刘静, 吕晓静, 刘东博, 南淑华, 关斌, 赖志成, 申秀萍 . 新癀片对牛奶致家兔发热模型的解热作用机制研究[J]. 中草药, 2016, 47(22): 4035-4038.
LIU Jing, LV Xiao-jing, LIU Dong-bo, NAN Shu-hua, GUAN Bin, LAI Zhi-cheng, SHEN Xiu-ping . Antipyretic mechanism of Xinhuang Tablet on fever rabbits induced by milk[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2016, 47(22): 4035-4038 .
新癀片对牛奶致家兔发热模型的解热作用机制研究
刘静1
,
吕晓静2,
刘东博1,
南淑华3,
关斌3,
赖志成3,
申秀萍1
1. 天津药物研究院, 天津 300193
;
2. 瑞普(天津)生物药业有限公司, 天津 300300
;
3. 厦门中药厂有限公司, 福建 厦门 361100
摘要:
目的
探讨新癀片对牛奶致家兔发热模型的解热作用机制。
方法
制备牛奶致家兔发热模型，测定给药后1、4 h体温，并取下丘脑测定与体温相关的白细胞介素1α（IL-1α）、IL-β、IL-6、前列腺素E2（PGE2）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、精氨酸加压素（AVP）、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）、Na+，K+-ATP等指标。
结果
新癀片给药1、4 h后均能显著降低家兔体温，显著降低家兔下丘脑IL-1α、IL-1β、IL-6、PGE2、TNF-α、cAMP水平及cAMP/cGMP值，降低Na+，K+-ATP活力；给药后4 h能显著升高AVP水平。与吲哚美辛比较，新癀片给药后4 h能进一步降低家兔下丘脑IL-1β、IL-6、cAMP水平及cAMP/cGMP值，差异显著（P<0.05），进一步降低PGE2水平，给药后1 h能显著降低IL-1α水平。
结论
新癀片的解热作用机制与调节下丘脑中体温调控相关因子IL-1α、IL-1β、IL-6、PGE2、TNF-α、cAMP、cAMP/cGMP、Na+，K+-ATP、AVP有关；其中药成分与吲哚美辛发挥协同作用，从而延长吲哚美辛解热作用时间并且增强吲哚美辛的解热效果。
关键词:
新癀片
解热机制
细胞因子
协同作用
吲哚美辛
白细胞介素
前列腺素E2
肿瘤坏死因子α
精氨酸加压素
环磷酸腺苷
环磷酸鸟苷
Na+,K+-ATP
Antipyretic mechanism of Xinhuang Tablet on fever rabbits induced by milk
LIU Jing1,
LV Xiao-jing2,
LIU Dong-bo1,
NAN Shu-hua3,
GUAN Bin3,
LAI Zhi-cheng3,
SHEN Xiu-ping1
1. Tianjin Institute of Pharmaceutical Research Co., Ltd., Tianjin 300193, China
;
2. Ringpu(Tian Jing) Bio-Technology Co., Ltd, Tianjin 300300, China
;
3. Xiamen Traditional Chinese Medicine Co., Ltd., Xiamen 361100, China
Abstract:
Objective
To investigate the mechanism of Xinhuang Tablet on fever rabbits induced by milk.
Methods
Using the milk-reduced rabbit fever model to research the antipyretic mechanism of Xinhuang Tablet, blood plasma and hypothalamus were collected to measure the indicators related to body temperature, such as IL-1α, IL-1β, IL-6, TNF-α, PGE2, cAMP, cGMP, AVP, and Na+, K+-ATP ase.
Results
In the model of milk-reduced rabbit fever, Xinhuang Tablet can significantly decline the contents of IL-1α, IL-1β, IL-6, PGE2, and TNF-α in the hypothalamus, decline the content of cAMP and ratio of cAMP/cGMP, decline the energy of Na-K-ATPase, and increase the variety of body temperature regulation related factors, such as content of AVP, in order to play a role of antipyretic.
Conclusion
The antipyretic mechanism and adjustment of Xinhuang Tablet were associated with body temperature regulation related factors in the hypothalamus, such as IL-1α, IL-1β, IL-6, PGE2, TNF-α, cAMP, cAMP/cGMP, Na+, K+-ATP ase, and AVP; Its indomethacin can decline the contents of IL-1α, IL-6, PGE2, and TNF-α, increase the content of AVP, decline the energy of Na+, K+-ATP ase which plays the antipyretic effects of non-steroidal anti-inflammatory drugs, and the containing Chinese medicines can further decline the contents of IL-1β, IL-6, PGE2, and cAMP as well as the ratio of cAMP/cGMP in the hypothalamus of rabbits, synergy with indomethacin, in order to extend the indomethacin's antipyretic action time and enhance the indomethacin's strength.
