三七Panax notoginseng (Burk.) F. H. Chen为五加科（Araliaceae）人参属Panax L.重要的药用植物，收载于《中国药典》2015年版^[1]。研究表明，三七皂苷具有降低血压^[2]、抗血栓^[3]、抗心肌缺血^[4]、抗脑缺血^[5]、抗动脉粥样硬化^[6]、抗炎^[7]、治疗心律失常^[8]、镇痛^[9]、保肝^[10]、止血活血、补血^[11]等药理作用。

三七含有多种化学成分，主要含有皂苷、黄酮、挥发油、氨基酸、蛋白质、多糖、三七素等，此外，还含有钾、氮、磷、钴等多种无机金属元素^[12]。皂苷类化合物是三七的主要化学成分，也是三七公认的主要有效成分之一。皂苷主要包括原人参二醇皂苷Rb₁、Rb₂、Rc、Rd、K、L、R₇、F₂，丝竹皂苷IX、X、VII，三七皂苷Fa、Fc、Fe、F1～F4，原人参三醇皂苷Rf、Rg₁、Rg₂、Rh₁、R₁、R₂、R₃、R₄、R₆，新三七皂苷-B₁^[12-13]。三七皂苷Fc是三七特有皂苷，在三七的多个部位存在。Yang等^[14]从三七叶和果中分离得到三七皂苷Fc；魏均娴等^[15]从三七果梗入手，分离得到了11种皂苷，其中包括三七皂苷Fc；与三七花皂苷相关的报道显示，三七花^[16]中已得到三七皂苷Fc。目前据文献报道，三七皂苷Fc具有明显的抑制血小板凝聚、改善心肌缺血、心肌保护等作用，可用于防治心肌缺血、心肌梗死等各种血栓性疾病^[17-18]。王峥涛^[19]首次阐明三七皂苷是通过作用于血小板受体P2Y12而调控血小板聚集而发挥止血活血作用，对三七皂苷Fc、Ft₁、Fe、R₁和人参皂苷Rg₁、Rg₂、Rg₃、Rd、Re、Rh₂及原人参萜二醇进行了血小板聚集功能筛选，发现三七皂苷Fc抑制活性最强。研究表明^[17-23]，三七皂苷Fc通过脱糖代谢产生的次级苷发挥活血作用，三七皂苷Fc口服给药可以显著降低模型动物心肌梗死面积和对心肌缺血有明显的改善作用。

为了寻找三七皂苷Fc所在的廉价资源，研制开发防治心肌缺血、心肌梗塞等血栓性疾病的创新药物，本实验采用HPLC方法，对文山产三七不同部位中三七皂苷Fc的量进行了测定，为三七皂苷Fc制备的原料选择和综合开发利用提供科学依据。

L-2200高效液相色谱仪，日本Hitachi集团；XWK-34空气压缩机，天津华生分析仪器有限公司；BS124S型分析天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司；数控超声波清洗器KQ3200DB，昆山市超声仪器有限公司。乙醇（分析纯），天津市永大化学试剂有限公司；甲醇（色谱纯），天津市康科德科技有限公司；二次蒸馏水，实验室自制。

样品（批号PN20160320）购自文山南药三七产业有限公司，经沈阳药科大学赵余庆教授鉴定为三七Panax notoginseng (Burk.) F. H. Chen的茎、叶、花、果实、果梗和根；三七皂苷Fc对照品（实验室自制，质量分数大于99%）。

色谱柱Promosil C₁₈（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为甲醇-水（65:35）；柱温35 ℃；体积流量1.0 mL/min；检测波长203 nm；进样体积10μL。

精密称定1.0 mg对照品三七皂苷Fc，置于1.0 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成含1 mg/mL的三七皂苷Fc对照品溶液。

先将三七茎、叶、花、果实、果梗和根粉碎，精密称定各2.00 g，分别置于100 mL锥形瓶中，加入70%乙醇20 mL热回流提取3次，每次30 min，合并提取液，减压回收乙醇并浓缩至一定浓度（生药0.4 g/mL），离心，上清液作为上柱供试液。

