2016, Vol. 47
引用本文 | doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.15.005 |
2. 吉林农业大学中药材学院, 吉林 长春 130118
2. College of Chinese Medicinal Materials, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China
传统中药白芷Angelicae Dahuricae Radix系伞形科（Umbelliferae）植物杭白芷的干燥根。其物种的拉丁学名，《中国药典》1977[1] 至2015年版[2]记载为Angeliea dahurica (Fisch. ex Hoffm.) Benth. et Hook. f. var. formosana (Boiss.) Shan et Yuan。袁昌齐[3]于20世纪70年代对白芷的药材和原植物进行了整理、鉴定与合并，认为白芷的原植物主要来源于当归属的白芷及杭白芷。1983年在《中国当归属（Angelica L.）和山芹属（Ostericum Hoffm.）植物的分类研究》中修订为杭白芷和祁白芷2个新栽培变种，杭白芷原植物的拉丁学名定为Angelica dahurica (Fisch. ex Hoffm.) Benth. et Hook. f. ex Franch. et Sav. cv. Hangbaizhi（Angelica dahurica cv. Hangbaizhi），此与《中国植物志》[4]中的拉丁学名相同。
白芷始载于《神农本草经》，列为中品，药用历史悠久，其应用以明代及明代以前最为广泛，功效有祛风除湿、行气止痛、止血、消痈散结、托毒排脓、生肌止痛等，清代以后白芷的应用范围逐渐缩小，其中止血、解蛇毒等功能已不广泛使用。《本草品汇精要》记述白芷“道地，泽州，吴地尤胜”[5]。可见杭州自明代就是白芷的道地产区之一，至今已有千余年的历史。
中药物质基础研究是中药继承、发展、创新的关键科学问题[6]。在常用中药白芷类药材物质基础系统性研究中[7-11]，本课题组报道了从杭白芷70%乙醇水提取物的环己烷部位分离鉴定了5-(3″-羟基- 3″-甲基丁基)-8-羟基呋喃香豆素 [5-(3″-hydroxy- 3″-methylbutyl)-8-hydroxyfuranocoumarin]、水合异白当归素-3″-乙醚（isobyakangelicin hydrate-3″-ethyl ether）和结合短或长链疏水基团的杭白芷香豆素（andafocoumarin）A～J[12]。本研究从杭白芷70%乙醇水提取物的醋酸乙酯部位分离鉴定了42个化合物，其中的22个经与从兴安白芷得到的对照品的理化常数、MS和NMR数据[13]比较，分别鉴定为欧前胡素（imperatorin，1）、珊瑚菜内酯（phellopterin，2）、独活属醇（heraclenol，4）、异欧前胡素（isoimperatorin，6）、白当归素（byakangelicin，7）、补骨脂素（psoralen，8）、香柑内酯（bergapten，9）、异栓翅芹烯醇（isogosferol，10）、5-羟基-8-甲氧基补骨脂素（5-hydroxy-8-methoxypsoralen，14）、栓翅芹烯醇（pabulenol，16）、白当归素乙醚（byakangelicin ethoxide，17）、异白当归脑（isobyakangelicol，18）、伞形花内酯（umbelliferone，19）、花椒毒酚（xanthotoxol，20）、水合氧化前胡素（oxypeucedanin hydrate，24）、牧草栓翅芹酮（pabularinone，27）、异氧化前胡内酯（isooxypeucedanin，29）、反式阿魏酸（trans-ferulic acid，31）、香草酸（vanillic acid，32）、异茴芹素（isopimpinellin，35）、花椒毒素（xanthotoxin，36）和印度榅桲素（marmesin，41）。其余的成分鉴定为佛手酚（bergaptol，3）、镰叶芹二醇（falcarindiol，5）、日本当归醇A（japoangelol A，11）、白术内酰胺（atractylenolactam，12）、二氢欧山芹醇当归酸酯（columbianadin，13）、(8E)-1,8-十七碳二烯-4,6-二炔-3,10-二醇 [(8E)-1,8-heptadecadiene-4,6-diyne- 3,10-diol，15]、欧芹酚甲醚（osthole，21）、别欧前胡素（alloimperatorin，22）、5-(2-乙酰氧基-3-羟基- 3-甲基丁氧基) 补骨脂素 [5-(2-acetoxy-3-hydroxy- 3-methylbutoxy) psoralen，23]、氧化前胡素乙醚（oxypeucedanin ethanolate，25）、别异欧前胡素（alloisoimperatorin，26）、氧化别欧前胡素（oxyalloimperatorin，28）、腺嘌呤（adenine，30）、2-乙氧基-2-对羟基苯基乙醇 [2-ethoxy-2-(4- hydroxyl-phenyl)-ethanol，33]、栓质花椒素（suberosin，34）、尤劳帕替醇（ulopterol，37）、2,4-二羟基苯甲酸甲酯（2,4-dihydroxybenzoic acid methylate，38）、滨蒿内酯（scoparone，39）、东印度缎木内酯醇（swietenol，40）和5-羟甲基糠醛（5-hydroxymethylfurfural，42）。除化合物1、3、6、7、10、13、14、16、21、24和26外，其余化合物均为首次从杭白芷中分离得到。
