
关键词： 灵芝三萜     纳米混悬剂     凝胶剂     体外释放     经皮渗透     滞留量     效应面法    
Preparation of nanosuspension-based gel of Ganoderma lucidum triterpenoids and its in vitro transdermal diffusion characteristics
SHEN Cheng-ying1,2, SHEN Bao-de2, XU Ping-hua2, LI Xiao-rong1,2, MIN Hong-yan2, HAN Jin2, YUAN Hai-long2    
1. College of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 611137, China;
2. 302 Military Hospital of China, Beijing 100039, China
Abstract: Objective To prepare the nanosuspension-based gel of Ganoderma lucidum triterpenoids (GT-NS-gel) and investigate the in vitro transdermal diffusion characteristics. Methods GT-NS was prepared by high pressure homogenization and then transformed into gel. The formulation of GT-NS-gel was optimized by response surface method with cumulative release of drug from the GT-NS-gel within 24 h, and the amount of drug in the skin after applying GT-NS-gel for 24 h was used as indexes. In vitro percutaneous permeation and skin deposition of GT-NS-gel were studied and compared with those of GT-gel. Results The GT-NS-gel prepared by optimal formulation (5 mg/g Carbomer 940, 30 mg/g GT, and 47.2 mg/g lecithin) could release in vitro at 24 h to (56.28 ± 2.16)%, and the amount of drug in the skin after applying GT-NS-gel for 24 h was (472.89 ± 8.74) μg/cm2. There was a little deviation between the theoretically predicted value and the measured value. It showed that this model had a good prediction. The amounts of GT penetrating through the skin and in the skin after applying GT-NS-gel for 24 h were (50.73 ± 4.97) and (475.89 ± 10.74) μg/cm2, which were significantly higher than GT-gel (P < 0.05). Conclusion The GT-NS-gel has the ability to increase drug concentration in the skin, which can improve the bioavailability of the local skin.
Key words: Ganoderma lucidum triterpenoids     nanosuspension     gel     in vitro dissolution     transdermal permeation     skin deposition     response surface method    

灵芝为多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum (Leyss. ex Fr.) Karst. 或紫芝Ganoderma sinense Zhao,Xu et Zhang的干燥子实体。灵芝在我国已有悠久的药用历史，具有补中益气、扶正固本、滋补强壮、延年益寿等功效[1]。灵芝含有多种化学成分，其中灵芝三萜（GT）是灵芝的主要有效成分之一，主要包括灵芝酸、赤芝酸、灵芝醇、灵芝内酯等[2, 3, 4]。现代药理研究表明GT具有保肝、抗肿瘤、镇痛、抗氧化、抑制组胺释放等作用[5]。本课题组在前期研究中发现GT类化合物具有抗冻伤作用[6]。该类化合物有较高的脂溶性，理论上较易通过亲脂性的生物膜，但其溶解度小和溶出速率慢导致透皮吸收差，从而影响其药效的发挥。

纳米混悬凝胶（NS-gel）是基于纳米混悬体系的分子凝胶[7]，即向纳米混悬溶液中加入凝胶剂形成透明稳定的三维网状结构。纳米混悬凝胶不但具有凝胶剂的生物相容性好、黏附性好、局部给药后易吸收，对皮肤和黏膜无刺激性等优点[8]，而且具有纳米混悬剂的优势，如可提高难溶性药物的可润湿性、饱和溶解度及溶解速度[9]。

本实验为提高GT在皮肤局部的生物利用度，将其制成灵芝三萜纳米混悬凝胶剂（GT-NS-gel）。在本研究中，以卡波姆940为主要载体，卵磷脂为促渗透剂，制备GT-NS-gel，采用Box-Behnken设计-效应面法优化GT-NS-gel处方，并将优化的处方与灵芝三萜凝胶剂（GT-gel）在透皮吸收与皮肤滞留方面进行比较。 1 仪器与材料

UV—8453型紫外分光光度仪，美国安捷伦；透皮扩散池，北京金科利达电子科技有限公司；GYB40—10S高压均质机，上海华东高压均质机厂；JHBE—20A高速探头超声仪，河南金鼐科技发展有限公司；Winner801纳米激光粒度仪，济南微纳颗粒仪器股份有限公司；Design-Expert 8.0.5试验设计软件，卡贝信息技术有限公司。

