2016, Vol. 47
引用本文 | doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.14.003 |
2. 山东中医药大学, 山东 济南 250014 ;
3. 济南康森三峰生物工程技术有限公司, 山东 济南 250014
2. Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250014, China ;
3. Kangsen Sanfeng Biological Engineering Technology Co., Ltd., Jinan 250014, China
忍冬根为忍冬科（Caprifoliaceae）植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥根。忍冬作为山东道地药材，是我国传统中药之一，其花作为金银花入药，茎作为忍冬藤入药[1]。现代药理研究表明，金银花具有抗菌[2]、抗病毒[3]、抗炎[4]、保肝[5]、抗氧化[6]等药理活性，临床上主要用于治疗温病发热、热毒血痢、痈肿疮疡、风湿热痹、关节红肿热痛等症[7]。忍冬根作为忍冬的植物组成部位却未曾开发利用，为了进一步扩大药用部位，本实验对忍冬根部位进行系统的成分研究，分离纯化得到14个化合物，分别鉴定为3, 13-dihydroxystemodan-2-one（1）、大黄酚（chrysophanol，2）、palmarumycin CP2（3）、β-谷甾醇（β-sitosterol，4）、豆甾醇（sti gmasterol，5）、豆甾-4, 6, 8(14), 22-四烯-3-酮[stigmast-4, 6, 8(14), 22-tetraen-3-one，6]、erythrinassinate D（7）、羊毛甾醇（lanosterin，8）、齐墩果酸-3-乙酸酯（3-O-acetyloleanolic acid，9）、原儿茶醛（protocatechuin aldehyde，10）、胡萝卜苷（daucosterol，11）、(E)-3-(3, 4-二羟基苯亚甲基)-5-(3, 4-二羟基苯)-2(3H)-呋喃酮[(E)-3-(3, 4-dihydroxybenzylidene)-5-(3, 4-dihydroxyphenyl)-2(3H)-furanone，12]、lomacarinoside B（13）、(2E, 6S)-8-(α-L-arabinopyranosyl-(1″→6′)-β-D-glucopyranosyloxy)-2, 6-dimethyloct-2-eno-1, 2″-lactone（14）。其中化合物1为新化合物，化合物2、3、6、7～9、13均为首次从该植物中分离。
1 仪器与材料Bruker-400核磁共振波谱仪（瑞士布鲁克公司）；Waters 600型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；普源L-3000系列高效液相色谱仪（北京普源精电科技有限公司）；旋转蒸发器R-3（瑞士Buchi公司）；WZZ-15自动旋光仪（上海光学仪器厂）；Agilent 1200 RRLC-6410 QQQ-MS/MS质谱仪（美国Agilent公司）；YRT-3型药物熔点仪（天津天大天发科技有限公司）；YMC-PEAK ODS-A分析型色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；YMC-PEAK ODS-A半制备型色谱柱（250 mm×10.0 mm，5μm）；薄层硅胶GF254，柱色谱硅胶（200～300目，青岛海洋化工厂）；SZX16型荧光显微镜及DP2-BSW图像采集系统（日本Olympus公司）；Forma 3111型水套式CO2培养箱（美国Forma公司）；斑马鱼养殖饲养设备（北京爱生科技公司）；JS7系巨噬细胞荧光转基因斑马鱼（山东省科学院生物研究所药物筛选研究室）；CuSO4（Sigma公司）；HPLC用甲醇、乙腈为色谱纯（美国Tedia公司）；HPLC用水为娃哈哈纯净水；提取分离用试剂乙醇、石油醚、醋酸乙酯、甲醇、二氯甲烷等均为分析纯。
忍冬根药材采购于山东临沂市平邑县，经山东中医药大学李佳教授鉴定为忍冬科忍冬属植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥根。