1 仪器与试剂Bruker AV Ⅲ 400型核磁共振波谱仪（Bruker BioSpin AG Facilities，Fllanden，Switzerland）；Finnigan TRACE 2000 GC-MS质谱仪（EI-MS，Thermo Finnigan，San Jose，CA，美国）；MDS SCIEX API QSTAR型质谱仪（ESI-TOF-MS，Applied Biosystems/MDS Sciex.，Foster City，CA，美国）；LC 3000半制备型高效液相色谱（SP-HPLC）仪系统（北京创新通恒科技有限公司），配置P3050二元泵，CXTH-3000色谱工作站；中压液相色谱柱（2.6 cm×46 cm，北京元宝山色谱科技有限公司）；柱色谱硅胶（200～300目，青岛海洋化工厂产品）；Sephadex LH-20为Pharmacia公司产品；MCI-gel CHP 20（75～150 μm）为日本三菱化学产品；GF254薄层色谱（TLC）硅胶板分别为青岛海洋化工厂和Merck公司（Darmstadt，德国）产品。分析纯乙醇、甲醇、醋酸乙酯、三氯甲烷、丙酮、环己烷等为北京化工厂产品。
杭白芷药材于2012年8月采自杭白芷的道地产地浙江省磐安县深泽乡仰头村，经北京大学药学院杨秀伟教授鉴定为Angelica dahurica cv. Hangbaizhi的根，凭证标本（HBZ201208）存放在北京大学天然药物及仿生药物国家重点实验室。
2 提取与分离杭白芷干燥根粉末7.5 kg加入3倍体积的70%乙醇水溶液回流提取5次，第1次提取2 h，第2～5次每次提取1 h，滤过，合并滤液，减压回收有机溶剂，得浸膏1 093.5g。浸膏加入适量的水溶解分散，依次用2倍体积的环己烷、醋酸乙酯、正丁醇萃取，减压回收溶剂，得到环己烷萃取物124.37 g、醋酸乙酯萃取物51.4 g、正丁醇萃取物209.67 g。
取醋酸乙酯萃取物（51.4 g）与硅胶按1∶1质量比混合均匀后，自然风干经硅胶柱色谱，环己烷-醋酸乙酯（10∶1→1∶1）梯度洗脱，得到10个流分（Fr. 1～10）。Fr. 1（3 g）经硅胶柱色谱，环己烷-丙酮（10∶1）等度洗脱，得到化合物1（1.1 g）、2（1.8 g）、3（5 mg）。Fr. 2（6.4 g）经硅胶柱色谱，环己烷-醋酸乙酯（20∶1→5∶1）梯度洗脱，再经Sephadex LH-20凝胶柱纯化（三氯甲烷-甲醇1∶1），得到化合物4（25 mg）、5（1.5 g）、6（1.1 g）。Fr. 3（4 g）经硅胶柱色谱，三氯甲烷-甲醇（20∶1）洗脱，得到6个流分Fr. 3-1～3-6。其中Fr. 3-2（1 g）经制备HPLC，乙腈-水（30∶70）洗脱，得到化合物7（500 mg，tR＝33 min）、8（7 mg，tR＝37 min）、9（13 mg，tR＝44 min）、10（3 mg，tR＝55 min）。Fr. 3-3（350 mg）依次经Sephadex LH-20凝胶、硅胶（三氯甲烷-甲醇30∶1）柱色谱，得到化合物11（5 mg）、12（4 mg）、13（6 mg）。Fr. 3-4（500 mg）经MCI柱色谱（甲醇-水40∶60）除色素，Seph adex LH-20凝胶柱色谱（三氯甲烷-甲醇1∶1）反复纯化，得到化合物14（7 mg）、15（3 mg）。Fr. 3-5经Sephadex LH-20凝胶柱（三氯甲烷-甲醇1∶1）色谱，得到化合物16（4 mg）。Fr. 4（1 g）经硅胶柱色谱，三氯甲烷-醋酸乙酯（30∶1）洗脱，得到化合物17（3 mg）、18（5 mg）、19（15 mg）、20（98 mg）、21（5 mg）、22（8 mg）。Fr. 5（600 mg）依次经Sephadex LH-20凝胶、硅胶（环己烷-丙酮5∶1）柱色谱，得到化合物23（45 mg）、24（3 mg）、25（3 mg）、26（6 mg）。Fr. 6（1.2 g）经硅胶柱色谱，三氯甲烷-甲醇（50∶1→3∶1）梯度洗脱，得到3个流分，Fr. 6-1～6-3。Fr. 6-2（300 mg）经Sephadex LH-20凝胶柱色谱反复纯化，得到化合物27（5 mg）、28（5 mg）、29（5 mg）。Fr. 6-3（200 mg）经制备HPLC，乙腈-水（24∶76）洗脱，得到化合物30（5 mg，tR＝6 min）、31（500 mg，tR＝15 min）、32（3 mg，tR＝22 min）、33（15 mg，tR＝25 min）。Fr. 7（300 mg）依次经硅胶柱色谱及Sephadex LH-20纯化，得到化合物34（4 m g）、35（3 mg）、36（5 mg）。Fr. 8（100 mg）经制备HPLC，乙腈-水（22∶78）洗脱，得到化合物37（3 mg，tR＝50 min）、38（25 mg，tR＝66 min）、39（5 mg，tR＝100 min）。Fr. 9（150 mg）经硅胶柱色谱，三氯甲烷-甲醇（7∶1）洗脱，得到化合物40（8 mg）、41（5 mg）、42（8 mg）。