Key words:
Xinhuang Tablets
antipyretic mechanism
cytokine
synergistic effect
indomethacin
interleukins
prostaglandin E2
tumor necrosis factor-α
arginine vasopressin
cyclic adenosine monophosphate
cyclic guanosine monophosphate
Na+, K+-ATP
新癀片是由肿节风、三七、人工牛黄、肖梵天花、珍珠层粉等中药及吲哚美辛组成的复方制剂，其中部分中药如肿节风、牛黄、珍珠层粉等具有清热解毒作用，同时在一定程度上发挥抗炎作用，减弱炎症因子的致炎致热作用，从而有助于发挥解热功效[1]。本实验以牛奶致家兔发热为动物模型，从炎症因子角度进一步研究新癀片的解热作用及其机制，为临床应用提供参考。
1 材料
1.1 药品及试剂 新癀片，淡棕灰色片剂，气香、微腥，味苦，含吲哚美辛2.111%，批号120704，厦门中药厂有限责任公司提供；吲哚美辛，白色粉末，批号101206，厦门中药厂有限责任公司提供；脱脂牛奶，批号20120924，北京三元食品股份有限公司；兔白细胞介素1α（IL-1α）、兔白细胞介素1β（IL-1β）、兔白细胞介素6（IL-6）、兔前列腺素E2（PGE2）、兔肿瘤坏死因子α（TNF-α）、兔精氨酸加压素（AVP）、兔环磷酸腺苷（cAMP）、兔环磷酸鸟苷（cGMP）酶联免疫试剂盒，武汉华美生物工程有限公司；超微量ATP酶（Na+,K+-ATP）测试盒，南京建成生物科技有限公司。
1.2 仪器 MC-246欧姆龙电子体温计，欧姆龙工贸（大连）有限公司；LXJ-IIB低速多管离心机，上海安亭科学仪器厂；Imark 680型酶标仪，Bio-Rad；COLUMBVS洗板机，天津开元生物技术有限公司。
1.3 动物 大耳白家兔，普通级，雄性，66只，体质量2.0～2.2 kg，由北京隆安实验动物养殖中心提供，许可证号SCXK（京）2009-0005，动物合格证号0181704。动物饲养在天津市新药安全评价研究中心实验动物屏障系统小动物家兔（豚鼠）饲养区［合格证SYXK（津）2011-0005］，自由摄食和饮水，温度、湿度、换气次数由中央系统自动控制，设施内温度维持在18～26 ℃，相对湿度维持在40%～70%，通风次数不小于8次/h全新风，光照为12 h明、12 h暗。
2 方法 选用雄性大耳白家兔，家兔适应1周，于适应期第5、6天测量每只家兔肛温，使家兔适应测量体温操作，适应期第7天测量家兔基础体温及体质量，剔除体温过高、过低的家兔。选取家兔60只按照基础体温随机分为10组，其中的5组为给药后1 h取材，另外5组为给药后4 h取材，5组分别为对照组，模型组，新癀片高、低剂量（47.5、23.5 mg/kg，对应吲哚美辛剂量为1.0、0.5 mg/kg）组，吲哚美辛（1 mg/kg）组，每组6只家兔。于实验当天各组家兔测量给药前基础体温后，除对照组外，其余各组家兔sc脱脂牛奶5 mL/kg[2]，造模5 h后（体温明显升高）各组立即ig给予相应药液，对照组及模型组ig给予同体积去离子水。分别与给药后1、4 h测量家兔体温后，用20%乌拉坦麻醉，腹主动脉放血处死，开颅取下丘脑，于−80 ℃冷冻保存备用。分别测量家兔下丘脑中与体温相关的IL-1α、IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2、cAMP、cGMP、AVP、Na+,K+-ATP等指标，操作均按照试剂盒说明书进行。
所有计量数据以x±s表示，应用SPSS 11.5软件进行统计分析，组间比较采用t检验和方差分析。
3 结果
3.1 对牛奶所致发热模型家兔体温的影响 与对照组比较，模型组家兔体温显著升高（P＜0.001）。与模型组比较，吲哚美辛组给药1 h后能显著降低家兔体温（P＜0.05），给药4 h后对家兔体温无显著性影响；新癀片各剂量组给药1 h和4 h后均能显著降低家兔体温（P＜0.05、0.01）。见表 1和2。
表 1(Table 1)
表 1 新癀片给药1 h对牛奶所致发热模型家兔体温的影响 (x±s,n = 6)
Table 1 Effects of Xinhuang Tablet on body temperature of milk-induced fever rabbits after 1 h administration (x±s,n = 6)
| 组别 |
剂量/(mg·kg−1) |
基础体温/℃ |
造模5 h后体温变化值/℃ |
给药后1 h体温变化值/℃ |
| 对照 |
— |
39.50±0.38 |
0.02±0.23 |
0.02±0.33 |
| 模型 |
— |
39.38±0.38 |
0.85±0.26### |
1.28±0.35### |
| 吲哚美辛 |
1.0 |
39.48±0.23 |
0.88±0.47## |
0.82±0.27 |
