2017, Vol. 48
引用本文 | doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2017.03.004 |
2. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所/农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室, 海南 海口 571101
, MA Qing-yun2, HUANG Sheng-zhuo2, KONG Fan-dong2, YANG Ning-ning2, DAI Hao-fu2, WU You-gen1
, ZHAO You-xing2
2. Key Laboratory of Biology and Genetic Resources of Tropical Crops, Ministry of Agriculture, Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences, Haikou 571101, China
灵芝是担子菌纲灵芝科Ganodermataceae灵芝属Ganoderma Karst.真菌的总称[1]，具有补中益气、滋补强壮、扶正固本、延年益寿等功效，是一种珍贵的中药材，享有“仙草”之美誉。灵芝的主要化学成分为三萜类、甾体类、多糖类、生物碱类等[2-5]，其生物活性主要包括降血压、降血糖、抗肝炎、抗肿瘤、抗艾滋病等[3, 6-7]。《中国药典》2015年版[8]记载灵芝“补气安神、止咳平喘。用于心神不宁、失眠心悸、肺虚咳喘、虚劳短气、不思饮食”，显示其具有作用于神经系统的功效，可考虑用于神经退行性疾病如阿尔茨海默病（AD）与帕金森病（PD）的药物研发。研究表明AD和PD的发病与大脑内乙酰胆碱的缺失有关，药物治疗可以通过抑制乙酰胆碱酯酶（AChE）来提高患者体内乙酰胆碱水平[9]，开发AChE抑制剂类药物已成为一种治疗手段。全世界报道的灵芝有200余种，中国有103种[10]，其中药用灵芝有23种[11]。海南灵芝资源生物多样性显著，目前已发现有78种[10]，大青山灵芝Ganoderma daiqingshanense J. D. Zhao属于灵芝属Ganoderma Karst.，生于热带雨林中腐木桩上，主要分布于海南岛坝王岭和五指山自然保护区以及广西十万大山自然保护区等地[9]，是海南主要野生灵芝资源之一。近年灵芝科真菌的化学成分及药理研究一直深受关注，从一系列灵芝资源中发现了多种结构新颖的活性成分[12-15]。大青山灵芝子实体中化学成分和药理作用的研究未见报道，为了深入研究大青山灵芝中的化学成分，发现其神经保护活性成分，更好地开发和利用大青山灵芝资源，本实验采用了硅胶柱色谱和Sephadex LH-20凝胶柱色谱等方法，从中分离出12个化合物，分别鉴定为3β, 21β-山芝烯二醇-3-乙酰基（3β, 21β-serratenediol-3-acetate，1）、3β, 21α-山芝烯二醇-3-乙酰基（3β, 21α-serratenediol-3-acetate，2）、3-O-乙酰基千层塔三醇（3-O-acetyltohogenol，3）、20(29)-羽扇烯-3-醇[20(29)-lupen-3β-ol，4]、赤芝醛A（lucialdehyde A，5）、灵芝酸Y（ganoderic acid Y，6）、麦角甾-7, 22E-二烯-3-酮（ergosta-7, 22E-diene-3-one，7）、麦角甾-4, 6, 8(14), 22E-四烯-3-酮[ergosta-4, 6, 8(14), 22-tetraene-3-one，8]、麦角甾-7, 22E-二烯-3β-醇（ergosta-7, 22E-diene-3β-ol，9）、5α, 8α-过氧麦角甾-6, 22E-二烯-3β-醇（5α, 8α-epidioxyergosta-6, 22E-diene-3β-ol，10）、甲龙胆酸（ankylosaurus acid，11）、大戟因子L3（euphorbia factor L3，12）。所有化合物均为首次从大青山灵芝中分离得到，其中serratene型三萜（化合物1~3）为首次从灵芝科真菌中发现，化合物5、11和12对AChE具有一定的抑制活性，抑制率分别为17.70%、22.89%和21.22%。
1 仪器与材料薄层色谱硅胶板、柱色谱用硅胶（200~300目）和硅胶H均产自青岛海洋化工厂；Sephadex LH-20凝胶为GE公司生产；MB100-40/75 C8反相色谱柱（直径40~75 μm，FU-JI公司，日本）；AVANCE-500核磁共振光谱仪，TMS为内标（Bruker公司，德国）；Autospec-3000质谱仪（Waters公司，美国）；HP6890/5975C GC-MS联用仪（安捷伦公司，美国）。AChE购自北京Solarbio公司，碘化硫代乙酰胆碱（质量分数≥99%）、二硫代二硝基苯甲酸（DNTB，质量分数≥98%）、他克林（质量分数≥99%）等均购自北京Sigma公司；ELX-800酶标仪购自美国宝特公司。
