本实验在中药药效组分理论的指导下^[1]，研究炙甘草补脾益气药效组分的变化规律。在炙甘草用量和剂型稳定的前提下，分析了炙甘草及其配伍组分中其药效组分甘草苷-甘草素-甘草酸-异甘草苷的存在状态，揭示了药效组分与配伍、剂型的对应性关系。

四君子汤作为治疗脾胃气虚证的常见方剂始载于《太平惠民和剂局方》，在中医内科脾胃气虚证的治疗中得到了广泛的运用^[2]。四君子汤在临床治疗中，主要起到益气健脾的作用，常用于治疗脾胃气虚证。炙甘草甘温，益气和中，调和诸药。人参甘温益气，即可大补脾胃之气，又可补益肺气。两药合用，主治脾胃气虚证。炙甘草甘温，益气和中，调和诸药。白术，苦温健脾燥湿。人参益气健脾为主，辅助白术，既可健脾，又能渗湿止泻。临床常用于脾虚夹湿证。饮食不化、胸脘痞闷、肠鸣泄泻、四肢乏力、形体消瘦、面色萎黄、舌淡苔白腻、脉虚缓。四君子汤以人参为君药，人参具有大补元气和补脾益肺的功效，且具有广泛的药理作用，尤其对中枢神经系统的兴奋和抑制过程能起到双向调节作用^[3]。甘草酸和异甘草苷是生物活性较强的物质，现代药理学认为甘草酸具有肾上腺皮质激素样作用，可增强内耳听觉、抗炎、抗变态反应等作用；甘草苷和异甘草苷具有抗溃疡、抗菌、抗炎^[4]、解痉、镇痛等作用^[5]。甘草素有抗氧、抗过敏、抗霉菌、防止皮肤老化、有效清除超氧离子等作用^[6]。因此选择了《中国药典》2010年版中规定量高且具有明显药理活性的甘草苷、甘草酸，以及甘草素和异甘草苷作为定量成分。

Agilent 1100高效液相色谱仪，HP真空脱气泵，HP四元泵，HP自动进样，HP柱温箱，HP DAD检测器；WRX—1S型BP110S电子分析天平；Sartorius BT25S型电子分析天平；Agela Venusil HPLC Columns（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱。

甘草苷（质量分数99%，批号111208）、甘草素（质量分数99%，批号120302）、甘草酸（质量分数99%，批号111201），异甘草苷（质量分数99%，批号120112），四川维克奇生物科技有限公司。

供试品见表 1，均经北京中医药大学中药学院张贵君教授鉴定，炙甘草Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Praeparata cum Melle（GRRPM）为内蒙古野生炙甘草饮片、人参Ginseng Radix et Rhizoma（GRR）为吉林的人参片饮片、白术Atractylodis Macrocephalae Rhizoma（AMR）为浙江炒白术饮片、茯苓Poria为云南茯苓的饮片。

表 1(Table 1)

表 1 炙甘草及其药对、复方供试品来源 Table 1 Sources of test samples of GRRPM,their medicine pairs,and medicine compounds 名称 剂量 / g 比例 基原 厂家 炙甘草 6.03 － 内蒙古野生 河北长城饮片厂 炙甘草-人参 6.01-10.02 3∶5 《太平惠民和剂局方》 河北长城饮片厂 安国祁新饮片公司 炙甘草-炒白术 6.00-6.02 1∶1 《太平惠民和剂局方》 河北长城饮片厂 安国祁新饮片公司 四君子汤（炙甘草-人参- 炒白术-茯苓） 6.02-10.03-6.01-6.02 3∶5∶1∶1 《太平惠民和剂局方》 河北长城饮片厂 安国祁新饮片公司

表 1 炙甘草及其药对、复方供试品来源 Table 1 Sources of test samples of GRRPM,their medicine pairs,and medicine compounds

2 方法与结果 2.1 对照品溶液的制备

精密称取适量对照品甘草苷、异甘草苷、甘草素、甘草酸^[6]，分别置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，分别得到质量浓度为86、10、20、250 μg/mL的对照品溶液。

