五味子是木兰科植物五味子Schisandra chinensis (Turcz.) Baill. 的干燥成熟果实，习称“北五味子”^[1]。其味酸、甘，性温；有收敛固涩、益气生津、补肾宁心的功能；用于久咳虚喘、遗精、滑精、遗尿、尿频、久泻不止、自汗、盗汗、津伤口渴、短气脉虚、内热消渴、心悸失眠等症^[2]。

五味子主要含有木脂素、多糖、挥发油、有机酸和维生素等多种化学成分，其中木脂素是五味子镇静催眠的主要活性成分^{[3, 4]}。通过HPLC和LC-MS建立五味子的指纹图谱已有大量的文献报道，但单独采用超高效液相色谱（UPLC）法建立五味子的指纹图谱分析方法目前国内还未见报道。UPLC是以1.8 μm的超细色谱柱填料为核心技术的新型色谱分离分析技术，相对于常规HPLC而言，有更好的分离效率及灵敏度^[5]。本实验采用UPLC法进行五味子的指纹图谱研究，该方法较HPLC更快速、高效，且较LC-MS更实用，应用更广泛。

ACQUITY UPLC仪，美国Waters公司，包括四元高压梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器（PDA）、Empower2色谱工作站；BP210S电子天平（德国Sartorius公司）；AB135—S十万分之一天平（瑞士Mettler Toledo公司）；KQ5200B超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

对照品五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素购自中国食品药品检定研究院（批号：110857-201211，111529-200604，110764-201111，110765-200710），五味子醇乙、当归酰戈米辛H、五味子酯乙、五味子γ-乙素和五味子丙素为实验室自制（经核磁和质谱鉴定，采用峰面积归一化法计算，质量分数均＞98.0%）。乙腈为色谱纯（美国Fisher公司），水为娃哈哈纯净水，甲醇为分析纯。19批北五味子来源见表 1，经沈阳药科大学生药教研室贾英教授鉴定，均为正品五味子Schisandra chinensis (Turcz.) Baill. 的果实，密封存放于阴凉干燥处。

表 1(Table 1)

表 1 五味子样品来源 Table 1 Origins of S. chinensis 编号 来源 编号 来源 S1 黑龙江 巴彦县 S11 吉林 和龙县 S2 辽宁 本溪 S12 黑龙江 佳木斯2 S3 辽宁 沈阳1 S13 黑龙江 哈尔滨3 S4 辽宁 沈阳2 S14 吉林 永吉县 S5 吉林 安图县 S15 吉林 舒兰县 S6 吉林 抚松县 S16 黑龙江 绥化 S7 黑龙江 佳木斯1 S17 黑龙江 木兰县 S8 黑龙江 哈尔滨1 S18 吉林 长白山 S9 辽宁 沈阳3 S19 黑龙江 鹤岗 S10 黑龙江 哈尔滨2

表 1 五味子样品来源 Table 1 Origins of S. chinensis

ACQUITY UPLC HSS T3（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）色谱柱，流动相为水（A）-乙腈（B），梯度洗脱条件：0～6 min，43%～52% B；6～8 min，52%～60% B；8～10 min，60%～62% B；10～11 min，62%～62% B；11～14 min，62%～66% B；14～16 min，66%～70% B；16～18 min，70%～100% B；18～22 min，100% B。体积流量0.5 mL/min，柱温30 ℃；检测波长216 nm；进样量2 μL。

取五味子醇甲、五味子醇乙、当归戈米辛H、五味子酯甲、五味子酯乙、五味子甲素、五味子γ-乙素、五味子乙素和五味子丙素对照品各适量，精密称定，分别加甲醇溶解制成适当质量浓度的对照品贮备液。精密量取上述对照品贮备液各适量，置同一2 mL的量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得五味子醇甲、五味子醇乙、当归酰戈米辛H、五味子酯甲、五味子酯乙、五味子甲素、五味子γ-乙素、五味子乙素和五味子丙素的质量浓度分别为156、25.5、15.3、31.2、10.5、25.9、10.2、40.0、10.5 μg/mL的混合对照品。