大青山灵芝2015年6月采自海南省陵水县吊罗山，经海南大学吴兴亮教授鉴定为灵芝科（Ganodermataceae）大青山灵芝Ganoderma daiqingshanense J. D. Zhao，凭证标本（2015LZ07）存放于中国热带农业科学院热带生物技术研究所。
2 提取与分离将采集的大青山灵芝子实体4.47 kg晒干粉碎，于室温下用95%乙醇浸提3次，所得滤液经减压浓缩后得到粗浸膏，加水得到悬浊液，依次用醋酸乙酯和正丁醇萃取，萃取液分别减压浓缩至干，得到醋酸乙酯部分159.6 g和正丁醇部分80 g。醋酸乙酯部分经硅胶柱色谱以石油醚-醋酸乙酯（10:1→1:1）梯度洗脱，分段收集，通过薄层色谱检测，合并相同的部分，得到16个组分Fr. 1~16。Fr. 1（5 g）采用反相硅胶柱色谱，以甲醇-水（75%~90%）梯度洗脱得到化合物7（5.7 mg）。Fr. 4（4 g）采用硅胶柱色谱，以石油醚-醋酸乙酯（8:1→5:1）梯度洗脱和Sephadex LH-20色谱（氯仿-甲醇1:1）分离得到化合物1（4 mg）、4（27.9 mg）、8（4.9 mg）。Fr. 5（5 g）采用硅胶柱色谱，以石油醚-醋酸乙酯（6:1→3:1）梯度洗脱和Sephadex LH-20色谱（甲醇）分离得到化合物2（5 mg）。Fr. 6（6 g）采用硅胶柱色谱，以石油醚-醋酸乙酯（6:1→3:1）梯度洗脱和Sephadex LH-20色谱（氯仿-甲醇1:1）分离得到化合物3（188.5 mg）、5（10 mg）、12（2 mg）。Fr. 7（10 g）采用硅胶柱色谱，以石油醚-醋酸乙酯（5:1→2:1）梯度洗脱和Sephadex LH-20色谱（甲醇）分离得到化合物9（5.5 mg）。Fr. 8（10 g）采用硅胶柱色谱，以石油醚-醋酸乙酯（4:1→2:1）梯度洗脱和Sephadex LH-20色谱（氯仿-甲醇1:1）分离得到化合物10（3.4 mg）、11（16 mg）。Fr. 10（10 g）采用硅胶柱色谱，以石油醚-醋酸乙酯（3:1）洗脱和Sephadex LH-20色谱（氯仿-甲醇1:1）分离得到化合物6（6 mg）。
3 结构鉴定化合物1：无色针状结晶（氯仿），ESI-MS m/z: 507 [M+Na]+，分子式C32H52O3。1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 4.42 (1H, dd, J=5.0, 11.5 Hz, H-3), 5.29 (1H, m, H-15), 3.41 (1H, dd, J=7.5, 4.3 Hz, H-21), 0.80 (3H, s, H-23), 0.77 (3H, s, H-24), 0.79 (3H, s, H-25), 0.80 (3H, s, H-26), 0.65 (3H, s, H-28), 0.89 (3H, s, H-29), 0.89 (3H, s, H-30), 2.00 (3H, s, -COCH3)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ: 38.0 (C-1), 24.0 (C-2), 81.0 (C-3), 38.2 (C-4), 56.3 (C-5), 18.9 (C-6), 45.2 (C-7), 38.4 (C-8), 57.0 (C-9), 36.1 (C-10), 25.3 (C-11), 27.9 (C-12), 62.9 (C-13), 138.6 (C-14), 122.3 (C-15), 24.2 (C-16), 43.5 (C-17), 37.6 (C-18), 28.2 (C-19), 25.6 (C-20), 76.4 (C-21), 37.3 (C-22), 31.4 (C-23), 16.7 (C-24), 16.0 (C-25), 19.9 (C-26), 56.0 (C-27), 13.4 (C-28), 27.3 (C-29), 21.9 (C-30), OAC: 171.2, 21.5。以上数据与文献报道[16]基本一致，故鉴定化合物1为3β, 21β-山芝烯二醇-3-乙酰基。
化合物2：无色块晶（氯仿），ESI-MS m/z: 507 [M+Na]+，分子式C32H52O3。1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 4.42 (1H, dd, J=4.9, 11.5 Hz, H-3), 5.33 (1H, m, H-15), 3.19 (1H, dd, J=5.6, 11.5 Hz, H-21), 0.95 (3H, s, H-23), 0.80 (3H, s, H-24), 0.79 (3H, s, H-25), 0.81 (3H, s, H-26), 0.68 (3H, s, H-28), 0.81 (3H, s, H-29), 0.83 (3H, s, H-30), 2.00 (3H, s, -COCH3)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ: 37.2 (C-1), 27.3 (C-2), 80.9 (C-3), 37.3 (C-4), 57.3 (C-5), 18.9 (C-6), 45.1 (C-7), 39.0 (C-8), 62.8 (C-9), 38.2 (C-10), 23.9 (C-11), 27.7 (C-12), 55.9 (C-13), 138.3 (C-14), 122.3 (C-15), 24.2 (C-16), 49.6 (C-17), 38.0 (C-18), 36.2 (C-19), 25.4 (C-20), 79.3 (C-21), 38.4 (C-22), 27.8 (C-23), 14.7 (C-24), 15.9 (C-25), 19.9 (C-26), 56.1 (C-27), 13.5 (C-28), 16.7 (C-29), 28.2 (C-30), OAC: 171.2, 21.5。以上数据与文献报道[17]基本一致，故鉴定化合物2为3β, 21α-山芝烯二醇-3-乙酰基。
化合物3：白色粉末，ESI-MS m/z: 525 [M+Na]+，分子式C32H54O4。1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 4.42 (1H, dd, J=5.1, 11.5 Hz, H-3), 3.36 (1H, brs, H-21), 0.90 (3H, s, H-23), 0.79 (3H, s, H-24), 0.79 (3H, s, H-25), 0.90 (3H, s, H-26), 0.90 (3H, s, H-28), 0.79 (3H, s, H-29), 0.81 (3H, s, H-30), 2.00 (3H, s, -COCH3)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ: 37.2 (C-1), 23.8 (C-2), 81.0 (C-3), 37.8 (C-4), 55.7 (C-5), 18.8 (C-6), 44.7 (C-7), 37.8 (C-8), 59.2 (C-9), 38.0 (C-10), 22.2 (C-11), 25.3 (C-12), 60.8 (C-13), 76.1 (C-14), 44.9 (C-15), 25.2 (C-16), 49.0 (C-17), 38.2 (C-18), 38.3 (C-19), 28.1 (C-20), 76.2 (C-21), 38.6 (C-22), 25.7 (C-23), 16.4 (C-24), 16.6 (C-25), 22.5 (C-26), 61.7 (C-27), 15.7 (C-28), 18.6 (C-29), 28.4 (C-30), OAC: 171.2, 21.5。以上数据与文献报道[18]基本一致，故鉴定化合物3为3-O-乙酰基千层塔三醇。
化合物4：白色粉末，ESI-MS m/z: 449 [M+Na]+，分子式C30H50O。1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 3.16 (1H, dd, J=4.8, 11.3 Hz, H-3), 0.94 (3H, s, H-23), 1.03 (3H, s, H-24), 0.82 (3H, s, H-25), 1.03 (3H, s, H-26), 0.78 (3H, s, H-27), 1.03 (3H, s, H-28), 4.65 (1H, d, J=2.1 Hz, H-29a), 4.56 (1H, d, J=2.1 Hz, H-29b), 1.68 (3H, s, H-30)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ: 38.8 (C-1), 27.6 (C-2), 79.2 (C-3), 39.0 (C-4), 55.4 (C-5), 18.5 (C-6), 34.4 (C-7), 40.1 (C-8), 50.6 (C-9), 37.3 (C-10), 22.8 (C-11), 25.3 (C-12), 38.2 (C-13), 43.0 (C-14), 27.6 (C-15), 35.7 (C-16), 43.1 (C-17), 48.1 (C-18), 48.4 (C-19), 151.1 (C-20), 30.0 (C-21), 41.0 (C-22), 28.1 (C-23), 15.5 (C-24), 16.3 (C-25), 16.1 (C-26), 14.7 (C-27), 18.1 (C-28), 109.5 (C-29), 21.1 (C-30)。以上数据与文献报道[19]基本一致，故鉴定化合物4为20(29)-羽扇烯-3-醇。