灵芝子实体，由北京协和药厂提供（产地：浙江临安药材生产基地；批号20130301），经中国人民解放军第三〇二医院袁海龙研究员鉴定为赤芝Ganoderma lucidum (Leyss. Ex Fr.) Karst. 的干燥子实体；GT（自制，以灵芝酸A为对照品，经紫外分光光度计测定质量分数为78%）；灵芝酸A对照品（质量分数大于98%，天津一方科技公司，批号101110）；聚山梨酯80（Sigma公司，批号20131211）、Poloxamer F68（北京凤礼精求商贸有限责任公司，批号20120212）；卡波姆940（广州博峰化学有限公司，批号20130902）；三乙醇胺（天津市永大化学试剂有限公司，批号20130401）；大豆卵磷脂（上海太伟药业有限公司，批号20140201）；高氯酸（北京世纪拓鑫精细化工有限公司，批号20130401）；丙二醇、香草醛、冰醋酸（北京化工厂，批号分别为20130325、20090508、20130618）；Na2S（西陇化工股份有限公司，批号20111124）。

雄性SD大鼠，体质量（200±20）g，SPF级，由军事医学科学院实验动物中心提供，动物许可证号2012-（军）2012-0004。 2 方法与结果 2.1 GT-NS的制备

称取GT原料药3g、聚山梨酯80 0.6 g、Poloxamer F68 0.3 g，加入100 mL蒸馏水，充分搅拌混匀，13 300 r/min高速探头超声5次，每次1 min，在120 MPa条件下高压乳匀20圈，得质量浓度为30 mg/mL的GT-NS。 2.2 GT-NS的表征 2.2.1 粒径的测定

取适量GT-NS，加蒸馏水稀释。采用激光粒度仪测量GT-NS的粒径，重复3次。结果见图 1，结果表明GT-NS平均粒径为（283±7）nm（n＝3），多分散度指数（PDI）为0.124±0.015（n＝3）。

图 1 GT-NS的粒径分布图 Fig. 1 Particle size distribution of GT-NS
2.2.2 扫描电镜（SEM）观察

取GT原料药和GT-NS加适量蒸馏水稀释后，然后滴加至锡箔纸上，常温条件下放置，待溶剂挥干后，于扫描电镜（SEM）下观察其形态并拍摄照片。结果见图 2。由图 2可见，GT原料药在扫描电镜下呈不规则块状，粒子大小在5～50 μm；GT-NS粒子大小较均匀。

图 2 GT原料药 (A) 和GT-NS (B) 扫描电镜图 Fig. 2 SEM images of raw GT (A) and GT-NS (B)
2.3 GT-NS-gel的制备

取20 mL GT-NS混悬液2份，分别加蒸馏水稀释至30 mL和60 mL，得质量浓度分别为20、10 mg/mL的GT-NS混悬液。各取纳米混悬液20 mL，加入溶胀24 h的卡波姆940（5～10 mg/g）、卵磷脂（0～80 mg/g）、丙二醇50 mg/g混匀后，边搅拌边加入20%三乙醇胺适量，调pH值至5.5～6.5，加适量蒸馏水至20 g，即得不同载药量的GT-NS-gel。 2.4 GT-gel的制备

GT-gel的处方与GT-NS-gel优化后处方相同，具体制备方法如下：取处方量的GT分散在蒸馏水中，加入溶胀24h的卡波姆940、卵磷脂及丙二醇混匀后，边搅拌边加入20%三乙醇胺适量，调pH值至5.5～6.5，加水使其载药量与优化后的GT-NS- gel相同，即得GT-gel。 2.5 UV法测定灵芝三萜[10]

精密称取灵芝酸A对照品10.4 mg置于50 mL量瓶中，加无水乙醇适量使溶解，定容，摇匀，即得0.208 mg/mL灵芝酸A对照品溶液。精密吸取灵芝酸A对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mL，分别置10 mL具塞试管中（同时吸取无水乙醇0.8 mL作为空白对照），置沸水浴中挥干溶剂，再依次分别加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.5 mL、高氯酸0.8 mL，密塞，置60 ℃水浴中加热15 min，取出，置冰水浴中冷却5 min，然后分别加冰醋酸5 mL，摇匀，以无水乙醇作为空白对照，在543 nm处测定吸光度（A）值，以灵芝酸A质量（μg）为横坐标（X），A值为纵坐标（Y），得到回归方程为Y＝0.007 1 X－0.070 1，r＝0.999 2，结果表明灵芝酸A在20.8～166.4 μg呈现良好的线性关系。 2.6 体外释放实验

采用Franz扩散池研究GT-NS-gel的体外释放情况。取单层透析袋（截留相对分子质量7 000）放置在供给池和接收池之间，用夹子将两者夹紧固定，接收池中加入新配的含20%乙醇的磷酸盐缓冲液（pH 6.8），使透析袋内表面完全浸润在其中，保证无气泡，扩散面积为1.77 cm2，接收池总体积为22.5 mL。设定温度（32.0±0.5）℃，转速500 r/min。供给池上方加入0.5 g GT-NS-gel后，开始计时。在给药24 h后取样1 mL，8 000 r/min离心10 min，取上清液，以空白接收液为对照，按照“2.5”项下方法测定并计算释放率。 2.7 体外皮肤滞留实验

