高血压是常见的心血管疾病，是21世纪公认的三大疾病之一，也是心脑血管病最主要的危险因素，其有脑卒中、心肌梗死、心力衰竭及慢性肾脏病等主要并发症。高血压通常伴随着血管内皮功能的障碍，临床研究发现原发性高血压病患者血浆非对称二甲基精氨酸（ADMA）浓度升高^[1,2]，ADMA是一氧化氮合酶（NOS）的抑制剂，降低NO合成，加速血管内皮功能障碍。钩藤有清热平肝、熄风定惊的功效，钩藤含有多种生物碱类成分^[3]，其中钩藤碱（rhynchophylline）是钩藤中量最大的生物碱，也是主要的降压成分^[4]。本实验进一步研究钩藤碱的血管内皮功能保护作用，探讨钩藤碱对自发性高血压大鼠（SHR）ADMA、血管紧张素II（Ang II）、血管紧张素II 1型受体（AT1R）、NO和NOS水平的影响，为钩藤碱的开发及临床应用提供基础。

钩藤碱，经HPLC测定质量分数≥98%，安徽中医药大学中西医结合临床学院药理教研室提供；卡托普利片（批号12072811），常州制药厂有限公司；ADMA、NO、NOS、Ang II和AT1R ELISA试剂盒（批号分别为CK-E90891C、CK-E94328C、CK-E94890C、CK-E68436C、CK-E90439C），上海源叶生物技术有限公司；生理盐水，安徽丰原药业股份有限公司；水合氯醛（批号20100304），国药集团化学试剂有限公司。

雄性SHR，12周龄，体质量（270±20）g，SPF级，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号SCXK（京）2007-001。雄性SD大鼠，12周龄，体质量（270±20）g，SPF级，购于安徽省实验动物中心，许可证号SCXK（皖）2011-002。

BP—6无创动物血压测量系统，成都泰盟科技有限公司；FA1004电子分析天平，上海精密科学仪器有限公司；RT—6000酶标仪，雷杜科学仪器有限公司；TDZ5—WS多管架自动平衡离心机，上海手术器械厂；MK3全自动酶标分析仪，上海弘联公司；电热恒温干燥箱，上海三星电热仪器厂；GL—88B漩涡混合器，其林贝尔仪器制造公司；Medlab U/4C501生物信号采集处理系统，南京美易科技有限公司；DNP—9052B—III电热恒温箱，上海三发学科仪器有限公司。

取12周龄雄性SHR，适应性饲养7 d后，采用无创血压测试仪，用尾套法测量收缩压（SBP），筛选出SBP≥18.7 kPa大鼠40只，随机分为5组（每组8只）：模型组，卡托普利阳性对照组（6.25 mg/kg），钩藤碱低、中、高剂量（1.25、2.50、5.00 mg/kg）组；另取8只SBP≤16 kPa的SD雄性大鼠作为对照组。除对照组和模型组大鼠ig等容量蒸馏水（1 mL/100 g）外，其他各组大鼠分别按照上述剂量每天ig给药，每天1次，连续给药21 d。

观察大鼠的精神、排便、毛色、活动度等情况。

采用尾套法，用Bp—6型动物无创血压测试仪分别测定给药前尾动脉SBP和给药第7、14、21天药后30 min尾动脉SBP，每只大鼠连续测量血压3次，取平均值。

II、ADMA、AT1R和血清NO、NOS水平的测定 末次血压测定完成，各组大鼠禁食不禁水12 h，用3.5%水合氯醛ip麻醉后，腹主动脉取血8 mL，分装于肝素抗凝管和真空采血管，3 000 r/min离心10 min分离血浆和血清，采用ELISA法检测血浆Ang II、AMDA、AT1R和血清NO、NOS水平。测定方法严格按照说明书进行操作。

实验数据均以±s表示，采用SPSS 17.0软件进行统计学分析，采用One-way-AVOVA进行分析，方差齐采用LSD检验，方差不齐采用Dunnett t检验，用GraphPad Prism 6软件作图。

对照组大鼠被毛紧凑，毛色有光泽，对周围变化反应灵敏且比较温顺。模型组大鼠出现毛发无光泽，被毛蓬松成簇，消瘦，捉持颈部时抵抗剧烈，时常尖叫、暴跳。各给药组大鼠精神状态有所好转，毛发鲜有光泽，情绪相对稳定，行为较温顺平和，给药时抵抗不剧烈，接近于对照组大鼠的表现，提示给药组大鼠状态有所改善。

对照组给药前SBP明显低于模型组，差异有统计学意义（P＜0.01）；随着给药时间的延长，模型组大鼠保持较高的SBP水平；与模型组比较，各给药组给药后大鼠SBP明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05、0.01）。各给药组间差异无统计学意义（P＞0.05）。结果见表 1。

表 1(Table 1)