化合物5：白色粉末，ESI-MS m/z: 461 [M+Na]+，分子式C30H46O2。1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 3.24 (1H, dd, J=4.4, 11.5 Hz, H-3), 5.47 (1H, brd, J=5.8 Hz, H-7), 5.31 (1H, brd, J=6.4 Hz, H-11), 0.87 (3H, s, H-18), 0.98 (3H, s, H-19), 0.95 (3H, d, J=6.4 Hz, H-21), 6.49 (1H, t, J=6.9 Hz, H-24), 9.39 (1H, s, H-26), 1.71 (3H, s, H-27), 1.00 (3H, s, H-28), 0.57 (3H, s, H-29), 0.87 (3H, s, H-30)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ: 35.8 (C-1), 28.1 (C-2), 79.1 (C-3), 38.8 (C-4), 49.2 (C-5), 23.1 (C-6), 120.5 (C-7), 142.6 (C-8), 146.1 (C-9), 37.5 (C-10), 116.3 (C-11), 37.9 (C-12), 44.0 (C-13), 50.4 (C-14), 31.6 (C-15), 27.9 (C-16), 51.0 (C-17), 15.8 (C-18), 22.9 (C-19), 36.3 (C-20), 18.4 (C-21), 34.9 (C-22), 26.2 (C-23), 155.7 (C-24), 139.2 (C-25), 195.6 (C-26), 9.3 (C-27), 28.3 (C-28), 15.9 (C-29), 25.7 (C-30)。以上数据与文献报道[20]基本一致，故鉴定化合物5为赤芝醛A。
化合物6：针状结晶（氯仿），ESI-MS m/z: 477 [M+Na]+，分子式C30H46O3。1H-NMR (500 MHz, Pyr-d5) δ: 3.51 (1H, dd, J=5.9, 9.7 Hz, H-3), 5.61 (1H, brd, J=5.7 Hz, H-7), 5.45 (1H, d, J=6.0 Hz, H-11), 0.70 (3H, s, H-18), 0.70 (3H, s, H-19), 1.17 (3H, d, J=5.7 Hz, H-21), 7.26 (1H, t, J=7.3 Hz, H-24), 2.16 (3H, s, H-27), 1.25 (3H, s, H-28), 1.17 (3H, s, H-29), 1.04 (3H, s, H-30)；13C-NMR (125 MHz, Pyr-d5) δ: 36.7 (C-1), 29.1 (C-2), 78.5 (C-3), 39.7 (C-4), 50.2 (C-5), 23.9 (C-6), 121.5 (C-7), 142.8 (C-8), 147.0 (C-9), 38.2 (C-10), 116.9 (C-11), 38.4 (C-12), 44.5 (C-13), 51.1 (C-14), 32.3 (C-15), 28.5 (C-16), 51.5 (C-17), 16.4 (C-18), 23.5 (C-19), 36.8 (C-20), 18.9 (C-21), 35.8 (C-22), 26.4 (C-23), 143.3 (C-24), 129.4 (C-25), 171.0 (C-26), 13.3 (C-27), 29.2 (C-28), 17.0 (C-29), 26.2 (C-30)。以上数据与文献报道[21]基本一致，故鉴定化合物6为灵芝酸Y。
化合物7：无定形粉末，ESI-MS m/z: 419 [M+Na]+，分子式C28H44O。1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 5.16 (1H, m, H-7), 0.57 (3H, s, H-18), 1.01 (3H, s, H-19), 1.05 (3H, d, J=6.7 Hz, H-21), 5.20 (1H, m, H-22), 5.24 (1H, m, H-23) 0.80 (3H, d, J=6.7 Hz, H-26), 0.83 (3H, d, J=6.5 Hz, H-27), 0.90 (3H, d, J=7.1 Hz, H-28)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ: 38.9 (C-1), 38.3 (C-2), 212.2 (C-3), 44.4 (C-4), 43.0 (C-5), 30.2 (C-6), 117.1 (C-7), 139.7 (C-8), 49.0 (C-9), 34.6 (C-10), 21.9 (C-11), 39.5 (C-12), 43.4 (C-13), 55.2 (C-14), 23.1 (C-15), 28.2 (C-16), 56.1 (C-17), 12.3 (C-18), 12.6 (C-19), 40.6 (C-20), 21.3 (C-21), 135.7 (C-22), 132.1 (C-23), 43.0 (C-24), 33.2 (C-25), 20.1 (C-26), 19.8 (C-27), 17.7 (C-28)。以上数据与文献报道[22]基本一致，故鉴定化合物7为麦角甾-7, 22E-二烯-3-酮。
