2017, Vol. 48
引用本文 | doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2017.01.008 |
2. 吉林农业大学中药材学院, 吉林 长春 130118;
3. 中国医学科学院 北京协和医学院药用植物研究所, 北京 100193
2. College of Chinese Medicine Material, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China;
3. Institute of Medicinal Plant Development, Peking Union Medical College and Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100193, China
天山假狼毒Stelleropsis tianschanicaPobed.为瑞香科（Thymelaeaceae）假狼毒属Stelleropsis Pobed.植物，生于海拔1 700~2 000 m的山坡草地，在我国仅新疆昭苏县有分布，国外在吉尔吉斯斯坦也有分布[1]。狼毒类药材始载于《神农本草经》，其后历代本草均有记载，其性味苦平，有逐水祛痰、破疾杀虫之功效[2]。临床上使用的狼毒科属药材十分混乱，伪品较多，正品为瑞香狼毒[3-4]，天山假狼毒也作为狼毒的伪品一直在当地使用。本实验对天山假狼毒进行了化学成分研究，从其地上部位的提取物中分离得到了12个化合物，分别鉴定为kusunokinin（1）、pluviatolide（2）、邻苯二甲酸二丁酯（dibutyl phthalate，3）、邻苯二甲酸二丙酯（dipropyl phtalate，4）、对二苯酚（p-dihydroxybenzene，5）、瑞香酮（daphneolon，6）、2(S)-hydroxy-1-(4-hydroxy phenyl)-5-phenyl-1-pentanone（7）、(2R, 3R)-1, 5-diphenylpentane-2, 3-diol（8）、落叶松树脂醇（lariciresinol，9）、异落叶松树脂醇（isolariciresinol，10）、马台树脂醇（matairesinol，11）、4α, 5βH-guai-9, 7(11)-dien-12, 8-olide-12, 8α-diol（12）。其中5个为木脂素类，3个为二苯基戊醇的衍生物，化合物1~12均为首次从该属植物中分离得到。
1 仪器与材料BRUKER AVANCE Ⅲ 600型核磁共振波谱仪（布鲁克仪器有限公司）；赛默飞世LTQ-Obitrap XL液质联用仪（赛默飞世尔科技有限公司）；BYLABUV-III紫外灯（北京炳洋科技有限公司）；BS223S分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；V-3003K型旋转蒸发仪，SZ-93型循环水真空泵（上海振捷实验设备有限公司）；超声波清洗仪（天津科贝尔光电技术有限公司）；柱色谱用硅胶（青岛海洋化工有限公司），薄层色谱用硅胶G、H、GF254和柱色谱用硅胶（青岛海洋化工有限公司）；Sephadex LH-20凝胶为Pharmacia公司产品，MCI为日本三菱化学公司产品，常规试剂均为分析纯。
天山假狼毒采于新疆昭苏县，经新疆中药民族药研究所贾晓光所长鉴定为天山假狼毒Stelleropsis tianschanica Pobed.。
2 提取与分离天山假狼毒地上部分（5.0 kg）干燥后粉碎过80目筛，药材粉末加10倍量甲醇加热回流提取3次，每次2 h，合并提取液，减压回收溶剂，浓缩后得总浸膏1.042 kg。总浸膏用水分散后，依次用石油醚（60~90 ℃）、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇各萃取3次，萃取液减压浓缩至干。最终得到石油醚部位浸膏235 g、氯仿部位浸膏98 g、醋酸乙酯部位浸膏86 g、正丁醇部位浸膏129 g。氯仿部位浸膏98 g经硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇（1：0→0：1）梯度洗脱，得到11个流分Fr. LD1~LD11。Fr. LD6（10.5 g，氯仿-甲醇10：1洗脱部分）经反复硅胶柱色谱得到化合物1（4.8 mg）、2（3.5 mg）、9（4.3 mg）；Fr. LD7（8.5 g，氯仿-甲醇4：1洗脱部分）经反复硅胶柱色谱分离并重结晶得到化合物10（3.6 mg），母液经反复硅胶柱色谱、凝胶及高效液相色谱分离纯化得到化合物11（3.3 mg）、12（4.1 mg）。醋酸乙酯部位浸膏（86 g）经硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇（1：0→0：1）梯度洗脱，得到15个流分Fr. YD1~YD15，Fr. YD2（4.5 g，氯仿-甲醇10：1洗脱部分）经反复硅胶柱色谱、凝胶及高效液相色谱分离纯化得到化合物3（4.2 mg）、4（4.7 mg）；Fr. YD3（9.3 g，氯仿-甲醇4：1洗脱部分）经反复硅胶柱色谱、反复重结晶得到化合物5（2.6 mg），母液经反复硅胶柱色谱，再结晶得到化合物6（8.3 mg）。剩余母液经凝胶及高效液相色谱分离纯化得到化合物7（4.2 mg）、8（3.4 mg）。