取SD大鼠，乙醚麻醉后用10%的Na2S溶液脱去腹部毛，断颈处死后立即剪下腹部皮肤，除去皮下组织、血管及脂肪，用生理盐水反复冲洗。将皮肤固定在扩散池上，角质层朝上，用含20%乙醇的磷酸盐缓冲溶液（pH 7.4）作为接收液[11]，转速为100 r/min，扩散面积为1.77 cm2，接收池总体积为22.5 mL，32 ℃水浴循环。取0.5 g GT-NS-gel紧密贴敷在鼠皮上。24 h后将皮肤从扩散池上取下，用棉签擦去残留制剂，用蒸馏水冲洗，滤纸吸干水分，剪下有效吸收皮肤面积，置于5 mL离心管中，用一定量的乙醇浸泡探头超声破碎，8 000 r/min离心10 min，取上清液，以空白接收液为对照，按照“2.5”项下方法测定并计算皮肤滞留量。 2.8 效应面法优化GT-NS-gel处方 2.8.1 实验设计与结果

在预试验及文献研究结果的基础上[12, 13]，以卡波姆940的质量浓度（A）、载药量（B）和卵磷脂的质量浓度（C）为考察因素，以24 h GT-NS-gel体外累积释放率（Y1，最大值为优）和24 h皮肤滞留量（Y2，最大值为优）为指标，采用3因素3水平的Box-Behnken设计优化GT-NS- gel处方。实验安排及结果见表 1。

表 1 Box-Behnken试验安排及结果 Table 1 Experimental arrangement and results of Box-Behnken design-response surface methodology
2.8.2 指标回归方程的拟合

基于Box-Behnken实验设计的内容和结果见表 2。采用Design-Expert 8.0.5软件对表 2数据进行拟合分析，以Y1和Y2为指标进行二项式方程拟合，得到的二次多元回归方程分别为Y1＝48.8－5.49 A＋4.11 B－8.42 C＋1.81 AB＋0.22 AC－0.96 BC＋3.44 A2－0.83 B2－2.99 C2（R2＝0.983 5，校正R2＝0.962 4，P＜0.000 1）；Y2＝405.67－32.31 A＋54.19 B＋176.22 C＋8.37 AB－3.61 AC＋24.24 BC－57.55 A2＋7.86 B2－70.96 C2（R2＝0.983 5，校正R2＝0.962 4，P＜0.000 1）。

表 2 二次项回归方程系数显著性检验 Table 2 Significance of coefficients in second order regression equation
2.8.3 方差分析和显著性检验

2个拟合方程的相关系数说明该模型拟合程度良好，可对GT-NS-gel处方进行分析与预测。由表 2回归系数的显著性检验得到，模型Y1中卡波姆940的一次项、二次项，卵磷脂质量浓度的一次项、二次项，药物浓度一次项都达到显著水平（P＜0.05），其他项不显著。模型Y2中卡波姆940的一次项、二次项，药物浓度一次项，卵磷脂质量浓度一次项、二次项都达到显著水平（P＜0.05），其他项不显著。删除对指标无显著性影响的项，得到二项式方程如下：Y1＝48.8－5.49 A＋4.11 B－8.42 C＋3.44 A2－2.99 C2（R2＝0.983 5，校正R2＝0.962 4，P＜0.000 1）；Y2＝405.67－32.31 A＋54.19 B＋176.22 C－57.55 A2－70.96 C2（R2＝0.983 5，校正R2＝0.962 4，P＜0.000 1）。 2.8.4 效应面分析

选择对各指标有显著影响的2个因素，另一因素设为中心点值，采用Design-Expert 8.0.5软件绘制相应的曲面图，见图 3。

图 3 各因素对响应值影响的三维效应曲面图 Fig. 3 3D Response surface plot for effects of different factors

