2014, Vol. 45
引用本文 | doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.12.004 |
2. 中国科学院大学, 北京 100049
2. University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China
古钩藤Cryptolepis buchananii Roem. et Schult. 为萝藦科（Asclepiadaceae）白叶藤属Cryptolepis R. Br. 植物，又名海上霸王、白叶藤、牛角藤等，生长于海拔500～1 500 m山地疏林中或山谷密林中，攀援树上。在我国主要分布于广东、广西、云南等地，国外分布于印度、缅甸、斯里兰卡和越南等地[1]。该植物以根或叶入药，具有舒筋活络、消肿止痛、解毒等功效，用于治疗腰痛、腹痛、跌打损伤、骨折、痈疮、癣等疾病，为中国传统药用植物[2]。药理实验研究发现古钩藤叶的甲醇、丙酮和氯仿提取物具有抗氧化活性，在自由基清除模型中尤以甲醇提取物的活性最高[3]。值得一提的是，古钩藤作为民族药用植物具有低毒的特点[4]。
古钩藤茎叶中发现的化学成分包括α-amyrin、β-amyrin[5]、buchananine[6]、1,3,6-tri-O-nicotinoyl- α-D-glucopyranose[7]、cryptanoside A～D、germenicol[8]、cryptosin[9]等。为进一步研究其活性成分，为该植物资源的可持续利用奠定一定的物质基础，本实验对古钩藤茎叶甲醇提取物的醋酸乙酯部分进行了系统的化学成分研究，共分离得到13个化合物，分别鉴定为异莨菪亭（isoscopoletin，1）、(+)-3-hydroxy-β-ionone（2）、(3R,6R,7E)-3-hydroxy- 4,7-megastigmadien-9-one（3）、ficusic acid（4）、(+)-松脂素 [(+)-pinoresinol，5]、(+)-8-羟基松脂素[(+)-8-hydroxypinoresinol，6]、(+)-丁香脂素[(+)-syringaresinol，7]、异橙黄胡椒酰胺乙酸脂（diaaurantiamide acetate，8）、loliolide（9）、(-)-蛇菰宁 [(-)-balanophonin，10]、金圣草素（chrysoeriol，11）、9-hydroxy-10E,12Z-octadecadienoic acid methyl ester（12）、ficusesquilignan A（13）。所有化合物均为首次从该属植物中分离得到。
1 仪器与材料API Qstar Pulsar I及Finnigan Trace DSQ质谱仪；Bruker AV—400、DRX—500和Avance III 600超导核磁共振仪；柱色谱硅胶（200～300目和300～400目）、薄层色谱硅胶H和GF254均为青岛海洋化工厂产品；Sephadex LH-20为Pharmacia公司产品；Rp-C8、Rp-C18薄层板和柱色谱材料购自Merck公司；HPLC使用Agilent 1260 infinity，分析柱和制备柱分别使用Agilent Zorbax SB-C18柱（150 mm×9.4 mm和150 mm×21.2 mm），检测器为DAD检测器。
古钩藤茎叶采自云南省昆明市屏边人字桥，由中国科学院昆明植物研究所龚洵研究员鉴定为萝藦科白叶藤属植物古钩藤Cryptolepis buchananii Roem. et Schult.，标本（Gong20090805）存放于中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室。
2 提取与分离古钩藤茎叶共13.0 kg，风干后粉碎，5倍量95%甲醇液冷提3次，每次24 h，合并提取液减压浓缩，浓缩液加水混悬，用醋酸乙酯萃取，减压浓缩得醋酸乙酯层378.1 g。得到的醋酸乙酯层经硅胶柱色谱，以氯仿-丙酮（1∶0→1∶1）正相系统进行梯度洗脱，TLC检测合并相同流分，得到6个组分（Fr. I～VI）。6个组分通过硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、中压柱色谱以及制备高效液相色谱等分离手段的交互使用，最后分离得到13个化合物：1（71.9 mg）、2（9.2 mg）、3（13.8 mg）、4（12.4 mg）、5（2.9 mg）、6（2.0 mg）、7（6.8 mg）、8（151.4 mg）、9（3.1 mg）、10（13.0 mg）、11（5.6 mg）、12（5.6 mg）和13（5.9 mg）。