化合物8：橙黄色油状物，ESI-MS m/z: 415 [M+Na]+，分子式C28H40O。1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 5.69 (1H, s, H-4), 5.99 (1H, d, J=10.0 Hz, H-6), 6.56 (1H, d, J=10.0 Hz, H-7), 0.81 (3H, s, H-18), 0.95 (3H, s, H-19), 0.95 (3H, d, J=7.1 Hz, H-21), 5.19 (1H, dd, J=7.3, 15.3 Hz, H-22), 5.21 (1H, dd, J=8.1, 15.3 Hz, H-23), 1.02 (3H, d, J=7.0 Hz, H-26), 1.02 (3H, d, J=7.0 Hz, H-27), 0.89 (3H, d, J=6.8 Hz, H-28)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ: 34.3 (C-1), 33.2 (C-2), 199.7 (C-3), 123.1 (C-4), 164.6 (C-5), 124.6 (C-6), 134.2 (C-7), 124.6 (C-8), 44.5 (C-9), 36.9 (C-10), 19.1 (C-11), 35.7 (C-12), 44.1 (C-13), 156.3 (C-14), 25.5 (C-15), 27.9 (C-16), 55.8 (C-17), 19.1 (C-18), 16.8 (C-19), 39.4 (C-20), 21.4 (C-21), 135.1 (C-22), 132.7 (C-23), 33.2 (C-24), 43.0 (C-25), 19.8 (C-27), 20.1 (C-26), 17.8 (C-28)。以上数据与文献报道[23]基本一致，故鉴定化合物8为麦角甾-4, 6, 8(14), 22E-四烯-3-酮。
化合物9：白色粉末，ESI-MS m/z: 421 [M+Na]+，分子式C28H46O。1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 3.55 (1H, m, H-3), 5.12 (1H, m, H-7), 0.50 (3H, s, H-18), 0.75 (3H, s, H-19), 0.97 (3H, d, J=6.6 Hz, H-21), 5.16 (1H, overlap, H-22), 5.16 (1H, overlap, H-23), 0.87 (3H, d, J=6.8 Hz, H-26), 0.78 (3H, d, J=7.2 Hz, H-27), 0.97 (3H, d, J=6.6 Hz, H-28)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ: 37.3 (C-1), 31.6 (C-2), 71.2 (C-3), 38.1 (C-4), 40.4 (C-5), 29.8 (C-6), 117.6 (C-7), 139.7 (C-8), 49.6 (C-9), 34.4 (C-10), 21.7 (C-11), 39.6 (C-12), 43.4 (C-13), 55.2 (C-14), 23.1 (C-15), 28.2 (C-16), 56.1 (C-17), 12.2 (C-18), 13.2 (C-19), 40.6 (C-20), 21.3 (C-21), 135.8 (C-22), 132.0 (C-23), 42.9 (C-24), 33.2 (C-25), 19.8 (C-26), 20.1 (C-27), 17.7 (C-28)。以上数据与文献报道[24]基本一致，故鉴定化合物9为麦角甾-7, 22E-二烯-3β-醇。
化合物10：无色粉末，ESI-MS m/z: 451 [M+Na]+，分子式C28H44O3。1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 3.97 (1H, m, H-3), 6.24 (1H, d, J=10.0 Hz, H-6), 6.51 (1H, d, J=10.0 Hz, H-7), 0.81 (3H, s, H-18), 0.81 (3H, s, H-19), 1.00 (3H, d, J=6.7 Hz, H-21), 5.16 (1H, dd, J=7.4, 15.3 Hz, H-22), 5.20 (1H, dd, J=7.5, 15.3 Hz, H-23), 0.82 (3H, d, J=7.2 Hz, H-26), 1.00 (3H, d, J=6.7 Hz, H-27), 0.91 (3H, d, J=6.8 Hz, H-28)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ: 