2 方法 2.1 提取与分离干燥忍冬根18 kg，粉碎，95%乙醇回流提取3次，分别为2、2、1 h，提取液合并、浓缩，得乙醇提取物。乙醇提取物用纯净水复溶到5 L，依次用等体积石油醚（60～90℃）、醋酸乙酯、正丁醇萃取4次，分别合并每部分萃取液，减压浓缩干燥得石油醚浸膏A（86 g）和醋酸乙酯浸膏B（460 g）。A经硅胶柱色谱分离，以石油醚-醋酸乙酯100:0→0:100洗脱，得到A1～A18段。A5（石油醚-醋酸乙酯100:1，8 g）经硅胶柱色谱（石油醚-醋酸乙酯100:0→1:1）分为8段（A5a-A5h），其中A5d部分（石油醚-醋酸乙酯25:1，0.35 g）经Sephadex LH-20（二氯甲烷-甲醇1:1）得化合物2（13 mg）和3（8 mg）。A10部分（石油醚-醋酸乙酯15:1，13 g）经硅胶柱色谱（石油醚-醋酸乙酯100:1→1:1）分离，其中A10d2（石油醚-醋酸乙酯15:1，0.3 g）析晶，滤过、重结晶得化合物4（200 mg），A10e5（石油醚-醋酸乙酯10:1，0.1 g）重结晶得化合物5（35 mg），A10b2（石油醚-醋酸乙酯20:1，0.1 g）经Sephadex LH-20（二氯甲烷-甲醇1:1）得化合物6（18 mg），A10f3部分（石油醚-醋酸乙酯10:1，0.15 g）经Sephadex LH-20（二氯甲烷-甲醇1:1）得化合物7（5 mg）。A13部分（石油醚-醋酸乙酯10:1，6 g）经硅胶柱色谱（石油醚-醋酸乙酯100:0→0:100）、Sephadex LH-20（二氯甲烷-甲醇1:1）得化合物8（8.5 mg）；B通过硅胶柱色谱（二氯甲烷-甲醇100:0→0:100）分为B1～B13段。B1部分（二氯甲烷-甲醇100:0，6.3 g）经硅胶柱色谱、Sephadex LH-20得化合物9（5 mg）。B3部分（二氯甲烷-甲醇100:1，17 g）经硅胶柱色谱（石油醚-醋酸乙酯100:0→1:1）分离，其中B3g4部分（二氯甲烷-甲醇50:1，3 g）重结晶得化合物1（30 mg）。B4部分（二氯甲烷-甲醇50:1，22 g）经逆流色谱，流动相为石油醚-醋酸乙酯-甲醇-水6:4:1:9，得到化合物10（8 mg）。B5部分（二氯甲烷-甲醇25:1，35 g）经硅胶柱色谱（二氯甲烷-甲醇100:0→0:100）分离，其中B5j（二氯甲烷-甲醇15:1，5 g）重结晶得化合物11（45 mg），B5a5b部分（二氯甲烷-甲醇15:1，0.15 g）经Sephadex LH-20（二氯甲烷-甲醇1:1）得化合物12（6 mg）。B8部分（二氯甲烷-甲醇10:1，40 g）经硅胶柱色谱（二氯甲烷-甲醇100:1→1:1）、Sephadex LH-20（二氯甲烷-甲醇1:1）、高效制备液相制备得化合物13（100 mg）、化合物14（15 mg）。
2.2 细胞活性研究 2.2.1 斑马鱼抗炎模型的培养[8]JS7系巨噬细胞荧光转基因斑马鱼雌雄分开喂养，照明14 h、黑暗10 h交替进行，定时喂以人工颗粒状饵料和刚孵出的卤虫无节幼体。采卵时取健康性成熟的斑马鱼按雌雄1:1的比例放入交配缸内，次日9～10时获得受精卵。对受精卵进行消毒和洗涤后移入斑马鱼胚胎培养用水（含5.0 mmol/L NaCl、0.17 mmol/L KCl、0.4 mmol/L CaCl2、0.16 mmol/L MgSO4）中，28℃下控光培养。
2.2.2 不同药物对转基因斑马鱼抗炎活性研究受精卵发育3 d时，体视显微镜下挑选正常的斑马鱼胚胎，移入6孔培养板中，每孔20枚，每组2个复孔，实验重复2次。分别加入不同质量浓度（1、10、100μg/mL）的10个化合物（化合物1～3、6、8～10、12～14）溶液，加培养水至6.0 mL，阳性对照组加入3.6μg/mL阿司匹林，阴性对照组加入0.1% DMSO，加盖置于光照培养箱（28℃）让胚胎继续发育1 h。CuSO4避光处理斑马鱼1 h后，室温条件下用4%多聚甲醛（PFA）固定1 h，清除4% PFA并使用PBST清洗。另设空白对照组、CuSO4对照组，空白对照组、CuSO4对照组斑马鱼发育3 d时，使用0.1% DMSO处理，随后置于光照培养箱（28℃）让胚胎继续发育1 h后，空白对照组不添加20μmol/L的CuSO4溶液；CuSO4对照组添加20μmol/L的CuSO4溶液，继续在28℃条件下避光培养。1 h后，利用4% PFA在室温条件下将其固定。固定1 h后去除PFA，并使用磷酸盐吐温缓冲液（PBST）清洗。