3 结构鉴定化合物1：黄色针状结晶（丙酮），分子式C10H8O4，ESI-MS m/z: 193 [M＋H]+,407 [2M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz,CD3OD) δ: 6.15 (1H,d,J = 9.4 Hz,H-3),7.82 (1H,d,J = 9.4 Hz,H-4),6.72 (1H,s,H-5),7.07 (1H,s,H-8),3.89 (3H,s,-OCH3)；13C-NMR (125 MHz,CD3OD) δ: 164.3 (C-2),109.6 (C-3),146.2 (C-4),112.0 (C-5),147.4 (C-6),153.1 (C-7),104.0 (C-8),151.5 (C-9),112.6 (C-10),56.8 (OCH3)。以上数据与文献报道一致[10]，故鉴定化合物1为异莨菪亭。
化合物2：白色无定形粉末，分子式C13H20O2，ESI-MS m/z: 231 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz,CD3COCD3) δ: 1.42 (1H,m,H-2a),1.78 (1H,m,H-2b),3.91 (1H,m,H-3),2.04 (1H,m,H-4a),2.52 (1H,m,H-4b),7.24 (1H,d,J = 16.4 Hz,H-7),6.06 (1H,d,J = 16.4 Hz,H-8),2.25 (2H,s,H-10),1.08 (3H,s,H-11),1.11 (3H,s,H-12),1.76 (3H,s,H-13)；13C-NMR (100 MHz,CD3COCD3) δ: 37.3 (C-1),49.4 (C-2),65.0 (C-3),43.6 (C-4),133.2 (C-5),136.3 (C-6),142.4 (C-7),133.2 (C-8),197.8 (C-9),28.7 (C-10),30.2 (C-11),29.4 (C-12),21.7 (C-13)。以上数据与文献报道一致[11]，故鉴定化合物2为 (+)-3- hydroxy-β-ionone。
化合物3：白色无定形粉末，分子式C13H20O2，EI-MS m/z: 208 [M]+。1H-NMR (600 MHz,CD3COCD3) δ: 1.37 (1H,dd,J = 13.2,6.9 Hz,H-2a),1.80 (1H,m,H-2b),4.26 (1H,brs,H-3),5.59 (1H,brs,H-4),2.54 (1H,d,J = 10.3 Hz,H-6),6.61 (1H,dd,J = 15.8,10.3 Hz,H-7),6.08 (1H,d,J = 15.8 Hz,H-8),2.23 (3H,s,H-10),0.99 (3H,s,H-11),0.87 (3H,s,H-12),1.59 (3H,s,H-13)；13C-NMR (150 MHz,CD3COCD3) δ: 34.5 (C-1),44.5 (C-2),65.1 (C-3),128.1 (C-4),134.5 (C-5),55.1 (C-6),148.0 (C-7),134.7 (C-8),197.8 (C-9),27.0 (C-10),29.4 (C-11),24.7 (C-12),22.7 (C-13)。以上数据与文献报道一致[12]，故鉴定化合物3为(3R,6R,7E)-3-hydroxy-4,7-megastigmadien- 9-one。
化合物4：白色无定形粉末，分子式C11H16O3，ESI-MS m/z: 195 [M－H]-,391 [2M－H]-。1H-NMR (400 MHz,CD3COCD3) δ: 1.50 (1H,m,H-3a),2.39 (1H,m,H-3b),4.20 (1H,m,H-4),1.35 (1H,m,H-5a),2.00 (1H,m,H-5b),5.67 (1H,s,H-9),1.72 (3H,s,8-CH3),1.25 (3H,s,11-CH3),1.45 (3H,s,12-CH3)；13C-NMR (125 MHz,CD3COCD3) δ: 87.0 (C-1),171.6 (C-2),46.4 (C-3),66.6 (C-4),47.8 (C-5),36.6 (C-6),27.7 (C-8),113.2 (C-9),183.4 (C-10),26.8 (C-11),31.0 (C-12)。以上数据与文献报道一致[13]，故鉴定化合物4为ficusic acid。