3 结构鉴定化合物3：无色针晶（醋酸乙酯）；mp 275～278 ℃；EI-MS m/z: 202 [M]+。1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ: 11.31 (1H,s,5-OH),8.26 (1H,d,J = 9.8 Hz,H-4),7.91 (1H,d,J = 2.3 Hz,H-2′),7.20 (1H,d,J = 2.3 Hz,H-3′),7.16 (1H,s,H-8),6.27 (1H,d,J = 9.8 Hz,H-3)。NMR数据与文献报道一致[14]，由此鉴定化合物3为佛手酚。
化合物5：淡黄色油状物；EI-MS m/z: 260 [M]+。1H-NMR (400 MHz,CDCl3) δ: 5.89 (1H,ddd,J = 17.0,10.1,5.4 Hz,H-2),5.58～5.54 (1H,m,H-10),5.48 (1H,d,J = 8.2 Hz,H-9),5.41 (1H,d,J = 17.1 Hz,H-1b),5.20 (1H,d,J = 10.1 Hz,H-1a),5.15 (1H,d,J = 8.2 Hz,H-8),4.89 (1H,d,J = 5.4 Hz,H-3),2.05 (2H,q,J = 7.4 Hz,H-11a,11b),1.30～1.39 (2H,m,H-12a,12b),1.20～1.30 (8H,m,H-13～16),0.84 (3H,t,J = 6.8 Hz,H-17)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3) δ: 135.9 (C-2),134.2 (C-10),127.8 (C-9),117.2 (C-1),79.8 (C-4),78.4 (C-7),70.2 (C-5),68.7 (C-6),63.2 (C-3),58.4 (C-8),31.8 (C-15),29.3 (C-12),29.2 (C-13),29.1 (C-14),27.7 (C-11),22.6 (C-16),14.1 (C-17)。NMR数据与文献报道一致[15]，由此鉴定化合物5为镰叶芹二醇。
化合物11：淡黄色油状物；ESI-MS m/z: 577.6 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz,CDCl3) δ: 8.12 (1H,d,J = 9.8 Hz,H-4),7.64 (1H,d,J = 2.3 Hz,H-2′),7.00 (1H,d,J = 2.3 Hz,H-3′),6.28 (1H,d,J = 9.8 Hz,H-3),5.92 (1H,ddd,J = 17.0,10.2,5.3 Hz,H-2′′′),5.46 (1H,dd,J = 10.5,8.1 Hz,H-10′′′),5.44 (1H,d,J = 17.0 Hz,H-1′′′b),5.41 (1H,dd,J = 7.1,10.5 Hz,H-9′′′),5.23 (1H,d,J = 10.1 Hz,H-1′′′a),5.15 (1H,d,J = 7.1 Hz,H-8′′′),4.91 (1H,d,J = 5.3 Hz,H-3′′′),4.59 (1H,dd,J = 10.3,3.0 Hz,H-1″b),4.26 (1H,dd,J = 10.3,8.3 Hz,H-1″a),4.18 (3H,s,5-OCH3),3.97 (1H,dd,J = 8.3,3.0 Hz,H-2″),2.06 (2H,m,H-11′′′),1.38 (3H,s,3″-CH3),1.36 (2H,m,H-12″),1.31 (3H,s,3″-CH3),1.25～1.27 (8H,m,H-13′′′～16′′′),0.87 (3H,t,J = 6.8 Hz,H-17′′′)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3) δ: 160.5 (C-2),150.5 (C-7),145.4 (C-2′),144.8 (C-5),144.1 (C-8a),139.6 (C-4),136.1 (C-2′′′),132.3 (C-10′′′),128.0 (C-9′′′),127.4 (C-8),117.3 (C-1′′′),114.9 (C-6),113.0 (C-3),107.8 (C-4a),105.3 (C-3′),80.6 (C-7′′′),78.7 (C-3″),78.1 (C-4′′′),76.1 (C-2″),75.7 (C-1″),70.7 (C-5′′′),68.7 (C-6 ′′′),63.6 (C-3′′′),61.0 (5-OCH3),59.1 (C-8′′′),31.9 (C-15′′′),29.4 (C-13′′′),29.3 (C-12′′′),29.1 (C-14′′′),28.1 (C-11′′′),23.2 (3″-CH3),22.8 (C-16′′′),22.3 (3″-CH3),14.2 (C-17′′′)。HMBC谱中，H-8′′′ (δH 5.15) 与C-3″ (δC 78.7) 相关，表明该化合物由镰叶芹二醇通过C-8′′′上的羟基与香豆素C-3″上的羟基脱水缩合而成。NMR数据与文献报道一致[16]，由此鉴定化合物11为日本当归醇A。