表 1 各组给药前后SHR尾动脉SBP的比较 (±s，n=8) Table 1 Comparison on tail artery SBP value before and after administration in each group (±s，n=8) 组别 剂量 / (mg∙kg-1) 给药前SBP / kPa 给药后SBP / kPa 7 d 14 d 21 d 对照 — 14.13±1.31** 13.79±0.85** 12.91±1.00** 12.73±1.06** 模型 — 19.92±0.73 21.02±1.74 20.25±0.97 21.12±0.84 卡托普利 6.25 19.30±0.68 17.91±1.56** 18.17±1.29** 18.59±0.89** 钩藤碱 1.25 20.28±0.57 17.85±1.14** 18.95±0.66 18.28±0.96** 2.50 20.17±1.03 17.72±1.37** 18.47±0.95** 18.97±0.82** 5.00 20.89±1.16 19.57±1.82 18.96±0.91 18.55±1.30** 与模型组比较：*P＜0.05 **P＜0.01 *P < 0.05 **P < 0.01vs model group

表 1 各组给药前后SHR尾动脉SBP的比较 (±s，n=8) Table 1 Comparison on tail artery SBP value before and after administration in each group (±s，n=8)

与模型组比较，对照组大鼠血浆中ADMA、Ang II水平明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；与模型组比较，低剂量钩藤碱能显著降低血浆中ADMA、Ang II、AT1R水平（P＜0.01），中、高剂量钩藤碱能显著降低血浆中Ang II水平（P＜0.01）；与卡托普利组相比，钩藤碱各剂量组降低血浆中Ang II、AT1R水平的作用无显著差异（P＞0.05）；而高、中剂量钩藤碱对血浆中ADMA并未显现明显的降低作用，与卡托普利组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结果见图 1。

图 1

Fig. 1

与模型组比较：*P＜0.05 **P＜0.01；与卡托普利组比较：#P＜0.05 *P < 0.05 **P < 0.01vs model group; #P < 0.05 vs Captopril group图 1 钩藤碱对SHR血浆ADMA、Ang II和AT1R水平的影响 (±s，n=8) Fig. 1 Effect of rhynchophylline on levels of ADMA,Ang II,and AT1R in plasma of SHR (±s，n=8)

与模型组比较，对照组大鼠血清NO和NOS水平明显升高，差异有统计学意义（P＜0.01）；各给药组血清NO和NOS水平明显升高，差异有统计学意义（P＜0.01）。与卡托普利组比较，钩藤碱各剂量组血清NO水平显著升高，差异有统计学意义（P＜0.01），钩藤碱各剂量组血清NOS水平升高不明显，差异有统计学意义（P＜0.01）。结果见图 2。

图 2

Fig. 2

与模型组比较：*P＜0.05 **P＜0.01；与卡托普利组比较：##P＜0.01 *P < 0.05 **P < 0.01vs model group; ##P < 0.01 vs Captopril group图 2 钩藤碱对SHR血清NO和NOS水平的影响 (±s，n=8) Fig. 2 Effect of rhynchophylline on levels of NO and NOS in serum of SHR (±s，n=8)

SHR与人类高血压疾病发生的病理生理机制相似，是目前应用较为广泛的高血压模型。随着高血压对人类生命健康的危害性不断加剧，目前有关中药在降压方面的研究也不断的增多，如无患子皂苷^[5]、罗布麻叶总黄酮^[6]等均具有显著的降压作用。钩藤的现代药理学研究表明，其对心脑血管系统具有较明显的作用，包括降压、逆转心肌重构、抗心律失常等。

血管内皮细胞（vascular endothelialcen，VEC）可释放多种舒张、收缩血管因子，共同调节血管张力、维持血压的稳定，NO就是其中一个重要的舒张血管因子，高血压状态下，血管痉挛收缩引起VEC缺血缺氧，导致血管内皮结构和功能损伤，进一步影响NO的合成和分泌。

研究证明ADMA是NOS的强烈抑制剂^[7]，被认为是VEC损害的一种重要的危险因子，在高血压的发病机制中起着重要作用。有研究显示虎杖苷在ADMA存在时，能非竞争性拮抗正常家兔主动脉血管条对苯肾上腺素的收缩反应^[8]。ADMA是一种主要的内源性NOS抑制物，它能竞争性抑制NOS活性，Veresh等^[9]研究表明ADMA可能是通过激活血管肾素-血管紧张素系统（RAS）还原型辅酶II（NADPH）氧化通路，诱导氧化应激，加快NO灭活，降低了NO的生物利用度，从而导致了NO介导的血管扩张作用降低，进而引发血管内皮功能障碍^[10]。ADMA是一个调节内源性NO生成的系统，血浆中ADMA通过抑制NO的合成降低血管的顺应性、增加血管阻力，加快血压疾病的进程并增加发生心血管事件的风险，因此该系统的稳定对维持血管内皮功能起关键作用。

高血压属中医“眩晕”、“头痛”、“肝风”等范畴。钩藤归心、肝经，具有清热平肝、熄风止痉的功效，有明显的降压、镇静、加速血流、降低血管阻力等作用。本研究发现，钩藤碱可以有效降低SHR的血压，降低血浆ADMA、Ang II、AT1R水平，升高血清NO和NOS水平，具有保护血管内皮功能的作用。其作用机制可能是促进ADMA在体内的水解代谢，一方面阻断其激活RAS，从而减少Ang II生成，抑制AT1R活性，降低了其对血管壁的损伤作用；另一方面降低其竞争性抑制NOS与L-精氨酸的结合位点，从而促进VEC释放舒血管物质NO，因此达到扩张血管、降低血压的作用。本研究后续部分将进行分子生物学、细胞信号转导、蛋白质组学的深入研究，为钩藤碱的临床应用提供更有效的实验支持和科学依据。