按照单味药、各配伍比例^[7]及四君子汤复方称取炙甘草及其他饮片，加10倍量水后煎煮2次，第1次30 min，第2次20 min，合并煎液，趁热滤过，滤液浓缩至每1毫升相当于饮片0.1 g的浓缩液，取浓缩液1 mL至10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，静置，分出上清液，使用带有0.45 μm滤膜的注射器滤过并注入液相瓶，制成相对质量浓度为10 mg/mL的溶液，即为供试品溶液。

色谱柱为Agela Venusil HPLC Clumns柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液，梯度洗脱：0～8 min，19%乙腈；8～11 min，23%乙腈；11～21 min，24%乙腈；21～44 min，50%乙腈；44～45 min，100%乙腈；45～50 min，19%乙腈。体积流量1.0 mL/min；进样量为10 μL；柱温为室温（30 ℃）；检测波长为237 nm（甘草苷、甘草素和甘草酸）、360 nm（异甘草苷）。

为了使炙甘草的4种药效组分的标准曲线更准确，根据其质量浓度分别采用合适的进样量。甘草苷对照品溶液分别进样3、6、9、12、18 μL，异甘草苷对照品溶液分别进样1、4、8、12、16、20 μL，甘草素对照品溶液分别进样1、3、6、9、12、18 μL，甘草酸对照品溶液分别进样0.5、4、8、12、16、20 μL。以对照品质量浓度为横坐标（x），峰面积为纵坐标（y）进行线性回归。甘草苷回归方程y＝148.19 x，r²＝0.999 3，在25.8～154.8 ng线性关系良好；异甘草苷回归方程y＝28.25 x－1.177，r²＝0.999 6，在10.0～200.0 ng线性关系良好；甘草素回归方程y＝45.61 x－0.022，r²＝0.999 6，在20.0～360.0 ng线性关系良好；甘草酸回归方程y＝75.32 x－0.398，r²＝0.999 8，在125.0～5 000.0 ng在线性关系良好。

分别精密吸取甘草苷、甘草素、甘草酸、异甘草苷对照品溶液，连续进样6次，按各成分的色谱条件测定峰面积，其RSD分别为1.04%、1.51%、1.69%、1.19%，表明仪器精密度良好。

称取炙甘草供试品6.00 g，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，室温放置，分别在0、2、4、6、8、10、12 h按上述方法测定，甘草苷、异甘草苷、甘草素、甘草酸峰面积的RSD依次分别为1.93%、1.69%、1.46%、2.73%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

按“2.2”项下的样品制备分别按照配比制备炙甘草、炙甘草-人参、炙甘草-白术与四君子汤供试品溶液。

精密吸取同一批供试品溶液，进样10 μL，依照标准曲线测定方法连续测定6次，根据峰面积计算其质量浓度的RSD值，得到4种组分质量浓度的RSD值分别为1.84%、1.77%、1.64%、2.24%，表明本方法重复性良好。

精密称取炙甘草饮片6份，按“2.2”项下方法制备，分别精密加入相应的4种对照品：甘草苷7.012、7.123、7.112、7.234、7.331、7.542 mg；异甘草苷1.401、1.367、1.324、1.474、1.401、1.429 mg；甘草素3.421、3.453、3.383、3.238、3.322、3.348 mg；甘草酸9.452、9.573、9.612、9.083、9.713、9.562 mg。注入液相色谱仪进行定量测定，计算得甘草苷、异甘草苷、甘草素、甘草酸的平均回收率分别为100.55%、99.79%、101.00%、98.89%，RSD分别为1.78%、1.71%、1.90%、1.36%。

分别制备3批供试品溶液，每个供试品连续进样3次，进样量10 μL，按“2.3”项测定峰面积，根据外标法计算各组分的量及各组分的比例，结果见表 2、3。

表 2(Table 2)

