红景天Rhodiolae Crenulatae Radixet Rhizoma系蔷薇目景天科(Crassulaceae)红景天属RhodiolaL.多年生草本或亚灌木植物，被誉为“高原人参”，全世界的红景天属植物有90多种，我国有73种，众多种类的红景天中的主要成分为苯烷基苷类和黄酮类成分^[1-6]。将大花红景天列入《中国药典》2015年版品种，而国内诸多品种的红景天都被列入药用范围内，如具有国家食品药品监督总局批准文号的关于红景天的制剂有高山红景天口服液（品种为高山红景天Rhodiola rosea L.）、复方蔷薇红景天口服液（品种为蔷薇红景天Rhodiola rosea L.）狭叶红景天片[品种为狭叶红景天Rhodiola lirilowii(Regel) Maxim.]和大株红景天片[品种为大株红景天Rhodiola wallichiana(Hook.) S. H. Fu]等，因此有必要对不同品种的红景天的成分进行分析研究。目前，对于红景天的质控指标主要集中在苯烷基苷类，如红景天苷、大花红天素等，《中国药典》2015年版将红景天苷作为大花红景天的指标性成分，未对黄酮类成分作限定要求^[7-11]。研究表明，红景天中还有另外一类很重要的有效成分即黄酮类成分，主要为草质素及其苷类、山柰酚及其苷类及大花红景天素等，其中仅有1篇文献报道从红景天中分离得到山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖(1→3)-β-D-葡萄糖苷（ternatumoside Ⅱ），红景天中黄酮类成分具有抗氧化、抗缺氧、抗补体和抗肿瘤等作用^[12-14]。Ternatumoside Ⅱ、草质素、红景天欧素[草质素-7-O-(3″-β-D-葡萄糖基)-α-L-鼠李糖苷]、红景天宁（草质素-7-O-α-L-鼠李糖苷）和大花红景天素均为红景天中特征性成分，专属性强，其中大花红景天素是一种天然产物中很少存在的黄酮醇与苯丙素结合而成的化合物（大花红景天素与大花红天素为不同类化合物）。故本实验以草质素、红景天欧素、红景天宁、大花红景天素、山柰酚和ternatumoside Ⅱ为指标，建立了同时测定上述6个黄酮类成分的方法，涵盖了红景天药材中绝大部分黄酮类成分，首次对红景天中的ternatumoside Ⅱ、红景天欧素、草质素和大花红景天素4个成分进行了测定，为红景天的质量控制及深入开发利用提供参考。

Waters 1525型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；sartorius CP225D十万分之一电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；ternatumoside Ⅱ（批号20141212）、红景天欧素（批号20141216）、红景天宁（批号20141213）、草质素（批号20150119）、山柰酚（批号20140915）、大花红景天素（批号20150120）均为江苏永健医药科技有限公司自制，质量分数均大于98%，乙腈（色谱纯）；水为纯化水，其余均为分析纯。红景天Rhodiolae Crenulatae Radixet Rhizoma经嘉兴学院医学院王峻副教授鉴定为玫瑰红景天Rhodiola rosea L.、大花红景天Rhodiola crenulata(Hook. f. et Thoms.) S. H. Fu、高山红景天Rhodiola sachalinensisA. Bor.、蔷薇红景天Rhodiola rosea L.（表 1）。

表 1(Table 1)

表 1 样品信息 Table 1 Information of samples 样品 来源 品种 1 亳州药材市场 玫瑰红景天 2 西藏林芝地区八一永久村 大花红景天 3 广西玉林药材市场 大花红景天（带皮） 4 广西玉林药材市场 大花红景天（不带皮） 5 西藏-1 大花红景天 6 西藏-2 大花红景天 7 西藏-3 大花红景天 8 吉林长白山 高山红景天 9 中国食品药品检定研究院 大花红景天 10 中国食品药品检定研究院 高山红景天 11 云南后山地区 蔷薇红景天

