白芷Angelicae Dahuricae Radix为伞形科（Umbelliferae）植物白芷Angelica dahurica (Fisch. ex Hoffm.) Benth. et Hook. f.或杭白芷Angelica dahurica (Fisch. ex Hoffm.) Benth. et Hook. f. var. formosana (Boiss.) Shan et Yuan的干燥根^[1]。安徽亳州是白芷的主要种植基地，2004年以来，亳州年产白芷药材达4 000 t以上，其种植历史悠久，质量优、产量大。白芷配方颗粒是以白芷药材为原料，经加工炮制、提取、浓缩、干燥、制粒而成^[2]。本研究建立了白芷药材-饮片-提取物及配方颗粒的HPLC特征图谱，对其相关性进行评价，为白芷配方颗粒质量控制提供借鉴。

1 仪器与材料

YP1002N型电子天平、FA2104SN型电子天平，上海精密科学仪器有限公司；Agilent 1200型高效液相色谱仪，美国安捷伦公司；HH型数显恒温水浴锅，江苏省金坛市金城国胜实验仪器厂；岛津UV1700紫外分光光度计，日本岛津仪器科技有限公司；HU10260B型超声波清洗器，天津恒奥科技发展有限公司。

10批白芷药材分别于2013年8-12月收集于亳州谯城区不同乡镇的白芷种植基地，经安徽中医药大学金传山教授鉴定为伞形科当归属植物白芷Angelica dahurica (Fisch. ex Hoffm.) Benth. et Hook. f.的干燥根，由济人药业配方颗粒工艺研究室制成同批号白芷饮片、提取物干膏粉、配方颗粒，编号及药材具体来源见表 1。

对照品欧前胡素（批号110826-201415，质量分数99.7%）、异欧前胡素（批号110827-201109，质量分数99.6%），中国食品药品检定研究院；乙醇、甲醇，分析纯，郑州派尼化学试剂厂；甲醇，色谱纯，郑州派尼化学试剂厂；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果 2.1 色谱条件与系统适应性^[1]

色谱柱为Agilent HC-C₁₈柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水（60:40）；检测波长300 nm；体积流量1.0 mL/min；柱温30 ℃；进样量20 μL；理论板数按欧前胡素峰计算不低于3 000。

2.2 对照品溶液制备

精密称取欧前胡素对照品5.0 mg置于50 mL量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，摇匀，精密量取1 mL置10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得10 μg/mL的欧前胡素对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备

称取白芷药材、饮片、提取物及配方颗粒粉末各0.4 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇45 mL，超声处理（功率300 W，频率50 kHz）1 h，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 样品定量测定

分别取对照品溶液、供试品溶液20 μL，按“2.1”项下的色谱条件测定，药材A1～A10中欧前胡素分别为0.189%、0.184%、0.226%、0.225%、0.258%、0.331%、0.157%、0.255%、0.170%、0.185%（n=2），均值为0.218%；饮片B1～B10中欧前胡素分别为0.181%、0.176%、0.127%、0.201%、0.180%、0.219%、0.087%、0.223%、0.140%、0.145%（n=2），均值为0.168%；提取物C1～C10中欧前胡素分别为0.423%、0.345%、0.584%、0.524%、0.608%、0.568%、0.303%、0.531%、0.352%、0.359%（n=2），均值为0.417%；配方颗粒D1～D10中欧前胡素分别为0.369%、0.320%、0.540%、0.469%、0.691%、0.559%、0.342%、0.532%、0.460%、0.348%（n=2），均值为0.426%。结果显示10批白芷药材中欧前胡素质量分数在0.157%～0.331%，均大于0.080%，符合《中国药典》2015年版的要求；10批白芷饮片中欧前胡素质量分数在0.087%～0.223%，表明由药材加工成饮片会有少量的香豆素类成分的丢失；饮片经溶剂提取浓缩干燥，得提取物膏粉，10批提取物中欧前胡素质量分数平均值为0.417%，10批配方颗粒欧前胡素质量分数平均值为0.426%，表明在现代制粒条件下，提取物到配方颗粒的制备过程对欧前胡素质量分数无明显影响；但从饮片加工成提取物时，存在欧前胡素转移率不高的现象，原因有待进一步研究。

2.5 白芷药材-饮片-提取物及配方颗粒特征图谱的建立 2.5.1 色谱条件

色谱柱为Agilent HC-C₁₈柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-水，梯度洗脱：0～50 min，5%～65%乙腈；50～70 min，65%～95%乙腈；体积流量1.0 mL/min；柱温25 ℃；检测波长320 nm；进样量10 μL；分析时间100 min。

2.5.2 对照品溶液的制备

分别取欧前胡素、异欧前胡素对照品2 mg，分别置于5 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。