化合物5：无色油状物，分子式C20H22O6，ESI-MS m/z: 739 [2M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz,CD3OD) δ: 6.96 (2H,d,J = 1.8 Hz,H-2,2′),6.76 (2H,d,J = 8.1 Hz,H-5,5′),6.82 (2H,dd,J = 8.1,1.8 Hz,H-6,6′),4.71 (2H,d,J = 4.3 Hz,H-7,7′),3.13 (2H,m,H-8,8′),4.23 (2H,dd,J = 9.0,6.9 Hz,H-9a,9′a),3.84 (2H,m,H-9b,9′b),3.86 (6H,s,2×-OCH3)；13C-NMR (150 MHz,CD3OD) δ: 133.9 (C-1,1′),111.0 (C-2,2′),147.5 (C-3,3′),149.3 (C-4,4′),116.2 (C-5,5′),120.2 (C-6,6′),87.7 (C-7,7′),55.5 (C-8,8′),72.7 (C-9,9′),56.5 (2×-OCH3)。以上数据与文献报道一致[14]，故鉴定化合物5为 (+)-松脂素。
化合物6：白色无定形粉末，分子式C20H22O7，ESI-MS m/z: 373 [M－H]-。1H-NMR (400 MHz,CD3OD) δ: 7.04 (2H,brs,H-2,2′),6.78 (2H,d,J = 1.7 Hz,H-5,5′),6.85 (1H,dd,J = 8.0,1.7 Hz,H-6),4.64 (1H,brs,H-7),4.02 (1H,d,J = 9.3 Hz,H-9a),3.85 (1H,m,H-9b),6.86 (1H,dd,J = 8.0,1.7 Hz,H-6′),4.83 (1H,d,J = 5.2 Hz,H-7′),3.04 (1H,m,H-8′),4.45 (1H,t,J = 8.6 Hz,H-9′a),3.75 (1H,dd,J = 9.2,6.3 Hz,H-9′b),3.86 (6H,s,3,3′-OCH3)；13C-NMR (100 MHz,CD3OD) δ: 129.0 (C-1),112.7 (C-2),149.1 (C-3),147.4 (C-4),116.0 (C-5),121.5 (C-6),89.3 (C-7),92.8 (C-8),76.0 (C-9),133.6 (C-1′),111.3 (C-2′),148.7 (C-3′),147.5 (C-4′),115.7 (C-5′),120.5 (C-6′),87.8 (C-7′),62.4 (C-8′),72.0 (C-9′),56.4 (3-OCH3),56.4 (3′-OCH3)。以上数据与文献报道一致[15]，故鉴定化合物6为 (+)-8-羟基松脂素。
化合物7：白色针状结晶（丙酮），分子式C22H26O8，ESI-MS m/z: 441 [M＋Na]+,859 [2M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz,CD3OD) δ: 6.66 (4H,s,H-2,2′,6,6′),4.72 (2H,d,J = 4.3 Hz,H-7,7′),3.15 (2H,m,H-8,8′),4.26 (2H,dd,J = 9.0,6.9 Hz,H-9a,9′a),3.88 (2H,dd,J = 9.1,3.5 Hz,H-9b,9′b),3.85 (12H,s,3,3′,5,5′-OCH3)；13C-NMR (150 MHz,CD3OD) δ: 133.2 (C-1,1′),104.5 (C-2,2′,6,6′),149.5 (C-3,3′,5,5′),136.2 (C-4,4′),87.8 (C-7,7′),55.7 (C-8,8′),72.9 (C-9,9′),56.9 (3,3′,5,5′-OCH3)。以上数据与文献报道一致[16]，故鉴定化合物7为(+)-丁香脂素。