3 结构鉴定化合物1：黄色油状物，ESI-MS m/z: 371 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 6.82 (1H, d, J=1.8 Hz, H-2), 6.63 (1H, dd, J=8.4, 1.8 Hz, H-6), 6.64 (1H, d, J=8.4 Hz, H-5), 6.80 (1H, d, J=8.4 Hz, H-5′), 6.71 (1H, d, J=1.8 Hz, H-2′), 6.59 (1H, dd, J=8.4, 1.8 Hz, H-6′), 5.93 (2H, d, J=4.8 Hz, -OCH2O-), 4.09 (1H, d, J=2.4 Hz, H-9a′), 3.87 (1H, m, H-9b′), 3.86 (3H, s, 3′-OCH3), 3.83 (3H, s, 4′-OCH3)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 130.0 (C-1), 112.1 (C-2), 148.9 (C-3), 147.8 (C-4), 111.1 (C-5), 121.4 (C-6), 40.9 (C-7), 46.3 (C-8), 178.4 (C-9), 131.5 (C-1′), 108.6 (C-2′), 147.7 (C-3′), 146.2 (C-4′), 108.1 (C-5′), 121.2 (C-6′), 34.5 (C-7′), 38.1 (C-8′), 71.0 (C-9′), 55.6 (OCH3), 55.7 (OCH3), 100.9 (-OCH2O-)。经查阅文献报道[5]，将化合物1鉴定为kusunokinin。
化合物2：白色粉末。ESIMS m/z: 393 [M+Na]+。1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 2.56 (1H, m, H-8′), 2.86 (1H, m, H-7a), 2.92 (1H, m, H-7b), 3.00 (1H, m, H-8), 3.94 (2H, d, J=7.8 Hz, H-9′), 4.61 (1H, d, J=6.6 Hz, H-7′), 5.92 (2H, d, J=5.4 Hz, H-10′), 5.96 (2H, d, J=4.8 Hz, H-10), 6.58 (1H, dd, J=8.4, 1.8 Hz, H-6′), 6.61 (1H, d, J=1.8 Hz, H-2′), 6.65 (1H, d, J=8.4 Hz, H-5′), 6.69 (1H, dd, J=8.4, 1.8 Hz, H-6), 6.72 (1H, d, J=1.8 Hz, H-2), 6.75 (1H, d, J=8.4 Hz, H-5)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 131.3 (C-1), 110.1 (C-2), 148.2 (C-3), 147.7 (C-4), 108.3 (C-5), 122.9 (C-6), 35.3 (C-7), 45.2 (C-8), 179.1 (C-9), 101.4 (C-10), 135.5 (C-1′), 106.3 (C-2′), 147.8 (C-3′), 146.4 (C-4′), 108.4 (C-5′), 119.5 (C-6′), 75.6 (C-7′), 43.9 (C-8′), 68.6 (C-9′), 101.1 (C-10′)。经查阅文献报道[6]，将化合物2鉴定为pluviatolide。
化合物3：淡黄色油状物，易溶于氯仿。1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 0.92 (6H, t, J=7.2 Hz, H-11, 11′), 1.40 (4H, m, H-10, 10′), 1.67 (4H, m, H-9, 9′), 4.27 (4H, t, J=6.6 Hz, H-8, 8′), 7.54 (2H, m, H-3, 4), 7.69 (2H, m, H-2, 5)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 167.7 (C-7, 7′), 65.3 (C-8, 8′), 30.4 (C-9, 9′), 18.9 (C-10, 10′), 12.9 (C-11, 11′), 132.3 (C-1, 6), 131.0 (C-2, 5), 128.6 (C-3, 4)。经查阅文献报道[7]，将化合物3鉴定为邻苯二甲酸二丁酯。
化合物4：淡黄色油状物，不溶于水，可溶于乙醇、乙醚。1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 0.94 (6H, t, J=7.2 Hz, H-10, 10′), 1.45 (4H, m, H-9, 9′), 5.33 (4H, t, J=6.6 Hz, H-8, 8′), 6.61 (2H, m, H-3, 4), 7.72 (2H, m, H-2, 5)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 169.3 (C-7, 7′), 72.9 (C-8, 8′), 28.9 (C-9, 9′), 19.5 (C-10, 10′), 133.6 (C-1, 6), 132.4 (C-2, 5), 129.9 (C-3, 4)。经查阅文献报道[8]，将化合物4鉴定为邻苯二甲酸二丙酯。
化合物5：白色粉末，mp 170~171 ℃（氯仿），三氯化铁-铁氰化钾反应阳性，表示含有酚羟基，1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 6.60 (4H, s, H-2, 3, 5, 6)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 150.9 (C-1, 4)、116. 9 (C-2, 3, 5, 6)。经查阅文献报道[9]，将化合物5鉴定为对-二苯酚。
