野菊Chrysanthemum indicum L. 为菊科植物，全草入药，具有清热解毒的功效，可用于治疗流行性感冒、脑脊髓膜炎、高血压病、肝炎、痢疾、毒蛇咬伤等^[1]。现代研究表明其主要含有黄酮、有机酸、挥发油和萜类等成分，且具有心脏保护、抗血小板聚集、抗微生物和镇痛抗炎等药理作用^[2]。野菊既是临床常用中药材，也是珍菊降压片、野菊花注射液等许多中成药的重要原料，其野生资源丰富，受原植物品种、产地、加工方法等因素影响，不同来源的药材质量差异较大。黄酮类和酚酸类成分是野菊清热解毒的主要药效组分，相关学者多以蒙花苷为代表的黄酮类和以绿原酸为代表的有机酸类成分为定量测定指标，来评价药材质量^{[4, 5]}。也有学者建立了野菊花的高效液相指纹图谱^[6]，为药材整体质量控制提供了参考，但研究多集中在花序部位，而花占野菊整个地上植株质量不足1/5。为进一步研究有效成分分布情况，本实验对野菊的花、叶、嫩茎、老茎不同部位分别测定蒙花苷和绿原酸量，以期对现行质量标准进行补充和提高，为野菊资源的综合开发利用提供参考。

高效液相色谱仪（UV6000LP二极管阵列检测器，AS3000型进样器，OV—2001型柱温箱，均为赛莫飞世尔科技公司）；AB204—N型万分之一天平（Mettler Toledo公司）；AS3120型超声仪（奥特宝恩斯仪器有限公司）；XMTB型水浴锅（巩义市予华仪器有限责任公司）。

野菊药材购自辽宁、陕西，经天津药物研究院张铁军研究员鉴定为菊科植物野菊Chrysanthemum indicum L. 的干燥地上部分；蒙花苷（又名柳穿鱼苷）对照品为自制，质量分数大于97%；绿原酸对照品购自中国食品药品检定研究院；甲醇（分析纯，天津康科德科技有限公司）；磷酸（分析纯，天津市化学试剂三厂）；乙腈（色谱纯，天津康科德科技有限公司）；水为娃哈哈纯净水。

分别精密称取蒙花苷、绿原酸对照品适量于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并定量稀释成含蒙花苷0.75 mg/mL，含绿原酸0.05 mg/mL的对照品储备液。精密量取各对照品储备液5 mL，置同一25 mL量瓶中，加甲醇稀释到刻度，摇匀，得混合对照品溶液。

将干燥的野菊药材以花、叶、嫩茎、老茎为不同部位分开，粉碎，过40目筛，混合均匀，各精密称定0.25 g，置于100 mL圆底烧瓶中，精密量取70%甲醇50 mL，称取总质量，水浴加热回流2 h，放冷，称其质量，用甲醇补齐质量，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液为供试液。

Thermo C₁₈（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；检测波长327 nm；柱温30 ℃；体积流量1 mL/min；进样体积：10 μL；流动相为乙腈（A）-0.05%磷酸水溶液（B），梯度洗脱，0～5 min，9%～19% A；5～17 min，19%～21% A；17～35 min，21%～34% A；35～45 min，34%～42% A；45～50 min，42%～90% A。HPLC色谱图见图 1。

图 1混合对照品 (A)、辽宁样品 (B)、陕西样品 (C)的HPLC色谱图 Fig. 1 HPLC of mixed reference substances (A),Liaoning samples (B),and Shaanxi samples (C) 1-绿原酸 2-蒙花苷 1-chlorgrnic acid 2-linarin

分别精密吸取混合对照品溶液1、2、4、8、16、20 μL进样，测定峰面积，记录数据。以各成分峰面积平均值为纵坐标（Y），进样质量为横坐标（X）进行线性回归，得回归方程：蒙花苷Y＝25 315 X－9 478.8，r＝0.999 0，绿原酸Y＝29 608 X＋638.25，r＝0.999 5；结果表明蒙花苷在0.15～3.00 μg，绿原酸在0.01～0.20 μg与峰面积呈良好的线性关系。