| 新癀片 |
47.5 (吲哚美辛1.0) |
39.43±0.22 |
0.78±0.37## |
0.73±0.16** |
|
23.5 (吲哚美辛0.5) |
39.33±0.33 |
0.87±0.34### |
0.60±0.41 |
与对照组比较：##P＜0.01 ###P＜0.001；与模型组比较：P＜0.05 **P＜0.01
##P < 0.01 ###P < 0.001 vs control group; P < 0.05 **P < 0.01 vs model group |
|
表 1 新癀片给药1 h对牛奶所致发热模型家兔体温的影响 (x±s,n = 6)
Table 1 Effects of Xinhuang Tablet on body temperature of milk-induced fever rabbits after 1 h administration (x±s,n = 6)
|
表 2(Table 2)
表 2 新癀片给药4 h对牛奶所致发热模型家兔体温的影响 (x±s,n = 6)
Table 2 Effects of Xinhuang Tablet on body temperature of milk-induced fever rabbits after 4 h administration (x±s,n = 6)
| 组别 |
剂量/(mg·kg−1) |
基础体温/℃ |
造模5 h后体温变化值/℃ |
给药后4 h体温变化值/℃ |
| 对照 |
— |
39.52±0.16 |
0.00±0.26 |
0.00±0.21 |
| 模型 |
— |
39.62±0.23 |
1.27±0.22### |
0.83±0.27### |
| 吲哚美辛 |
1.0 |
39.42±0.17 |
1.22±0.40### |
0.70±0.17 |
| 新癀片 |
47.5 (吲哚美辛1.0) |
39.47±0.12 |
1.30±0.32### |
0.28±0.41 |
|
23.5 (吲哚美辛0.5) |
39.60±0.36 |
1.10±0.52## |
0.40±0.30 |
与对照组比较：##P＜0.01 ###P＜0.001；与模型组比较：P＜0.05
##P < 0.01 ###P < 0.001 vs control group; P < 0.05 vs model group |
|
表 2 新癀片给药4 h对牛奶所致发热模型家兔体温的影响 (x±s,n = 6)
Table 2 Effects of Xinhuang Tablet on body temperature of milk-induced fever rabbits after 4 h administration (x±s,n = 6)
|
3.2 对牛奶所致发热模型家兔下丘脑中IL-1α、IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2、cAMP、cGMP、AVP、Na+,K+-ATP水平的影响 结果见表 3～5。与对照组比较，模型组家兔下丘脑IL-1α、IL-1β、IL-6、PGE2、TNF-α等致热因子水平显著升高（P＜0.05、0.01），内源性解热物质AVP的水平显著升高（P＜0.05、0.01），发热介质cAMP水平显著升高（P＜0.05、0.01），cAMP/cGMP值显著升高（P＜0.05、0.01），机体产热相关功能蛋白Na+,K+-ATP活力显著升高（P＜0.05）。
表 3(Table 3)
表 3 新癀片对牛奶所致发热模型家兔下丘脑中IL-1β、IL-1α和IL-6水平的影响 (x±s,n = 6)
Table 3 Effects of Xinhuang Tablet on levels of IL-1β,IL-1α,and IL-6 in hypothalamus of milk-induced fever rabbits (x±s,n = 6)
|
组别 |
剂量/ (mg·kg−1) |
IL-1β/(pg·mL−1) |
|
IL-1α/(pg·mL−1) |
|
IL-6/(pg·mL−1) |
| 给药后1 h |
给药后4 h |
给药后1 h |
给药后4 h |
给药后1 h |
给药后4 h |
| 对照 |
— |
162.455±25.240 |
167.880±39.001 |
|
203.782±59.319 |
121.997±60.701 |
|
18.388±7.940 |
14.132±10.157 |
| 模型 |
— |
235.622±56.341# |
217.056±25.602# |
287.930±28.253# |
248.887±92.035# |
29.233±2.956# |
36.101±4.173## |
| 吲哚美辛 |
1.0 |
171.849±64.157 |
177.046±43.142 |