化合物6：白色粉末，C17H16O2，ESI-MS m/z: 253 [M+Na]+；1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 1.83 (2H, m, H-4), 2.71 (2H, m, H-5), 3.08 (2H, m, H-2), 2.17 (1H, m, H-3), 6.82 (2H, d, J=8.4 Hz, H-3′, 5′), 7.14 (1H, m, H-4″), 7.18 (2H, m, H-2″, 6″), 7.20 (2H, m, H-3″, 5″), 7.86 (2H, d, J=8.4 Hz, H-2′, 6′)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 200.0 (C-1), 46.6 (C-2), 38.9 (C-3), 40.3 (C-4), 32.9 (C-5), 130.4 (C-1′), 63.9 (C-4′), 116.2 (C-3′, 5′), 132.0 (C-2′, 6′), 143.4 (C-1″), 128.3 (C-2″, 6″), 129.4 (C-3″, 5″), 126.7 (C-4″)。经查阅文献报道[10]，将化合物6鉴定为瑞香酮。
化合物7：白色粉末，分子式C17H18O3。1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 1.80 (2H, m, H-4), 2.67 (2H, m, H-5), 4.71 (1H, m, H-2), 2.14 (2H, m, H-3), 6.80 (2H, d, J=8.4 Hz, H-3′, 5′), 7.13 (1H, m, H-4″), 7.18 (2H, m, H-2″, 6″), 7.20 (2H, m, H-3″, 5″), 7.84 (1H, d, J=8.4 Hz, H-2′, 6′)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 198.1 (C-1), 79.6 (C-2), 34.6 (C-3), 38.3 (C-4), 30.9 (C-5), 128.5 (C-1′), 130.1 (C-2′, 6′), 114.3 (C-3′, 5′), 161.9 (C-4′), 141.5 (C-1″), 127.4 (C-2″, 6″), 127.5 (C-3″, 5″), 124.8 (C-4″)。经查阅文献报道[11]，将化合物7鉴定为2(S)-hydroxy-1-(4-hydroxyphenyl)-5-phenyl-1-pentanone。
化合物8：白色粉末，分子式为C17H20O2。1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 7.13 (1H, m, H-4′), 7.21 (2H, m, H-2′, 6′), 7.33 (2H, m, H-3′, 5′), 7.19 (1H, m, H-4″), 7.23 (2H, m, H-2″, 6″), 7.35 (2H, m, H-3″, 5″), 2.54 (2H, m, H-1), 4.49 (1H, m, H-2), 4.50 (1H, m, H-3), 2.57 (2H, m, H-4), 2.59 (2H, m, H-5)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 37.1 (C-1), 76.4 (C-2), 78.7 (C-3), 29.3 (C-4), 32.9 (C-5), 144.1 (C-1′), 129.2 (C-3′, 5′), 128.4 (C-2′, 6′), 126.8 (C-4′), 143.7 (C-1″), 129.4 (C-3″, 5″), 128.4 (C-2″, 6″), 129.6 (C-4″)。根据以上数据分析，经查阅文献报道[12]，将化合物8鉴定为(2R, 3R)-1, 5-diphenylpentane-2, 3-diol。
化合物9：白色晶体（甲醇），分子式为C20H24O6。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 2.17 (1H, m, H-8), 2.40 (1H, dd, J=12.6, 11.4 Hz, H-7′a), 2.57 (1H, m, H-8′), 2.81 (1H, dd, J=12.6, 4.8 Hz, H-7′b), 3.45 (1H, overlap, H-9a), 3.54 (1H, dd, J=7.2, 7.8 Hz, H-9′a), 3.64 (1H, m, H-9b), 3.72 (3H, s, 3-OCH3), 3.73 (3H, s, 3′-OCH3), 3.86 (1H, dd, J=6.0, 7.8 Hz, H-9′b), 4.64 (1H, m, H-7), 6.56 (1H, d, J=7.8 Hz, H-6′), 6.65~6.70 (3H, overlap, H-2′, 5′, 6), 6.73 (1H, brs, H-5), 6.81 (1H, brs, H-2)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 134.4 (C-1), 109.6 (C-2), 147.1 (C-3), 144.2 (C-4), 114.7 (C-5), 117.9 (C-6), 81.5 (C-7), 52.2 (C-8), 58.2 (C-9), 131.4 (C-1′), 112.4 (C-2′), 147.1 (C-3′), 145.2 (C-4′), 115.1 (C-5′), 120.3 (C-6′), 31.9 (C-7′), 41.7 (C-8′), 71.5 (C-9′), 55.3, 55.2 (OCH3)。经查阅文献报道[13]，将化合物9鉴定为落叶松树脂醇。