表 2 炙甘草及其配伍载体中4种药效组分测定结果(x±s,n=3) Table 2 Determination of four active components alignment in GRRPM and their compatibility carrier (x±s,n=3) 样品 质量浓度 / (mg∙mL-1) 甘草苷 甘草素 甘草酸 异甘草苷 组分总量 炙甘草 12.14±0.31 3.25±0.19 38.75±1.77 1.40±0.25 55.54±0.12 炙甘草-人参 2.87±0.04 0.74±0.02 6.42±0.18 0.37±0.03 10.40±0.03 炙甘草-白术 5.99±0.01 2.16±0.09 22.40±1.80 0.77±0.02 31.32±0.08 四君子汤 2.99±0.03 0.81±0.04 10.05±0.31 0.32±0.03 14.17±0.25

表 2 炙甘草及其配伍载体中4种药效组分测定结果(x±s,n=3) Table 2 Determination of four active components alignment in GRRPM and their compatibility carrier (x±s,n=3)

表 3(Table 3)

表 3 4种药效组分在单味药、药对、复方中的比例 Table 3 Proportion of four active components alignment in GRRPM,their medicine pairs,and medicine compounds 样品 比例 甘草苷 甘草素 甘草酸 异甘草苷 炙甘草 8.67 2.32 27.67 1 炙甘草-人参 7.76 2.00 17.35 1 炙甘草-白术 7.78 2.81 29.09 1 四君子汤 9.34 2.53 31.41 1

表 3 4种药效组分在单味药、药对、复方中的比例 Table 3 Proportion of four active components alignment in GRRPM,their medicine pairs,and medicine compounds

3 讨论

根据中药药效组分理论，确定炙甘草为供试品，依据剂型确定药效组分的组成即：甘草苷-甘草素-甘草酸-异甘草苷。并依据配伍和剂型研究其药效组分的变化情况，结合功效分析药效组分的变化规律。中药多以配方的形式使用，说明药效组分资源利用空间较大。而由于复方才是作为发挥疗效的关键，并非一种或某几种成分，而是多种成分的相互作用，所以，单纯地把某一单体或几个单体的量作为质量检测标准有欠妥当，而应该把疗效与质量标准联系起来，将药效组分作为质量控制的多指标，有利于炙甘草中药的用药安全。

从供试品药效组分测定结果来看，在剂型固定的条件下，配伍不同，药效组分的差异很大，炙甘草药效组分的总量是配伍组分的3倍，说明配伍影响药效组分的存在，配伍不同、药效组分不同，有效性和安全性不同。

配伍不同单味药炙甘草与药对（炙甘草-人参）的补脾和胃药药效组分（甘草苷-甘草素-甘草酸-异甘草苷）比例相差最大，横向比较炙甘草与药对，从质量浓度最大的甘草酸（38.75±1.77）mg/mL的量相差22.4，而质量浓度最小的异甘草苷（1.40±0.25）mg/mL相差1.03；从炙甘草（67∶2.32∶27.67∶1）与炙甘草-人参（7.76∶2∶17.35∶1）；的补脾和胃药效比例区间相比，甘草苷、甘草素和异甘草苷比例量两两相差在1.0附近，甘草酸的比例相差10.0以上。

配伍对药效组分有显著影响，说明组分与药效具有明显的对应性。4个供试品中炙甘草药效组分变化规律基本一致：炙甘草＞炙甘草-白术＞四君子汤＞炙甘草-人参；药效组分（甘草苷-甘草素-甘草酸-异甘草苷）比例的变化区间是（7.76～9.34）∶（2.00～2.81）∶（17.35～31.4）∶1。

炙甘草与炙甘草-炒白术、炙甘草-人参、复方四君子汤是水煎煮液，符合中医药传统的使用中药的习惯。分析结果表明：各样品中炙甘草药效组分变化规律基本一致：炙甘草＞炙甘草-白术＞四君子汤＞炙甘草-人参。

炙甘草与炙甘草-炒白术、炙甘草-人参、四君子汤的补脾和胃药效组分比例区间为（8.67∶2.32∶27.67∶1）、（7.76∶2∶17.35∶1）、（7.78∶2.81∶29.09∶1）、（9.34∶2.53∶31.41∶1），比例的定量区间趋于常数，因此，炙甘草的质量标准应依据配伍的不同分别制定。配伍不同，药效组分不同，功效不同。