图 3-A～C表明，卡波姆940的质量浓度、载药量和卵磷脂的质量浓度都是影响24 h GT-NS-gel体外累积释放率的主要因素（A，P＜0.000 1；B，P＝0.000 2；C，P＜0.000 1）。体外累积释放率与卡波姆940的质量浓度和卵磷脂的质量浓度成负相关，与载药量成正相关。图 3-D表明，卡波姆940对24 h皮肤滞留量的影响随其用量而变化（A，P＝0.021 2）。卡波姆940在用量小的范围内（5～7.5 mg/g），药物的滞留量变化不大，在用量大的范围（7.5～10 mg/g），用量增加，皮肤滞留量略有下降，在0.75 mg/g时滞留量最大。图 3-E表明，皮肤滞留量随着载药量的增大而增加（B，P＝0.000 2）。图 3-F表明，磷脂的用量对24 h皮肤滞留量具有极显著影响（C，P＜0.000 1），其用量越大，滞留量越大。 2.8.5 优选处方的预测与验证

采用Design-Expert 8.0.5实验设计软件，按Y1最大值，Y2最大值设定目标，得到的优选处方条件为A＝5 mg/g，B＝30 mg/g，C＝47.2 mg/g。依据该处方制备了3批GT- NS-gel，测定各响应指标。模型对各指标的预测值Y1、Y2分别为57.37%和468.39 μg/cm2。实际测量值分别（56.28±2.16）%和（472.89±8.74）μg/cm2（n＝3）。结果显示实际测量值与模型预测值接近，表明该模型的预测性良好。 2.9 优化GT-NS-gel与GT-gel的比较

先按照“2.7”项下“将皮肤固定在扩散池上……，32 ℃水浴循环”操作，然后分别取0.5 g GT-NS-gel和GT-gel紧密贴敷在大鼠皮肤上后，在1、2、3、5、7、9、12、24 h分别从接收池内取样5 mL，同时补充等量的接收液。所取样品8 000 r/min离心10 min，取上清液，以空白接收液作为对照，按照“2.5”项下方法测定并计算累积透过量（Qn）。Qn的计算按照以下公式进行。

Qn＝(VrCn＋VsCi) / A

Qn为第n次取样时的累积透过量（μg/cm2），Vr代表接收液的体积（22.5 mL），Cn为每个取样点质量浓度（μg/mL），Vs为取样体积（5 mL），Ci为第i次取样测得的接收液中药物质量浓度（μg/mL），A为扩散渗透面积（cm2）

以Qn值为纵坐标，时间t为横坐标进行线性回归，所得方程分别为YGT-NS-gel＝2.228 2 t＋1.032 1（R2＝0.968 3）及YGT-gel＝0.685 3 t－0.524 8（R2＝0.916 7），其斜率即为透皮速率常数Jss［μg/(cm2∙h)］。由方程可知JssGT-NS-gel＝2.228 2 μg/(cm2∙h)，Jss GT-gel＝0.685 3 μg/(cm2∙h)，GT-NS-gel的渗透速率是GT-gel的3倍多。

皮肤的滞留量按照“2.7”项下方法计算。结果见图 4。结果表明，24 h后GT-NS-gel和GT-gel的Qn分别为(50.73±4.97)μg/cm2和(14.79±3.45)μg/cm2，皮肤滞留量分别是(475.89±10.74)μg/cm2和(101.32±7.02)μg/cm2。可见，优化后的GT-NS-gel体外Qn和皮肤滞留量分别是GT-gel的3.43倍和4.70倍。

与GT-gel比较：*P＜0.05
*P< 0.05 vs GT-gel 图 4 GT-NS-gel和GT-gel的体外透皮吸收 (A)和皮肤滞留量(B)(x±s n=3) Fig. 4 Amountof GT-NS-gel and GT-gel penetrating through skin (A) and in skin (B)(x±s n=3)
3 讨论

卡波姆是一种常用的水溶性聚合物凝胶基质，当其与皮肤接触时，能够迅速润湿皮肤，增加皮肤的水合作用，有利于药物的吸收，其用量直接影响凝胶的黏度和释药性能[14]。在预实验中，0.5%～1%的卡波姆940形成的凝胶剂外观及黏度均合适。GT的加入量对其在凝胶中的分散均与程度和体外释放有影响。卵磷脂能改变角质层结构，促进药物在皮肤中滞留[12]，因此本研究以卵磷脂为促透剂。丙二醇是常用的保湿剂[13]，其常用量为5%～10%[15]，所以本实验选择卡波姆940、载药量及卵磷脂用量为考察因素。药物从制剂中溶出是药物起效的第一步，GT治疗冻伤在局部起效，增加药物在皮肤的滞留量，有利于提高其局部生物利用度，因此，本实验选择24 h体外累积释放率和皮肤滞留量为考察指标。通过效应面法优化得到的处方具有良好体外释放和透皮滞留效果。