34.8 (C-1), 30.3 (C-2), 66.6 (C-3), 37.1 (C-4), 82.3 (C-5), 135.6 (C-6), 130.9 (C-7), 79.6 (C-8), 51.2 (C-9), 37.1 (C-10), 23.5 (C-11), 39.5 (C-12), 44.7 (C-13), 51.8 (C-14), 20.8 (C-15), 28.8 (C-16), 56.3 (C-17), 13.0 (C-18), 18.3 (C-19), 39.9 (C-20), 21.0 (C-21), 135.3 (C-22), 132.5 (C-23), 42.9 (C-24), 33.2 (C-25), 19.8 (C-26), 20.1 (C-27), 17.7 (C-28)。以上数据与文献报道[25]基本一致，故鉴定化合物10为5α, 8α-过氧麦角甾-6, 22E-二烯-3β-醇。
化合物11：黄色油状物，ESI-MS m/z: 168 [M+Na]+，分子式C8H8O4。1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 6.90 (1H, d, J=7.6 Hz, H-3), 7.04 (1H, dd, J=2.0, 7.6 Hz, H-4), 7.29 (1H, d, J=2.0 Hz, H-6), 3.95 (3H, s, H-8)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ: 112.5 (C-1), 148.2 (C-2), 115.1 (C-3), 118.8 (C-4), 156.0 (C-5), 124.5 (C-6), 170.5 (C-7), 52.7 (C-8)。以上数据与文献报道[26]基本一致，故鉴定化合物11为甲龙胆酸。
化合物12：黄色油状物，ESI-MS m/z: 545 [M+Na]+，分子式C31H38O7。1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 5.78 (1H, dd, J=3.2, 6.4 Hz, H-3), 6.17 (1H, d, J=10.1 Hz, H-5), 6.50 (1H, d, J=11.5 Hz, H-12), 0.90 (3H, d, J=6.7 Hz, H-16), 4.73 (1H, brs, H-17a), 4.97 (1H, brs, H-17b), 1.21 (3H, s, H-18), 1.13 (3H, s, H-19), 1.68 (3H, s, H-20), 7.98 (2H, d, J=7.4 Hz, H-3′, 7′), 7.41 (2H, t, J=7.4 Hz, H-4′, 6′), 7.54 (1H, t, J=7.4 Hz, H-5′), 1.67 (3H, s, 5-OAc), 2.17 (3H, s, 15-OAc)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ: 48.7 (C-1), 38.1 (C-2), 81.0 (C-3), 52.3 (C-4), 65.6 (C-5), 144.7 (C-6), 35.1 (C-7), 21.1 (C-8), 35.5 (C-9), 25.5 (C-10), 28.7 (C-11), 146.4 (C-12), 134.3 (C-13), 196.9 (C-14), 92.6 (C-15), 14.3 (C-16), 115.6 (C-17), 29.1 (C-18), 17.0 (C-19), 12.6 (C-20), 170.3, 21.1 (5-OAc), 169.2, 21.8 (OAc-15), 166.3 (C-1′), 129.8 (C-4′, 6′), 128.5 (C-3′, 7′), 130.2 (C-2′), 133.3 (C-5′)。以上数据与文献报道[27]基本一致，故鉴定化合物12为大戟因子L3。
4 AChE抑制活性参照文献报道[28]方法测定化合物对AChE的抑制活性。化合物1、2、3、5、6、11和12均用DMSO溶解，制成待测样品（50 μg/mL）。取110 μL磷酸缓冲液（pH=8.0），10 μL待测样品和40 μL AChE（0.02 μg/mL）于96孔板中，30 ℃下温育20 min，之后加入DTNB（2.48 g/L）和碘化硫代丁酰胆碱（1.81 g/L）等体积混合液40 μL，30 min后，405 nm处酶标仪进行检测。阳性对照为他克林（反应终浓度为0.333 μmol/L），阴性对照为DMSO（终浓度为0.1%），实验重复3次。计算化合物对AChE的抑制率[(E-S)/E，E为阴性对照平均吸光度值，S为待测样品平均吸光度值]。结果显示化合物5、11和12对AChE的抑制率分别为17.70%、22.89%和21.22%，具有一定的抑制活性。
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