化合物8：无色针状结晶（丙酮），分子式C27H28O4N2，ESI-MS m/z: 467 [M＋Na]+,911 [2M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz,CDCl3) δ: 1.96 (3H,s,H-1),3.85 (1H,dd,J = 11.0,6.8 Hz,H-3a),3.99 (1H,dd,J = 11.0,4.8 Hz,H-3b),4.16 (1H,m,H-4),4.65 (1H,m,H-7),2.97 (2H,dd,J = 15.0,8.7 Hz,H-10),2.76 (2H,dd,J = 14.1,6.3 Hz,H-11),7.13～7.79 (15H,m,Ar-H)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3) δ: 20.6 (C-1),171.1 (C-2),64.6 (C-3),49.2 (C-4),170.2 (C-6),54.8 (C-7),167.2 (C-9),37.2 (C-10),36.6 (C-11),134.1 (C-1′),127.4 (C-2′,6′),128.1 (C-3′,5′),131.2 (C-4′),138.0 (C-1′′),129.1 (C-2′′,6′′),128.0 (C-3′′,5′′),126.2 (C-4′′),138.3 (C-1′′′),129.1 (C-2′′′,6′′′),128.2 (C-3′′′,5′′′),126.2 (C-4′′′)。以上数据与文献报道一致[17]，故鉴定化合物8为异橙黄胡椒酰胺乙酸脂。
化合物9：无色块状结晶（丙酮），分子式C11H16O3，ESI-MS m/z: 219 [M＋Na]+,415 [2M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz,CD3OD) δ: 1.67 (1H,d,J = 3.8 Hz,H-2a),1.49 (1H,dd,J = 14.4,3.5 Hz,H-2b),4.16 (1H,m,H-3),2.37 (1H,d,J = 14.4 Hz,H-4a),1.93 (1H,d,J = 14.4 Hz,H-4b),5.70 (1H,s,H-7),1.41 (3H,s,H-9),1.22 (3H,s,H-10),1.70 (3H,s,H-11)；13C-NMR (125 MHz,CD3OD) δ: 37.2 (C-1),48.0 (C-2),67.2 (C-3),46.5 (C-4),89.0 (C-5),171.8 (C-6),113.3 (C-7),185.7 (C-8),31.0 (C-9),27.0 (C-10),27.5 (C-11)。以上数据与文献报道一致[18]，故鉴定化合物9为loliolide。
化合物10：黄色无定形粉末，分子式C20H20O6，ESI-MS m/z: 391 [M＋Cl]-。1H-NMR (600 MHz,CD3OD) δ: 6.95 (1H,brs,H-2),6.78 (1H,d,J = 8.1 Hz,H-5),6.83 (1H,dd,J = 8.1,1.8 Hz,H-6),5.61 (1H,d,J = 6.4 Hz,H-7),3.86 (1H,m,H-8),3.85 (1H,m,H-9a),3.57 (1H,m,H-9b),7.25 (1H,brs,H-2′),7.30 (1H,brs,H-6′),7.63 (1H,d,J = 15.7 Hz,H-7′),6.69 (1H,dd,J = 15.7,7.8 Hz,H-8′),9.59 (1H,d,J = 7.9 Hz,H-9′),3.83 (1H,s,3-OCH3),3.93 (3H,s,3′-OCH3)；13C-NMR (150 MHz,CD3OD) δ: 134.1 (C-1),110.6 (C-2),149.3 (C-3),148.0 (C-4),116.4 (C-5),120.1 (C-6),90.2 (C-7),54.8 (C-8),64.5 (C-9),56.5 (3-OCH3),129.8 (C-1′),114.3 (C-2′),146.2 (C-3′),153.1 (C-4′),131.4 (C-5′),119.9 (C-6′),156.4 (C-7′),127.1 (C-8′),196.4 (C-9′),56.9 (3′-OCH3)。以上数据与文献报道一致[19]，故鉴定化合物10为 (-)-蛇菰宁。