取样品粉末约2 g，精密称定，置100 mL 具塞锥形瓶中，精密加入85%甲醇100 mL，超声处理30 min，放至室温，用甲醇补足减失质量，摇匀，过0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

取同一供试品溶液（S2），按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，测得各共有峰相对保留时间和相对峰面积RSD均小于2%。

分别取同一批（S2）北五味子样品适量，共6份，精密称定，分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液，照“2.1”项下色谱条件分别进样分析，测得其各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于2%，表明重复性良好。

取同一供试品溶液（S2），按“2.1”项下方法操作，分别在0、2、4、8、12、24 h进样，测得其各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于2%，表明样品在24 h内稳定。

取19批北五味子样品，按“2.3”项下制备供试品溶液，在“2.1”项下的色谱条件下依次进样检测，记录色谱图，共获得21个共有峰，指认了其中9个共有峰，分别为1、4、7、12、13、15、16、17和18。混合对照品（A）和典型五味子色谱图（B）见图 1。

图 1 混合对照品 (A) 和五味子样品 (B) 的UPLC图谱 Fig. 1 UPLCof mixed reference substances (A) and S. chinensis (B) 1-五味子醇甲 4-五味子醇乙 7-当归酰戈米辛H 12-五味子酯甲 13-五味子酯乙 15-五味子甲素 16-五味子γ-乙素 17-五味子乙素 18-五味子丙素 1-schisandrin 4-schisandrol B 7-angeloylgomisin H 12-schisantherin A 13-schisantherin B 15-deoxyschisandrin 16-γ-schisandrin 17-gomisin N 18-schisandrin C

在各批次样品图谱中五味子乙素的色谱峰（17号峰）分离良好，峰位居中，峰面积较大且为所有样品共有，所以确定五味子乙素为参比峰。

结合形态学鉴定结果，选择19批五味子建立共有模式。将19批样品色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2009版》软件，建立了五味子的指纹图谱共有模式图，结果见图 2。

图 2 19批五味子UPLC指纹图谱 Fig. 2 UPLC fingerprints for 19 batches of S. chinensis

对19批五味子样品的UPLC指纹图谱进行相似度评价，结果见表 2。分析结果显示19批次的五味子相似度均在0.970以上，表明各产地五味子具有较高的相似度。

表 2(Table 2)

表 2 19批五味子的相似度分析 Table 2 Similarity analysis of 19 batches of S. chinensis 编号 相似度 编号 相似度 S1 0.999 S11 0.995 S2 0.989 S12 0.996 S3 0.993 S13 0.994 S4 0.998 S14 0.999 S5 0.999 S15 0.999 S6 0.997 S16 0.979 S7 0.995 S17 0.998 S8 0.998 S18 0.993 S9 0.999 S19 0.992 S10 0.999

表 2 19批五味子的相似度分析 Table 2 Similarity analysis of 19 batches of S. chinensis

本实验对提取溶剂进行考察，比较了50%、75%、85%、100%甲醇、50%、75%、95%乙醇，结果表明，以85%甲醇提取的样品，色谱峰个数较多，峰面积较大，且无溶剂效应，故提取溶剂选择85%甲醇。对超声与回流2种不同的提取方法考察结果表明，2种提取方法效率相当，考虑到超声操作较简便，故提取选择超声。超声时间30 min，1次即可提取较完全。故最终确定用85%甲醇超声30 min，提取1次。

本实验使用Waters的PDA检测器进行紫外区全波长扫描，结果表明在216 nm波长下，色谱图基线噪音较低，特征峰响应较高，木脂素类成分色谱峰信息较完全，因此选择216 nm作为本实验的检测波长。实验还考察了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-甲酸水、乙腈-磷酸水4个流动相系统，结果发现采用乙腈-水流动相系统，各峰的分离度较好，且基线平稳，因此最终采用乙腈-水系统作为流动相系统。

本研究首次建立了22 min内快速鉴别五味子的UPLC指纹图谱方法，相似度评价分析得19批五味子药材的相似度均在0.970以上，表现出很高的相似度。结果表明五味子在东北三省产地的相似度较高，无显著性差异，均为五味子的推荐品。