表 1 样品信息 Table 1 Information of samples

色谱柱为Kromasil C₁₈柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈（A）-水（B），梯度洗脱，0~10 min，8% A；10~25 min，31% A；25~35 min，45% A；体积流量为1.0 mL/min；柱温为35 ℃；检测波长为382 nm。色谱图见图 1。

取ternatumoside Ⅱ、红景天欧素、红景天宁、草质素、山柰酚和大花红景天素对照品适量，精密称定，加甲醇制成含ternatumoside Ⅱ 15.08 μg/mL、红景天欧素123.20 μg/mL、红景天宁109.54 μg/mL、a-ternatumoside Ⅱ b-红景天欧素c-红景天宁d-草质素e-山柰酚f-大花红景天素 a-ternatumoside Ⅱ b-rhodiosin c-rhodionin d-herbacetin e-kaempferol f-rhodiolin 图 1 混合对照品(A)和红景天药材(B)的HPLC图 Fig.1 HPLC of mixed reference sustances (A) and Rhodiolae Crenulatae Radixet Rhizoma (B)

取ternatumoside Ⅱ、红景天欧素、红景天宁、草质素、山柰酚和大花红景天素对照品适量，精密称定，加甲醇制成含ternatumoside Ⅱ 15.08 μg/mL、红景天欧素123.20 μg/mL、红景天宁109.54 μg/mL、a-ternatumoside Ⅱ b-红景天欧素c-红景天宁d-草质素e-山柰酚f-大花红景天素草质素7.80 μg/mL、山柰酚21.46 μg/mL和大花红景天素6.48 μg/mL的混合对照品溶液。

红景天药材约1 g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入80%乙醇25 mL，称定质量，加热回流1.5 h，放至室温，再称定质量，用80%乙醇补足失质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

精密吸取混合对照品溶液1、2、5、10、15、20 μL，注入高效液相色谱仪，测定。以进样量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，计算回归方程，结果见表 2。

表 2(Table 2)

表 2 化合物的标准曲线方程、相关系数和线性范围 Table 2 Regressive equations, correlation coefficients, and linear ranges of investigated compounds 成分 回归方程 r 线性范围/μg ternatumoside Ⅱ Y=400.62 X+45.09 0.999 8 0.015 08~0.301 60 红景天欧素 Y=998.75 X-7.31 0.999 9 0.123 20~2.464 00 红景天宁 Y=808.21 X-17.263 0.999 8 0.109 50~2.190 80 草质素 Y=399.11 X+12.82 0.999 8 0.007 80~0.156 00 山柰酚 Y=2 621.1 X+20.60 0.999 9 0.021 46~0.429 20 大花红景天素 Y=1 900.8 X+54.81 0.999 8 0.006 48~0.129 60

表 2 化合物的标准曲线方程、相关系数和线性范围 Table 2 Regressive equations, correlation coefficients, and linear ranges of investigated compounds

精密吸取混合对照品溶液10 μL，在“2.1”色谱条件下连续进样6次，测得ternatumoside Ⅱ、红景天欧素、红景天宁、草质素、山柰酚和大花红景天素峰面积的RSD分别为1.06%、0.60%、0.62%、1.21%、0.92%、1.16%。表明仪器的精密度良好。

取同一供试品溶液，在室温下放置，于0、2、4、6、8、10、12 h分别进样，测得ternatumoside Ⅱ、红景天欧素、红景天宁、草质素、山柰酚和大花红景天素峰面积的RSD分别为1.13%、0.82%、0.97%、1.31%、0.79%、1.19%。结果表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

取6份1号样品粉末，按“2.3”项下的方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样，测定ternatumoside Ⅱ、红景天欧素、红景天宁、草质素、山柰酚和大花红景天素的量，计算RSD分别为1.21%、0.84%、0.76%、1.46%、1.07%、1.32%，表明重复性良好。