化合物11：黄色无定形粉末，分子式C16H12O6，ESI-MS m/z: 323 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz,CD3OD) δ: 12.98 (1H,s,5-OH),10.80 (1H,s,7-OH),9.94 (1H,s,4′-OH),6.91 (1H,s,H-3),6.19 (1H,s,H-6),6.51 (1H,s,H-8),7.56 (2H,s,H-2′,6′),6.91 (1H,brs,H-5′),3.89 (3H,s,3′-OCH3)；13C-NMR (150 MHz,CD3OD) δ: 163.8 (C-2),103.8 (C-3),181.9 (C-4),157.4 (C-5),98.9 (C-6),164.2 (C-7),94.2 (C-8),161.5 (C-9),103.3 (C-10),120.4 (C-1′),110.2 (C-2′),150.8 (C-3′),148.1 (C-4′),115.8 (C-5′),121.6 (C-6′),56.0 (3′-OCH3)。以上数据与文献报道一致[20]，故鉴定化合物11为金圣草素。
化合物12：白色无定形粉末，分子式C19H34O3，EI-MS m/z: 310。1H-NMR (400 MHz,CDCl3) δ: 2.30 (2H,t,J = 7.4 Hz,H-2),4.15 (1H,dd,J = 12.5,6.1 Hz,H-9),5.66 (1H,dd,J = 15.1,6.9 Hz,H-10),6.49 (1H,dd,J = 15.1,11.1 Hz,H-11),5.97 (1H,t,J = 10.8 Hz,H-12),5.45 (1H,dd,J = 18.1,7.6 Hz,H-13),2.16 (2H,m,H-14),0.89 (3H,t,J = 6.3 Hz,H-18),3.66 (3H,s,-OCH3),1.62～1.30 (18H,m,9×-CH2)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3) δ: 174.3 (C-1),34.0 (C-2),25.3 (C-3),29.0 (C-4),29.1 (C-5),29.3 (C-6),24.9 (C-7),37.2 (C-8),72.9 (C-9),135.7 (C-10),125.8 (C-11),127.6 (C-12),133.1 (C-13),27.7 (C-14),29.3 (C-15),31.4 (C-16),22.5 (C-17),14.0 (C-18),51.5 (-OCH3)。以上数据与文献报道一致[21]，故鉴定化合物12为9-hydroxy-10E,12Z-octadecadienoic acid methyl ester。
化合物13：白色无定形粉末，分子式C31H36O11，EI-MS m/z: 584。1H-NMR (400 MHz,CDCl3) δ: 6.62 (2H,s,H-2,6),4.75 (2H,m,H-7,7′),3.13 (2H,m,H-8,8′),4.12 (2H,brs,H-9a,9′a),4.28 (2H,m,H-9b,9′b),6.72～6.94 (6H,m,H-2′,2′′,5′,5′′,6′,6′′),4.98 (1H,brs,H-7′′),3.92 (1H,m,H-8′′),3.49 (2H,m,H-9′′),3.90 (6H,s,3,5-OCH3),3.88 (3H,s,3′-OCH3),3.86 (3H,s,3′′-OCH3)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3) δ: 131.2 (C-1),102.7 (C-2),153.4 (C-3),134.1 (C-4),153.4 (C-5),102.7 (C-6),86.0 (C-7),54.5 (C-8),72.1 (C-9),137.4 (C-1′),118.7 (C-2′),146.6 (C-3′),144.8 (C-4′),108.3 (C-5′),114.2 (C-6′),85.7 (C-7′),54.0 (C-8′),71.5 (C-9′),132.6 (C-1′′),108.6 (C-2′′),147.8 (C-3′′),145.3 (C-4′′),114.3 (C-5′′),118.9 (C-6′′),72.4 (C-7′′),87.0 (C-8′′),60.5 (C-9′′),55.9 (3,5-OCH3),56.1 (3′-OCH3),55.9 (3′′-OCH3)。以上数据与文献报道一致[22]，故鉴定化合物13为ficusesquilignan A。
志谢：化合物的波谱数据由昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室仪器组测定。
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