精密吸取混合对照品溶液10 μL，连续进样6次，计算蒙花苷、绿原酸峰面积的RSD分别为1.02%、1.23%。

取辽宁产野菊花样品，按“2.2”项方法制备供试品溶液，分别在0、2、4、6、12、24 h进样10 μL，计算蒙花苷、绿原酸峰面积的RSD分别为0.77%、0.54%。

取辽宁产野菊花样品6份，按“2.2”项方法制备供试品溶液，进样测定，计算蒙花苷、绿原酸质量分数的RSD分别为1.55%、1.34%。

精密称取辽宁产野菊花样品6份，分别加入蒙花苷、绿原酸对照品储备液各13 mL，按“2.2”项方法制备供试品溶液，按样品测定法计算回收率，蒙花苷、绿原酸的平均回收率分别为98.17%、97.99%，RSD分别为1.27%、0.91%。

取辽宁、陕西2个产地野菊的花、叶、嫩茎、老茎共8个样品，按“2.2”项方法制备供试品溶液，按“2.3”项色谱条件进样测定各样品蒙花苷、绿原酸量，对照品及样品色谱图见图 1，测定结果见表 1。

表 1(Table 1)

表 1 样品测定结果 (n = 3) Table 1 Determination of samples (n = 3) 样品 质量分数 / % 蒙花苷 绿原酸 辽宁 花 4.02 0.26 叶 4.69 0.20 嫩茎 0.69 0.11 老茎 0.42 0.11 陕西 花 2.26 0.19 叶 2.99 0.05 嫩茎 0.55 0.04 老茎 0.32 0.03

表 1 样品测定结果 (n = 3) Table 1 Determination of samples (n = 3)

选用乙腈-2%冰乙酸、甲醇-2%冰乙酸、甲醇-0.05%磷酸、甲醇-0.1%甲酸等流动相系统进行梯度洗脱，由于峰形差、拖尾、分析过长等因素的影响，最后选择乙腈-0.05%磷酸作为流动相，基线平稳、峰形较好、保留时间适中。

本实验采用二极管阵列检测器进行200～400 nm全谱测定，蒙花苷的最大吸收波长为327 nm和334 nm，绿原酸为327 nm，故选择对蒙花苷、绿原酸均有较好响应的波长327 nm作为检测波长，各峰吸收均匀，分离度较好，方法学考察结果表明该波长下试验方法精密、稳定、准确。

在实验过程中考察了分别以100%、70%、50%甲醇超声提取30 min，结果表明50%甲醇提取绿原酸量高，然而蒙花昔量低，100%甲醇提取蒙花苷量高而绿原酸量低，因而选用70%甲醇为提取溶剂。又考察了以70%甲醇为溶剂超声和加热回流的提取情况，结果表明加热回流2 h提取完全。

采用二极管阵列检测器检测蒙花苷和绿原酸成分峰的纯度，测定结果表明，其峰纯度分别为99.13%、99.02%；三点光谱图完全重合，表明主成分峰为单一物质峰。

根据含量测定结果可以看出，野菊花和叶中活性成分质量分数较高，茎中质量分数较低，这与本实验出膏率测定结果相一致。其中辽宁产野菊的叶部位蒙花苷质量分数高达4.69%，提示野菊叶可能具有较高的药用价值，或开发作为天然蒙花苷的制备原料；而陕西产野菊的叶部位绿原酸质量分数较低，为0.05%，与茎中质量分数相当，这可能因为作为供试品进行提取时，该野菊的叶部位已经老化并枯萎泛黄，导致绿原酸质量分数较低，提示老叶和新叶的化学成分质量分数也具有一定的差异。

根据各部位色谱图对照结果可以看出，野菊花、叶、嫩茎和老茎4个部位所含化学成分的种类大致相同，但在质量分数上差异较大。