称取已测定的1号样品粉末6份，每份约0.5 g，精密称定，加入“2.2”项下混合对照品溶液5.0 mL，按“2.3”项下的方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件进样测定，计算ternatumoside Ⅱ、红景天欧素、红景天宁、草质素、山柰酚和大花红景天素的平均回收率分别为98.93%、100.52%、100.24%、98.17%、99.8%、99.4%，RSD分别为1.82%、1.64%、1.71%、1.96%、1.77%、1.98%。

取不同来源红景天药材粉末约1 g，精密称定。按“2.3”项的方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定，计算样品中的ternatumoside Ⅱ、红景天欧素、红景天宁、草质素、山柰酚和大花红景天素的质量分数，结果见表 3。

表 3(Table 3)

表 3 红景天药材中6个黄酮类成分的测定结果 Table 3 Determination of six flavonid constituents in Rhodiolae Crenulatae Radixet Rhizoma 样品 ternatumoside Ⅱ/% 红景天欧素/% 红景天宁/% 草质素/% 山柰酚/% 大花红景天素/% 1 0.018 0.120 0.110 0.007 0.028 0.008 2 0.015 0.133 0.090 0.004 0.046 0.007 3 0.028 0.220 0.240 0.010 0.034 0.023 4 0.014 0.071 0.068 0.006 0.033 0.003 5 0.037 0.200 0.160 0.012 0.036 0.010 6 0.036 0.470 0.330 0.060 0.025 0.040 7 0.009 0.068 0.053 0.007 0.011 0.011 8 0.012 0.067 0.028 0.002 0.011 0.006 9 0.027 0.250 0.190 0.022 0.008 0.011 10 0.012 0.088 0.037 0.004 0.011 0.010 11 0.005 0.100 0.100 0.004 0.013 0.011

表 3 红景天药材中6个黄酮类成分的测定结果 Table 3 Determination of six flavonid constituents in Rhodiolae Crenulatae Radixet Rhizoma

由表 3可知，同一药材中，除3号样品外，红景天欧素量均高于其他5个被测成分，不同品种、不同产地的红景天各被测成分的量差异甚大。6号和9号样品均为同一品种即大花红景天，但是产地为西藏的6号样品各被测成分的量均显著高于中国食品药品检定研究院提供的大花红景天的量，同时也是11个样品中量最高的；另一方面，2、5、6和7号样品品种和产地均相同，但各成分的量差异很大。此外，在本实验的6个被测成分中，9和10号样品同为中国食品药品检定研究院提供的药材，高山红景天被测成分的量明显低于大花红景天，这可能为比较不同品种红景天药理作用提供一定的物质基础。

在提取方式上比较了超声和回流提取，选择提取效率高的加热回流；提取溶剂比较了甲醇和乙醇，选择提取率高的80%乙醇。流动相比较了甲醇-水和乙腈-水，综合分离效果、峰形及洗脱时间，最终选择乙腈-水梯度洗脱。

在确定检测波长时，利用DAD检测器对上述6个成分的在线光谱吸收图进行比对分析，红景天欧素、红景天宁、草质素和大花红景天素在382 nm处均有最大吸收，ternatumoside Ⅱ和山柰酚在364 nm处有最大吸收，另一方面当波长为382 nm时基线比较平稳且干扰峰较少，故综合选定382 nm为检测波长。

红景天作为传统的常用补益类中药，是近年研究开发热点之一，但红景天种类繁多，化学成分差异较大，对药材质控有待全面地完善，本实验选择红景天中研究相对较少的ternatumoside Ⅱ、红景天欧素、红景天宁、草质素、山柰酚和大花红景天素共6个黄酮类成分作为指标，对不同来源及不同种类的红景天药材中上述成分进行了定量研究，专属性和特征性强，基本涵盖了红景天中的黄酮类成分，其中ternatumoside Ⅱ、红景天欧素、草质素和大花红景天素4个成分为首次测定，特别是对天然产物中罕见的黄酮醇与苯丙素结合而成的大花红景天素进行了比较，结果表明不同来源及不同品种的红景天各成分差异显著，为了全面控制红景天药材，将黄酮类成分纳入质量标准进行综合性评价意义甚远。