化合物12：白色粉末（甲醇）；mp 120～123 ℃；ESI-MS m/z: 230.2 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz,CDCl3) δ: 7.50 (1H,s,N-H),4.63 (1H,brs,H-15a),4.89 (1H,brs,H-15b),5.45 (1H,s,H-9),2.63 (1H,dd,J = 3.8,16.4 Hz,Hb-6),2.46 (1H,d,J = 13.4 Hz,H-6a),2.36 (1H,m,H-3),2.34 (1H,m,H-1),2.04 (1H,m,H-1),1.64 (2H,m,H-2),1.61 (1H,m,H-3),1.58 (1H,m,H-5),1.87 (3H,s,H-13),0.91 (3H,s,H-14)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3) δ: 173.3 (C-12),148.8 (C-4),141.8 (C-8),135.4 (C-7),124.9 (C-11),120.9 (C-9),107.2 (C-15),49.2 (C-5),39.5 (C-1),38.2 (C-10),36.4 (C-3),23.3 (C-6),22.5 (C-2),18.7 (C-14),8.3 (C-13)。NMR数据与文献报道一致[17]，由此鉴定化合物12为白术内酰胺。
化合物13：无色针晶（三氯甲烷）；mp 118 ℃；ESI-MS m/z: 329.3 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz,CDCl3) δ: 7.63 (1H,d,J = 9.5 Hz,H-4),7.27 (1H,d,J = 8.3 Hz,H-5),6.74 (1H,d,J = 8.3 Hz,H-6),6.21 (1H,d,J = 9.5 Hz,H-3),5.97 (1H,m,H-3″),5.12 (1H,dd,J = 9.4,7.9 Hz,H-2′),3.38 (2H,m,H-1′),1.89 (3H,dd,J = 7.3,1.5 Hz,H-4″),1.67 (3H,brs,H-5″),1.64 (3H,s,H-5′),1.59 (3H,s,H-4′)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3) δ: 167.3 (C-1″),164.2 (C-7),161.2 (C-2),151.4 (C-8a),144.1 (C-4),137.6 (C-3″),128.9 (C-2″),128.8 (C-5),113.7 (C-4a),113.1 (C-3),112.3 (C-8),106.8 (C-6),89.4 (C-2′),82.2 (C-3′),27.8 (C-1′),22.5 (C-4′),21.4 (C-5′),15.6 (C-4″),20.7 (C-5″)。NMR数据与文献报道一致[18]，由此鉴定化合物13为二氢欧山芹醇当归酸酯。
化合物15：淡黄色油状物；ESI-MS m/z: 261.5 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz,CDCl3) δ: 6.33 (1H,dd,J = 15.9,5.6 Hz,H-9),5.96 (1H,ddd,J = 17.0,10.2,5.3 Hz,H-2),5.77 (1H,d,J = 15.9 Hz,H-8),5.48 (1H,d,J = 17.0 Hz,Ha-1),5.26 (1H,d,J = 10.2 Hz,Hb-1),4.98 (1H,d,J = 5.3 Hz,H-3),4.19 (1H,dt,J = 5.6,6.4 Hz,H-10),0.88 (3H,t,J = 6.8 Hz,H-17)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3) δ: 150.1 (C-9),136.1 (C-2),117.1 (C-1),108.2 (C-8),80.6 (C-4),77.7 (C-7),73.7 (C-6),72.2 (C-10),71.1 (C-5),63.8 (C-3),37.0 (C-11),31.9 (C-15),29.4 (C-13),29.3 (C-14),25.3 (C-12),22.8 (C-16),14.2 (C-17)。NMR数据与文献报道一致[19]，由此鉴定化合物15为(8E)-1,8-十七碳二烯-4,6-二炔-3,10-二醇。