2.5.3 供试品溶液的制备

取白芷药材、饮片、提取物及配方颗粒粉末各0.5 g，精密称定，置锥形瓶中，分别精密加入甲醇溶剂25 mL，回流提取0.5 h，滤过，蒸干，加甲醇溶解并定容到10 mL，分别用微孔滤膜（孔径0.45 μm）滤过，滤液作为供试品溶液。

2.5.4 定量测定

分别取对照品溶液、供试品溶液10 μL，按“2.5.1”项下的色谱条件测定，记录100 min色谱图，见图 1～5。

2.6 方法学考察 2.6.1 精密度试验

取“2.5.3”项下同一供试品（编号A1）溶液，连续进样6次，考察进样精密度，结果各共有峰保留时间的RSD＜2.1%，各共有峰峰面积的RSD＜3.0%，表明仪器精密度良好。

2.6.2 重复性试验

取同批次药材（编号A1），按“2.5.3”项方法分别制备6份供试品溶液，平行测定，结果各共有峰保留时间的RSD＜2.4%，各共有峰峰面积的RSD＜3.0%，表明方法重复性良好。

2.6.3 稳定性试验

取“2.5.3”项下相同供试品溶液，分别在0、3、6、9、24、48 h进样测定。结果各共有峰保留时间的RSD＜2.3%，各共有峰峰面积的RSD＜3.0%，表明供试品溶液在48 h内稳定性良好。

2.7 共有峰的标定

将各批配方颗粒的HPLC特征图谱数据导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件”（2004A版），选择时间窗宽度为0.10，平均数法生成对照图谱，对色谱图进行多点校正后，自动匹配，生成图谱，经比较分析后确定10个共有峰。同法采集白芷药材、饮片和提取物的特征图谱，发现提取物、药材、饮片均有10个共有峰。与欧前胡素、异欧前胡素对照品色谱图进行比对，确认配方颗粒样品图中6号峰为欧前胡素，8号峰为异欧前胡素。对照品色谱图见图 1，白芷药材、饮片、提取物和配方颗粒对照特征图谱见图 6。由图 6可见，1～10号峰是药材、饮片、提取物和配方颗粒的共有峰。各图谱的相似度见表 2。结果显示，10批药材特征图谱与对照特征图谱的相似度在0.911～0.968；饮片在0.894～0.968；提取物在0.941～0.994；配方颗粒在0.953～0.993。结果提示，药材、饮片、提取物和配方颗粒整体具有相似性。

2.8 相关性分析

从整体上看，白芷药材、饮片、提取物及配方颗粒HPLC特征图谱的1～10号峰是药材、饮片、提取物和配方颗粒的共有峰，见图 6。结果显示，S1～S10批次白芷药材、饮片、提取物、配方颗粒特征图谱相似度分别在0.916～0.963、0.930～0.967、0.911～0.988、0.968～0.991、0.894～0.990、0.964～0.984、0.956～0.990、0.962～0.983、0.926～0.953、0.966～0.994，其化学成分相关性较好。将白芷药材、饮片、提取物、配方颗粒的特征图谱进行重叠比较，白芷药材中主要色谱峰在饮片、提取物及配方颗粒的色谱图中均有体现，而饮片、提取物及配方颗粒的主要色谱峰也能在药材的图谱中找到追溯。将特征图谱用于中药配方颗粒全过程监控，可以反映生产过程各环节的量质传递变化规律^[3]。

3 讨论

欧前胡素、异欧前胡素是白芷药材中已知的主要有效成分，也是评价药材质量的主要指标成分^[4]，但这2种香豆素类成分在水中溶解度小，水提取有效成分转移率低。本实验采用了醇提加水提的白芷配方颗粒生产工艺：加10倍量60%乙醇，回流提取2.5 h，药渣再加9倍量水，提取1.5 h。按此法制得配方颗粒，较单一用水提取较大限度地提高欧前胡素和异欧前胡素的提取率，使白芷配方颗粒保留了原料中的主要活性成分群。

对不同提取溶剂及热回流、超声不同提取方法进行考察，从提取的全面性、稳定性、操作便捷性等方面考察，选择甲醇为白芷的提取溶剂，回流提取为白芷的提取方法。选择料液比、提取时间优化白芷配方颗粒特征图谱的提取工艺，优化所得的白芷加热回流最佳工艺为料液比25 mL/g，加热回流提取0.5 h。

本实验对色谱条件中的流动相体系进行考察，考察了甲醇-水二元梯度洗脱^[5]，乙腈-0.5%磷酸水溶液二元梯度洗脱^[6]，并对上述洗脱条件进行调整，结果表明以乙腈-水为流动相、梯度洗脱，所得色谱峰有10个明显的主峰，峰形较好，峰分离理想。