将上柱供试液直接转入HPD100吸附树脂柱（内径15 mm，长170 mm）内，先以水50 mL洗脱，弃去水液，继用70%乙醇50 mL洗脱（体积流量2 mL/min）^[24]，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣用甲醇定容至4 mL。精密吸取1 mL，置于10.0 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。

精密吸取“2.2”项中对照品溶液0.5 mL于1 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为0.5 mg/mL的对照品溶液，同法制备质量浓度为0.1、0.01、0.005 mg/mL的标准系列溶液，在“2.1”项色谱条件下测定质量浓度为1、0.5、0.1、0.01、0.005 mg/mL的系列对照品溶液，记录色谱图。以对照品质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，进行线性回归计算，线性回归方程Y＝2×10⁶X＋20 871，R²＝0.999 1，结果表明三七皂苷Fc在质量浓度为0.005～1.000 mg/mL内线性关系良好。

分别取同一对照品溶液，在“2.1”项色谱条件下连续进样6次，记录峰面积，计算得RSD为1.87%，表明仪器精密度良好。

取同一供试品溶液，室温下放置，分别在0、2、4、6、8、24 h后进样分析，按“2.1”项色谱条件进行测定，记录峰面积，得三七茎、叶、花、果实、果梗和根中Fc的峰面积RSD值分别为1.96%、1.94%、1.85%、1.92%、1.98%和1.88%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

取同一批三七茎、叶、花、果实、果梗和根各6份，按“2.3”项下操作，分别平行制备6份供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样分析，峰面积的RSD值分别为1.94%、1.83%、1.96%、1.86%、1.91%和1.82%，表明方法重复性良好。

取已测定的同一批供试品溶液各9份，精密称定，每3份为一组。分别单独加入适量的对照品溶液，每次进样10 μL进行测定。计算得三七茎、叶、花、果实、果梗和根中三七皂苷Fc的平均回收率分别为98.86%、97.43%、101.03%、99.35%、99.13%和98.68%、RSD值分别为1.90%、1.87%、1.80%、1.82%、1.94%和1.88%。

取样品按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件测定，色谱图见图 1。采用外标一点法计算，测定样品中三七皂苷Fc的量，在文山产三七茎、叶、花、果实、果梗和根中三七皂苷Fc的质量分数分别为0.07%、1.58%、2.13%、0.39%、0.72%和0.02%。

图 1 三七不同部位的HPLC图 Fig.1 HPLC of different parts of P.notoginseng

随着三七研究的进展，三七皂苷Fc良好的抑制血小板凝聚、改善心肌缺血、保护心肌、防治心肌梗死等作用开始得到了研究和关注，因此，对三七皂苷Fc的进一步研究与开发需要大量的样品和制备原料。王峥涛^[19]研究发现三七皂苷Fc通过脱糖代谢产生的次级苷发挥活性作用，但目前体内代谢研究还不明确，需进一步对三七皂苷Fc的时-效、构-效、组-效关系及其体内代谢测相关性进行研究，这也需要大量的三七皂苷Fc样品。目前，三七皂苷Fc相关的文献中，未见对三七茎、叶、花、果实、果梗和根中三七皂苷Fc量的对比分析。因此，在三七不同的部位中检测三七皂苷Fc的量，为三七皂苷Fc制备分离条件的优选提供了依据。

云南文山是三七的主产区，也是三七的道地产区。文山产三七具有皂苷量高、多糖量高、低农药残留量等优越品质，被广泛使用，故本实验采用文山产三七作为实验药材。

本研究表明，三七皂苷Fc在文山产三七叶和花中量较高，其中三七叶和花资源较为丰富，三七叶价格低廉，可作为获取三七皂苷Fc的有效资源进行综合开发和利用。本实验采用的超声提取法提取三七皂苷Fc与水提煎煮法的提取率无显著性差异，同时缩短了提取时间，这为三七皂苷Fc的分析检测提供了快速简便的处理方法。