化合物21：白色粉末（醋酸乙酯）；mp 84 ℃；ESI-MS m/z: 299.1 [M＋K]+。1H-NMR (400 MHz,CDCl3) δ: 7.61 (1H,d,J = 9.4 Hz,H-4),7.29 (1H,d,J = 8.6 Hz,H-5),6.83 (1H,d,J = 8.6 Hz,H-6),6.24 (1H,d,J = 9.4 Hz,H-3),5.22 (1H,t,J = 7.3 Hz,2′-H),3.92 (3H,s,7-OH3),3.54 (2H,d,J = 7.3 Hz,H-1′),1.84 (3H,s,3′-CH3),1.67 (3H,s,3′-CH3)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3) δ: 161.5 (C-2),160.4 (C-7),153.0 (C-8a),143.9 (C-4),132.8 (C-3′),126.3 (C-5),121.3 (C-2′),118.2 (C-8),113.2 (C-3),110.2 (C-4a),107.5 (C-6),56.2 (7-OCH3),25.9 (3′-CH3),22.1 (C-1′),18.1 (3′-CH3)。NMR数据与文献报道一致[20]，由此鉴定化合物21为欧芹酚甲醚。
化合物22：淡黄色粉末（甲醇-醋酸乙酯）；233～235 ℃；EI-MS m/z: 270 [M]+。1H-NMR (400 MHz,CDCl3) δ: 8.00 (1H,d,J = 9.9 Hz,H-4),7.69 (1H,d,J = 2.2 Hz,H-2′),6.84 (1H,d,J = 2.2 Hz,H-3′),6.37 (1H,d,J = 9.9 Hz,H-3),5.99 (1H,s,8-OH),5.13 (1H,t,J = 6.9 Hz,H-2″),3.69 (2H,d,J = 6.9 Hz,H-1″),1.84 (3H,s,3″-CH3),1.70 (3H,s,3″-CH3)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3) δ: 160.0 (C-2),146.4 (C-2′),144.0 (C-7),141.7 (C-4),139.7 (C-9),132.7 (C-3″),127.7 (C-8),125.6 (C-6),123.1 (C-2″),122.3 (C-5),113.5 (C-10),113.5 (C-3),105.7 (C-3′),27.9 (C-1″),25.6 (3″-CH3),18.1 (3″-CH3)。NMR数据与文献报道一致[8]，由此鉴定化合物22为别欧前胡素。
化合物23：白色粉末（丙酮）；mp 155～158 ℃；ESI-MS m/z: 347.3 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz,CDCl3) δ: 7.98 (1H,d,J = 9.8 Hz,H-4),7.53 (1H,d,J = 2.3 Hz,H-2′),6.98 (1H,s,H-8),6.94 (1H,d,J = 2.3 Hz,H-3′),6.17 (1H,d,J = 9.8 Hz,H-3),5.30 (1H,dd,J = 8.5,2.6 Hz,H-2″),4.76 (1H,dd,J = 10.1,2.6 Hz,H-1″b),4.55 (1H,dd,J = 10.1,8.5 Hz,H-1″a),2.10 (3H,s,COCH3),1.32 (3H,s,3″-CH3),1.29 (3H,s,3″-CH3)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3) δ: 170.7 (C=O),161.3 (C-2),158.1 (C-7),152.4 (C-8a),148.5 (C-5),145.1 (C-2′),139.3 (C-4),113.0 (C-6),112.6 (C-3),106.5 (C-4a),105.0 (C-3′),94.0 (C-8),71.2 (C-1″),77.6 (C-2″),71.5 (C-3″),26.7 (3″-CH3),26.0 (3″-CH3),21.1 (COCH3)。NMR数据与文献报道一致[21]，由此鉴定化合物23为5-(2-乙酰氧基-3-羟基- 3-甲基丁氧基) 补骨脂素。