126.654±12.341*** |
84.368±28.688** |
17.371±8.671 |
23.711±5.880** |
| 新癀片 |
47.5 (吲哚美辛1.0) |
137.920±30.267** |
123.029±18.787***△ |
57.267±30.058***△ |
60.992±17.589** |
9.192±3.148*** |
15.568±4.785***△ |
|
23.5 (吲哚美辛0.5) |
148.810±32.134 |
134.214±34.109*** |
130.464±63.848*** |
131.899±23.753*△ |
20.222±5.186** |
20.116±9.768 |
与对照组比较：#P＜0.05 ##P＜0.01 ###P＜0.001；与模型组比较：P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001，与吲哚美辛组比较：△P＜0.05，下表同
#P < 0.05 ##P < 0.01 ###P < 0.001 vs control group; P < 0.05 **P < 0.01 ***P < 0.001 vs model group; △P < 0.05 vs indomethacin group,following tables are same |
|
表 3 新癀片对牛奶所致发热模型家兔下丘脑中IL-1β、IL-1α和IL-6水平的影响 (x±s,n = 6)
Table 3 Effects of Xinhuang Tablet on levels of IL-1β,IL-1α,and IL-6 in hypothalamus of milk-induced fever rabbits (x±s,n = 6)
|
表 4(Table 4)
表 4 新癀片对牛奶所致发热模型家兔下丘脑中PGE2、TNF-α和AVP水平的影响 (x±s,n = 6)
Table 4 Effects of Xinhuang Tablet on levels of PGE2,TNF-α,and AVP in hypothalamus of milk-induced fever rabbits (x±s,n = 6)
|
组别 |
剂量/(mg·kg−1) |
PGE2/(pg·mL−1) |
|
TNF-α/(pg·mL−1) |
|
AVP/(pg·mL−1) |
| 给药后1 h |
给药后4 h |
给药后1 h |
给药后4 h |
给药后1 h |
给药后4 h |
| 对照 |
— |
39.789±9.620 |
49.515±7.403 |
|
442.913±65.806 |
465.817±91.774 |
|
2.520±1.784 |
2.887±0.521 |
| 模型 |
— |
62.897±8.746## |
77.362±14.758## |
685.305±192.333# |
617.506±111.650# |
5.410±2.370# |
4.963±0.973## |
| 吲哚美辛 |
1.0 |
34.908±19.813 |
42.044±12.207** |
414.360±45.796 |
420.111±41.684** |
5.258±1.145 |
9.586±2.467** |
| 新癀片 |
47.5 (吲哚美辛1.0) |
39.468±13.475** |
20.733±14.023*** |
399.800±27.560 |
448.111±40.569 |
5.614±0.470 |
9.229±3.470 |
|
23.5 (吲哚美辛0.5) |
38.796± 5.121*** |
42.104±22.506 |
416.347±83.120 |
429.706±45.718** |
7.309±2.998 |
8.681±3.002 |
|
表 4 新癀片对牛奶所致发热模型家兔下丘脑中PGE2、TNF-α和AVP水平的影响 (x±s,n = 6)
Table 4 Effects of Xinhuang Tablet on levels of PGE2,TNF-α,and AVP in hypothalamus of milk-induced fever rabbits (x±s,n = 6)
|
表 5(Table 5)
表 5 新癀片对牛奶所致发热模型家兔下丘脑中cAMP、cAMP/cGMP和Na+,K+-ATP水平的影响 (x±s,n = 6)
Table 5 Effects of Xinhuang Tablet on levels of cAMP,cAMP/cGMP,and Na+,K+-ATP in hypothalamus of milk-induced fever rabbits (x±s,n = 6)
|
组别 |
剂量/(mg·kg−1) |
cAMP/(pmol·mL−1) |
|
cAMP/cGMP |