化合物10：淡黄色油状物，分子式C20H24O6。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 6.78 (1H, d, J=7.8 Hz, H-5′), 6.58 (1H, dd, J=7.8, 2.2 Hz, H-6′), 6.54 (1H, d, J=2.2 Hz, H-2′), 6.48 (1H, s, H-5), 6.24 (1H, s, H-2), 3.79 (1H, m, H-7′), 3.78 (3H, s, 3′-OCH3), 3.76 (3H, s, 3-OCH3), 3.72 (1H, m, H-9′a), 3.70 (2H, m, H-9), 3.52 (1H, m, H-9′b), 2.78 (2H, d, J=7.8 Hz, H-7), 2.02 (1H, m, H-8), 1.78 (1H, m, H-8′)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 127.1 (C-1), 111.8 (C-2), 145.5 (C-3), 144.1 (C-4), 116.2 (C-5), 132.6 (C-6), 32.3 (C-7), 38.0 (C-8), 63.5 (C-9), 137.1 (C-1′), 113.2 (C-2′), 147.3 (C-3′), 144.6 (C-4′), 115.2 (C-5′), 121.4 (C-6′), 59.7 (C-9′), 55.6 (3′-OCH3), 55.5 (3-OCH3)。经查阅文献报道[14]，将化合物10鉴定为异落叶松树脂醇。
化合物11：无色固体，分子式为C20H22O6。1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 6.82 (1H, d, J=7.8 Hz, H-5), 6.58 (1H, dd, J=7.8, 1.2 Hz, H-6), 6.60 (1H, s, H-2), 6.78 (1H, d, J=7.8 Hz, H-5′), 6.48 (1H, dd, J=7.8, 1.8 Hz, H-6′), 6.40 (1H, d, J=1.8 Hz, H-2′), 4.18 (1H, dd, J=9.6, 7.2 Hz, H-9′a), 3.88 (1H, dd, J=9.6, 7.2 Hz, H-9′b), 2.96 (1H, dd, J=13.2, 5.4 Hz, H-7a), 2.87 (1H, dd, J=13.2, 7.8 Hz, H-7b), 2.58 (1H, dd, J=13.2, 6.6 Hz, H-7′a), 2.50 (1H, dd, J=13.2, 6.6 Hz, H-7′b), 2.50 (1H, m, H-8′), 3.18 (3H, s, 3-OCH3), 3.19 (3H, s, 3′-OCH3)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 129.5 (C-1), 111.2 (C-2), 146.4 (C-3), 144.2 (C-4), 114.1 (C-5), 121.7 (C-6), 34.3 (C-7), 46.5 (C-8), 178.0 (C-9), 129.2 (C-1′), 111.0 (C-2′), 146.3 (C-3′), 144.1 (C-4′), 114.1 (C-5′), 38.2 (C-7′), 40.9 (C-8′), 71.4 (C-9′), 121.5 (C-6′), 55.5 (3, 3′-OCH3)。经查阅文献报道[15]，将化合物11鉴定为马台树脂醇。
化合物12：无色油状液体。分子式为C20H22O6，1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 1.40 (1H, m, H-2a), 2.13 (1H, m, H-2b), 1.85 (1H, m. H-3a), 1.26 (1H, m, H-3b), 2.27 (1H, m, H-4), 1.97 (1H, ddd, J=3.6, 7.2, 16.8 Hz, H-5), 3.02 (1H, dd, J=1.2, 14.4 Hz, H-6a), 2.48 (1H, dd, J=4.2, 14.4 Hz, H-6b), 5.73 (1H, s, H-9), 1.80 (1H, s, H-13), 1.34 (1H, s, H-14), 0.88 (1H, d, J=7.2 Hz, H-15), 4.28 (1H, s, 1-OH), 5.16 (1H, s, 8-OH)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 72.1 (C-1), 34.4 (C-2), 31.3 (C-3), 36.7 (C-4), 53.3 (C-5), 24.1 (C-6), 151.3 (C-7), 87.2 (C-8), 120.2 (C-9), 150.3 (C-10), 122.1 (C-11), 170.1 (C-12), 7.8 (C-13), 27.4 (C-14), 14.5 (C-15)。经查阅文献报道[16]，将化合物12鉴定为4α, 5βH-guai-9, 7(11)-dien-12, 8-olide-12, 8α-diol。
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