化合物25：淡黄色粉末；mp 94 ℃；ESI-MS m/z: 333.4 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz,CDCl3) δ: 8.24 (1H,d,J = 9.8 Hz,H-4),7.59 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-2′),7.18 (1H,s,H-8),7.02 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-3′),6.29 (1H,d,J = 9.8 Hz,H-3),4.39 (1H,dd,J = 7.9,10.0 Hz,H-1″a),4.59 (1H,dd,J = 3.1,10.0 Hz,H-1″b),3.93 (1H,dd,J = 3.1,7.9 Hz,H-2″),3.46 (2H,q,J = 6.9 Hz,3″-OCH2CH3),1.27 (3H,s,3″-CH3),1.24 (3H,s,3″-CH3),1.18 (3H,t,J = 7.0 Hz,H-2′′′)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3) δ: 161.2 (C-2),158.3 (C-7),152.7 (C-8a),148.9 (C-5),145.1 (C-2′),139.6 (C-4),114.1 (C-6),112.8 (C-3),107.4 (C-4a),105.1 (C-3′),94.5 (C-8),76.3 (C-3″),75.9 (C-2″),74.4 (C-1″),56.8 (C-1′′′),21.5 (3″-CH3),21.5 (C-2′′′),16.2 (3″-CH3)。NMR数据与文献报道一致[7]，由此鉴定化合物25为氧化前胡素乙醚。
化合物26：无色针晶（甲醇）；mp 170～190 ℃；ESI-MS m/z: 271.5 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ: 8.18 (1H,d,J = 9.8 Hz,H-4),8.04 (1H,brs,H-2′),7.08 (1H,brs,H-3′),6.40 (1H,d,J = 9.8 Hz,H-3),5.12 (1H,t,J = 6.6 Hz,H-2″),3.72 (2H,d,J = 6.6 Hz,H-1″),3.19 (1H,brs,5-OH),1.80 (3H,s,3″-CH3),1.63 (3H,s,3″-CH3)；13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6) δ: 160.2 (C-2),146.9 (C-2′),145.4 (C-7),142.0 (C-5,9),140.9 (C-4),131.2 (C-3″),128.1 (C-6),124.9 (C-8),123.2 (C-2″),113.9 (C-10),113.6 (C-3),106.6 (C-3′),27.4 (3″-CH3),25.1 (C-1″),18.0 (3″-CH3)。NMR数据与文献报道一致[8]，由此鉴定化合物26为别异欧前胡素。
化合物28：白色粉末（甲醇）；mp 153 ℃；EI-MS m/z: 300 [M]+。1H-NMR (400 MHz,CDCl3) δ: 7.78 (1H,d,J = 1.7 Hz,H-2′),7.65 (1H,d,J = 9.6 Hz,H-4),6.68 (1H,d,J = 1.7 Hz,H-3′),6.60 (1H,d,J = 9.6 Hz,H-3),4.60 (1H,t,J = 7.6 Hz,H-2″),2.97 (3H,s,5-OCH3),2.72 (2H,t,J = 6.5 Hz,H-1″),1.53 (3H,s,3″-CH3),1.36 (3H,s,3″-CH3)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3) δ: 165.1 (C-8),159.0 (C-2),151.1 (C-8a),149.5 (C-2′),147.8 (C-7),140.2 (C-4),137.8 (C-3″),138.7 (C-6),127.0 (C-4a),121.0 (C-3),115.2 (C-2″),110.1 (C-3′),76.8 (C-5),52.9 (5-OCH3),40.0 (C-1″),25.9 (3″-CH3),18.2 (3″-CH3)。NMR数据与文献报道一致[22]，由此鉴定化合物28为氧化别欧前胡素。
化合物30：白色粉末（乙腈）；mp 360 ℃；EI-MS m/z: 135 [M]+。1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ: 12.83 (1H,s,-NH),8.12 (1H,s,H-2),7.11 (1H,s,H-8)；13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6) δ: 155.9 (C-6),152.5 (C-2),151.7 (C-4),139.2 (C-8),117.5 (C-5)。NMR数据与文献报道一致[23]，由此鉴定化合物30为腺嘌呤。
