摘要: 目的 探讨桃红四物汤改善硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)诱导的肝细胞新型死亡模式——双硫死亡,从而干预肝纤维化进展的作用机制。方法 利用高效液相色谱仪对桃红四物汤进行成分分析。建立TAA诱导的小鼠肝纤维化模型和AML12肝细胞模型,给予桃红四物汤干预后,采用转录组测序、生物信息学、qRT-PCR和免疫荧光法探究桃红四物汤抑制肝细胞双硫死亡的作用机制。结果 TAA可诱导双硫死亡标志基因如溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,Slc7a11)、溶质载体家族3成员2(solute carrier family 3 member 2,Slc3a2)、细丝蛋白A(filamin A,Flna)、肌球蛋白重链9(myosin heavy chain 9,Myh9)、肌球蛋白重链10(myosin heavy chain 10,Myh10)、NCK关联蛋白1(NCK associated protein 1,Nckap1)及纤维化相关基因如肌动蛋白α2(actin alpha 2,Acta2)、I型胶原蛋白α1链(collagen type I alpha 1 chain,Col1a1)、金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1,Timp1)表达显著上调(P<0.05、0.01、0.001),伴随F-actin收缩及烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADP+)/NADPH值升高(P<0.01)。给予桃红四物汤干预后,细胞骨架基因Flna、Myh9、Myh10、Nckap1及肝纤维化相关基因表达显著下调(P<0.05、0.01、0.001),NADP+/NADPH值显著降低(P<0.05),细胞骨架的形态恢复。结论 桃红四物汤可通过有效缓解TAA诱导的肝细胞双硫死亡延缓肝纤维化进展,为相关疾病及并发症的临床治疗提供理论依据。
摘要: 目的 建立蕤仁Prinsepiae nux饮片多指标定量检测方法,结合化学模式识别及CRITIC(criteria importance though intercrieria correlation)-逼近理想解排序(technique for order preferenceby similarity to ideal solution,TOPSIS)法评价不同产地蕤仁饮片质量。方法 采用高效液色谱法,以槲皮素、β-谷甾醇为内参物,分别计算没食子酸、原儿茶酸、香草酸、山柰酚与槲皮素,熊果酸、齐墩果酸、委陵菜酸、胡萝卜苷与β-谷甾醇的相对校正因子,对蕤仁饮片中10个成分进行定量检测;同时检测醇溶性浸出物、总灰分和酸不溶性灰分含量。采用化学模式识别以及CRITIC-TOPSIS法评价不同产地蕤仁饮片质量。结果 外标法方法学验证结果良好;各相对校正因子重复性良好;外标法与一测多评(quantitative analysis of multi-components by single marker,QAMS)法计算结果无明显差异(P>0.05)。主成分分析(principal component analysis,PCA)结果显示不同产地16批蕤仁饮片分成3类;正交偏最小二乘法-判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)结果显示没食子酸、槲皮素、β-谷甾醇、熊果酸、委陵菜酸、齐墩果酸和山柰酚变量重要性投影值均>1,是区分不同产地蕤仁饮片质量的差异性标志物;CRITIC-TOPSIS分析结果显示,法16批蕤仁饮片综合质量评价指标的相对贴近度为0.407 2~0.593 5,其中陕西、甘肃和山西产蕤仁饮片排名靠前,样品质量较优。结论 通过建立蕤仁饮片中多指标定量,结合化学模式识别及CRITIC-TOPSIS分析评价了不同产地蕤仁饮片质量,为蕤仁饮片质量标准的研究及其质量标志物的研究提供参考。