卡波姆940的用量增加，凝胶的黏度增加，阻碍药物的释放；药物包埋于凝胶内，凝胶内的磷脂不溶于水，也会阻碍药物释放；而凝胶内载药量增加使药物浓度梯度增大，可促进药物的释放。因此，GT体外累积释放率与卡波姆940的质量浓度和卵磷脂的质量浓度成负相关，与载药量成正相关。24 h皮肤滞留量随着卡波姆940用量的增加先变化不大之后略有下降，说明一定黏度的卡波姆940会阻碍药物的释放，进而进入皮肤的药量下降；皮肤滞留量随着载药量的增大而增加，药物用量增加使体外释放量增加，皮肤滞留量也随之增加；皮肤滞留量随着磷脂的用量增加而增加，一方面是因为磷脂能够破坏角质层的结构，使得皮肤的通透性增加，另一方面磷脂是皮肤细胞的重要组成部分，能够促进亲脂性的药物滞留在皮肤层。

在本研究中，GT-NS-gel 24 h药物累积透过量和皮肤滞留量分别为（50.73±4.97）μg/cm2和（475.89±10.74）μg/cm2，滞留量是透过量的9.38倍。将GT-NS-gel与GT-gel相比，24 h体外累积透过量增加了2.43倍，皮肤滞留量增加了3.70倍。说明将药物粒径降至纳米级别，不但提高了药物的饱和溶解度和溶出速率，而且增强与皮肤各层的黏附性，增加了滞留量[7]。将纳米混悬液进一步分散在凝胶基质中，可以减少纳米粒的聚集而增加稳定性。同时体系黏度的增加能够增加药物在皮肤表面的保留时间，有利于药物的经皮渗透和皮肤深层的滞留作用，将纳米混悬与凝胶剂结合，能够有效地增加药物在皮肤中的滞留量，提高药物在皮肤局部的生物利用度，以便其发挥抗冻伤作用。

参考文献
[1] 陈若芸, 于德泉. 灵芝三萜化学成分研究进展 [J]. 药学学报, 1990, 25(12): 940-953.
[2] 牛君仿, 方正, 王红庚, 等. 灵芝有效化学成分研究进展 [J]. 河北农业大学学报, 2002, 25(增刊): 51-54.
[3] 王赛贞, 林冬梅, 林占熺, 等. RP-HPLC和UV-VIS法测定灵芝不同收获期的多糖肽和灵芝酸 [J]. 药物评价研究, 2012, 35(3): 190-193.
[4] 董虹玲, 赵娜夏, 商倩, 等. 赤芝子实体中三萜酸类成分及其抗人乳腺癌SKBR3细胞增殖活性 [J]. 现代药物与临床, 2013, 28(2): 132-137.
[5] 罗俊, 林志彬. 灵芝三萜类化合物药理作用研究进展 [J]. 药学学报, 2002, 37(7): 574-578.
[6] 韩晋, 周旭, 袁海龙, 等. 复方灵芝乳膏对兔耳轻度冻伤治疗作用的初步研究 [J]. 中国药学杂志, 2012, 47(9): 689-692.
[7] Venkataraman M, Nagarsenker M. Silver sulfadiazine nanosystems for burn therapy [J]. AAPS Pharm Sci Tech, 2013, 14(1): 254-264.
[8] 张宁, 徐艳敏, 仁燕冬, 等. 外用凝胶剂研究进展 [J]. 黑龙江医药, 2010, 23(1): 92-93.
[9] 岳鹏飞, 万晶, 胡鹏翼, 等. 中药固体化纳米混悬给药系统的研究进展与思考 [J]. 中草药, 2012, 43(4): 626-629.
[10] 贺俊杰, 陈彦, 杜萌, 等. 灵芝多组分微乳一步制备方法的探索 [J]. 药学学报, 2013, 48(3): 441-446.
[11] Li B, Ge Z Q. Nanostructured lipid carriers improve skin permeation and chemical stability of idebenone [J]. AAPS Pharm Sci Tech, 2012, 13(1): 276-283.
[12] Bentley M V L B, Kedor E R M, Vianna R F, et al. The influence of lecithin and urea on the in vitro permeation of hydrocortisone acetate through skin from hairless mouse [J]. Int J Pharm, 1997, 146: 225-262.
[13] 郭红叶, 伊博文, 闫小平, 等. 新型辅料卡波姆在凝胶剂中应用现状 [J]. 中国实验方剂学杂志, 2013, 19(17): 371-374.
[14] 施海英, 陈钧, 费超群, 等. 水飞蓟宾缓释凝胶剂的制备及体外释药特性研究 [J]. 中成药, 2013, 35(3): 491-494.
[15] 郭红叶, 闫小平, 伊博文, 等. 均匀设计法优选祛斑凝胶剂基质处方 [J]. 中国中药杂志, 2013, 38(23): 4076-4078.