化合物33：无色油状物；EI-MS m/z: 182 [M]+。1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ: 7.07 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-5,7),6.72 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-4,8),4.16 (1H,dd,J = 7.4,4.2 Hz,H-2),3.48 (1H,dd,J = 11.2,4.2 Hz,H-1b),3.34 (1H,dd,J = 11.2,4.2 Hz,H-1a),3.29 (2H,q,J = 7.0 Hz,H-1′),1.08 (3H,t,J = 7.0 Hz,H-2′)；13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6) δ: 156.8 (C-6),130.5 (C-3),127.9 (C-5,7),114.9 (C-4,8),82.4 (C-2),66.1 (C-1),63.3 (C-1′),15.3 (C-2′)。NMR数据与文献报道一致[24]，由此鉴定化合物33为2-乙氧基-2-对羟基苯基乙醇。
化合物34：无色方晶（三氯甲烷）；mp 87 ℃；ESI-MS m/z 245.4 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz,CDCl3) δ: 7.61 (1H,d,J = 9.4 Hz,H-4),7.17 (1H,s,H-5),6.77 (1H,s,H-8),6.22 (1H,d,J = 9.4 Hz,H-3),5.27 (1H,t,J = 7.4 Hz,H-2′),3.89 (3H,s,7-OCH3),3.30 (2H,d,J = 7.4 Hz,H-1′),1.76 (3H,s,3′-CH3),1.70 (3H,s,3′-CH3)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3) δ: 161.2 (C-2),160.8 (C-7),154.6 (C-8a),143.8 (C-4),133.9 (C-3′),127.7 (C-6),127.6 (C-5),121.5 (C-2′),112.9 (C-3),112.1 (C-4a),98.7 (C-8),56.0 (7-OCH3),27.9 (C-1′),25.9 (3′-CH3),17.9 (3′-CH3)。NMR数据与文献报道一致[25]，由此鉴定化合物34为栓质花椒素。
化合物37：白色粉末（醋酸乙酯-丙酮）；mp 140 ℃；ESI-MS m/z: 279.2 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz,CDCl3) δ: 7.62 (1H,d,J = 9.6 Hz,H-4),7.30 (1H,s,H-5),6.81 (1H,s,H-8),6.23 (1H,d,J = 9.6 Hz,H-3),3.90 (3H,s,7-OCH3),3.63 (1H,dd,J = 10.4,2.0 Hz,H-2′),3.00 (1H,dd,J = 13.9,2.0 Hz,H-1′a),2.55 (1H,dd,J = 13.9,10.4 Hz,H-1′b),1.31 (3H,s,3′-CH3),1.28 (3H,s,3′-CH3)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3) δ: 161.5 (C-7),160.9 (C-2),155.0 (C-9),143.4 (C-4),129.6 (C-5),125.0 (C-6),113.3 (C-3),112.1 (C-10),98.9 (C-8),77.7 (C-2′),72.9 (C-3′),56.2 (7-OCH3),32.5 (C-1′),26.4 (3′-CH3),23.7 (3′-CH3)。NMR数据与文献报道一致[8]，由此鉴定化合物37为尤劳帕替醇。
化合物38：无色针晶（甲醇）；mp 162～165 ℃；EI-MS m/z: 168 [M]+。1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ: 7.48 (1H,dd,J = 8.1,2.0 Hz,H-5),7.46 (1H,s,H-3),6.87 (1H,d,J = 8.1 Hz,H-6),3.83 (3H,s,7-OCH3)；13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6) δ: 167.4 (C-7),151.2 (C-4),147.3 (C-2),123.6 (C-6),121.8 (C-1),115.1 (C-5),112.8 (C-3),55.6 (7-OCH3)。NMR数据与文献报道一致[26],由此鉴定化合物38为2,4-二羟基苯甲酸甲酯。
化合物39：无色针晶（丙酮），mp 145 ℃；EI-MS m/z: 206 [M]+。1H-NMR (400 MHz,CDCl3) δ: 7.62 (1H,d,J = 9.5 Hz,H-4),6.85 (1H,s,H-5),6.84 (1H,s,H-8),6.29 (1H,d,J = 9.5 Hz,H-3),3.95 (3H,s,OCH3),3.92 (3H,s,OCH3)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3) δ: 161.5 (C-2),153.1 (C-7),100.2 (C-8),150.2 (C-8a),146.5 (C-6),143.4 (C-4),113.7 (C-3),111.6 (C-4a),108.2 (C-5),56.5 (OCH3)。NMR数据与文献报道一致[27]，由此鉴定化合物39为滨蒿内酯。