|
Na+,K+-ATP/(μmol·mL−1) |
| 给药后1 h |
给药后4 h |
给药后1 h |
给药后4 h |
给药后1 h |
给药后4 h |
| 对照 |
— |
7.644±3.309 |
7.446±7.224 |
|
26.359±11.399 |
25.620±25.710 |
|
0.107±0.135 |
0.300±0.027 |
| 模型 |
— |
20.530±7.765##△ |
22.848±8.840## |
68.273±23.635## |
77.300±28.202# |
0.339±0.149# |
0.634±0.207# |
| 吲哚美辛 |
1.0 |
17.752±10.206 |
21.844±8.840 |
62.136±37.478 |
82.900±53.804 |
0.215±0.068 |
0.381±0.116 |
| 新癀片 |
47.5 (吲哚美辛1.0) |
8.324±6.429 |
6.791±2.397*△ |
27.777±22.498 |
22.431± 7.899**△ |
0.134±0.061 |
0.320±0.105 |
|
23.5 (吲哚美辛0.5) |
6.873±5.436** |
14.241±4.650 |
22.583±19.111** |
48.172±16.609 |
0.300±0.074 |
0.330±0.151 |
|
表 5 新癀片对牛奶所致发热模型家兔下丘脑中cAMP、cAMP/cGMP和Na+,K+-ATP水平的影响 (x±s,n = 6)
Table 5 Effects of Xinhuang Tablet on levels of cAMP,cAMP/cGMP,and Na+,K+-ATP in hypothalamus of milk-induced fever rabbits (x±s,n = 6)
|
与模型组比较，吲哚美辛给药1、4 h均能显著降低IL-1α、IL-6、PGE2、TNF-α水平（P＜0.05、0.01、0.001），给药后4 h能显著升高AVP水平（P＜0.01），降低Na+,K
+-ATP活力（P＜0.05），具有降低IL-1β、cAMP水平的趋势，但差异不显著，对cGMP、cAMP/cGMP无显著性影响。
与模型组比较，新癀片高剂量组给药1、4 h能显著降低家兔下丘脑IL-1α、IL-1β、IL-6、PGE2、TNF-α、cAMP水平及cAMP/cGMP值（P＜0.05、0.01、0.001），降低Na+,K+-ATP活力（P＜0.05）；新癀片低剂量组给药1、4 h也能显著降低家兔下丘脑IL-1α、IL-1β、IL-6、PGE2、TNF-α水平（P＜0.05、0.01、0.001）；给药4 h能显著降低Na+,K+-ATP活力（P＜0.05）；新癀片各组在给药后4 h均能显著升高AVP水平（P＜0.05）。
与吲哚美辛组比较，新癀片给药后4 h能进一步降低家兔下丘脑IL-1β、IL-6、cAMP水平及cAMP/cGMP值，差异显著（P＜0.05），进一步降低PGE2水平，给药后1 h能显著降低IL-1α水平（P＜0.05）。
4 讨论 结果表明，新癀片的解热作用机制与其所含吲哚美辛发挥非甾体抗炎药物的解热作用有关，降低IL-1α、IL-6、PGE2、TNF-α水平，升高AVP水平，降低Na+,K+-ATP活力有关，同时其中所含中药成分降低家兔下丘脑IL-1β、IL-6、IL-1α、PGE2、cAMP水平及cAMP/cGMP值，与吲哚美辛发挥协同作用，从而增强吲哚美辛解热作用强度及延长解热作用时间。
文献表明[3-8]，外周致热信号进入中枢后，一方面通过以下丘脑视前区（POAH）为代表的正调节介质PGE2、cAMP、促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）、Na+/Ca2+、单胺类等使体温升高，另一方面通过以AVP为代表的负调节介质黑素细胞刺激素（α-MSH）、脂皮质蛋白-1（lipocortin-1）等限制体温上升，正负调节相互作用来决定体温调定点上移水平和发热的幅度。新癀片中的吲哚美辛是典型的非甾体抗炎药，抑制前列腺素所需的环氧酶的合成，进而阻止了PGE2的合成，发挥解热镇痛及抗炎作用。新癀片中的部分中药如肿节风、牛黄、珍珠粉等都具有一定的清热解毒作用，同时在一定程度上发挥抗炎作用，减弱炎症因子的致炎致热作用，从而有助于发挥解热功效。本实验结果显示，吲哚美辛能够通过降低IL-1α、IL-6、PGE2、TNF-α、Na+,K+-ATP，升高AVP水平来发挥解热作用，而新癀片在此基础上还能进一步降低IL-1β、cAMP水平及cAMP/cGMP值，发挥解热作用机制更广泛，这可能是新癀片中的中药成分对吲哚美辛起到了一定减毒增效作用[9]。
参考文献
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2016, Vol. 47