化合物40：白色针晶（丙酮）；mp 98 ℃；ESI-MS m/z: 231.0 [M＋H－H2O]+。1H-NMR (400 MHz,CDCl3) δ: 7.57 (1H,d,J = 9.4 Hz,H-4),7.15 (1H,s,H-5),6.72 (1H,s,H-8),6.20 (1H,d,J = 9.4 Hz,H-3),2.82 (2H,t,J = 6.7 Hz,H-1′),1.84 (2H,t,J = 6.7 Hz,H-2′),1.36 (6H,s,3′-CH3)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3) δ: 161.7 (C-2),157.9 (C-7),154.2 (C-8a),143.5 (C-4),128.4 (C-5),118.6 (C-6),113.0 (C-3),112.3 (C-4a),104.8 (C-8),22.1 (C-1′),32.6 (C-2′),75.9 (C-3′),27.0 (3′-CH3)。NMR数据与文献报道一致[28]，由此鉴定化合物40为东印度缎木内酯醇。
化合物42：黄色油状物；EI-MS m/z: 126 [M]+。1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ: 9.50 (1H,s,CHO),7.47 (1H,d,J = 3.4 Hz,H-3),6.59 (1H,d,J = 3.4 Hz,H-4),4.50 (2H,s,CH2OH)；13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6) δ: 178.0 (CHO),162.2 (C-5),151.8 (C-2),124.5 (C-3),109.9 (C-4),56.0 (CH2OH)。NMR数据与文献报道一致[29]，由此鉴定化合物42为5-羟甲基糠醛。
4 讨论《中国药典》2015年版一部白芷项下收载白芷基原植物有白芷Angelica dahurica (Fisch. ex Hoffm.) Benth. et Hook. f. 或杭白芷Angeliea dahurica (Fisch. ex Hoffm.) Benth. et Hook. f. var. formosana (Boiss.) Shan et Yuan [2]。市场流通中根据产地不同，白芷分为杭白芷、川白芷、禹白芷和祁白芷，均为栽培品，我国北方，包括朝鲜、韩国、原苏联西伯利亚地区广泛分布的兴安白芷是野生品[30-32]。由于栽培或野生分布地域不同，它们自身的次生代谢产物可能不尽相同，将直接影响它们作为药物应用的疗效。已有文献报道，欧前胡素、异欧前胡素、珊瑚菜内酯和氧化前胡素对脑γ-氨基丁酸受体A具有调节作用[33]；欧前胡素、香柑内酯、氧化前胡素和花椒毒素具有抗惊厥作用[34-35]；白当归素对人乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶活性具有抑制作用[36]，这些作用可能是白芷用于脑病治疗的基础。亦有报道欧前胡素[37-38]、珊瑚菜内酯、香柑内酯、白当归素、新白当归素（neobyakangelicin）和花椒毒素对肿瘤细胞增殖具有细胞毒活性[39]；异欧前胡素和水合氧化前胡素对HL-60、P388、HELA、A549等肿瘤细胞株的增殖均具有明显的抑制作用[40]。异欧前胡素具有抗炎[41-43]、镇痛[40-41]、解痉[40]等活性。欧前胡素、异欧前胡素、珊瑚菜内酯对脂多糖所致RAW264.7巨噬细胞一氧化氮生成具有抑制活性[10]。欧前胡素、异欧前胡素、水合氧化前胡素皆能明显缓解BaCl2所致家兔肠平滑肌痉挛[40]，提示它们为白芷解痉的活性成分。补骨脂素能逆转HL60/HT细胞的多药耐药[44]；具有促人皮肤成纤维细胞增殖的作用，可促进胶原蛋白合成，提示其具有潜在的抗皮肤衰老作用[45]。补骨脂素还可促进乳鼠颅骨成骨细胞的分化成熟，表现在可明显提高乳鼠颅骨成骨细胞的碱性磷酸酶活性，促进钙盐的沉积以及骨钙素的分泌，增加碱性磷酸酶阳性克隆数和钙化结节数量，提高IGF-1、Osterix、Runx-2和collagen I的mRNA水平，增强I型胶原蛋白表达，提示其具有抗骨质疏松作用[46]。在异欧前胡素肝微粒体代谢研究中，尽管其可代谢转化为18个以上的代谢产物，包括生药白芷中存在的水合氧化前胡素[11]；珊瑚菜内酯可代谢转化为7个以上的代谢产物，包括生药白芷中存在的白当归素[47]，但代谢率较低，仍以原型化合物为主，提示它们具有代谢稳定性，原型化合物可能是效应成分。欧前胡素、异欧前胡素和水化氧化前胡素是白芷中的主要成分，白当归素为白芷的特异性成分。明晰杭白芷的化学成分，为其药效物质基础的确定奠定了基础。
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