3 结果 3.1 结构鉴定化合物1：白色粉末。[α]D20 +57.5°(c 0.2, CH2Cl2)。mp 159.1～161.2℃。(−) HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 319.235 1 [M－H]−（理论值320.235 3，C20H32O3），确定分子式为C20H32O3，不饱和度为5。红外光谱数据包括3 464, 2 952, 2 857, 1 683, 1 445, 1 212, 1 077 cm−1，其中3 464和1 683 cm−1说明化合物结构中含有羟基和羰基。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3)显示该化合物在低场区有连氧氢信号δH 3.83 (1H, s)，在高场区有4个甲基信号δH 1.18 (3H, s), 1.15 (3H, s), 0.88 (3H, s)和0.72 (3H, s)（表 1）。13C-NMR结合HSQC图谱显示20个碳信号，其中包括1个羰基碳(δC 212.0)、2个连氧碳(δC 82.8, 72.4)和4个甲基碳(δC 30.3, 28.0, 16.4, 15.7)。上述官能团中仅羰基不饱和度为1，表明化合物1为四环结构。以上波谱数据与已知的二萜类化合物stemodinone[9]比较相似，不同的是化合物1在C-3位置连有-OH取代基。HMBC谱图（图 1）中的相关进一步验证了上述推断：从δH 3.83 (H-3)与δC 45.3 (C-5)、30.3 (C-18)、16.4 (C-19)的相关信号，δH 2.14 (H-5)与δC 82.8 (C-3), 30.3 (C-18), 23.6 (C-6), 16.4 (C-19)的相关信号，δH1.18 (H3-18)与δC 82.8 (C-3), 45.3 (C-5), 16.4 (C-19)的相关信号，δH0.72 (H3-19)与δC82.8 (C-3), 45.3 (C-5), 30.3 (C-18)的相关信号可以确定C-3位连有-OH取代；通过NOESY谱中照射δH 3.83 (H-3)信号发现δH 1.18 (H3-19)有增益，说明H-3为β构型，OH为α构型（图 1）。因此化合物1的化学结构确定为3, 13-dihydroxystemodan-2-one。经Scifinder数据库检索为新化合物。
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表 1 化合物1的波谱数据 Table 1 1H-NMR and 13C-NMR data of compound 1 (400 MHz, CDCl3) |
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图 1 化合物1的结构及重要HMBC(→)相关 Fig.1 Structure and key HMBC correlations (→) of compound 1 |
化合物2：橙红色粉末，ESI-MS: m/z 253.2 [M－H]−（C15H10O4）；1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 12.14 (1H, s, 1-OH), 7.11 (1H, s, H-2), 7.66 (1H, s, H-4), 7.84 (1H, dd, J=8.4, 1.2 Hz, H-5), 7.82 (1H, dd, J=8.4, 1.2 Hz, H-6), 7.26 (1H, m, H-7), 12.03 (1H, s, 8-OH), 2.47 (3H, s, CH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 22.3 (C-CH3), 162.3 (C-1), 124.6 (C-2), 149.4 (C-3), 121.4 (C-4), 119.9 (C-5), 136.9 (C-6), 124.4 (C-7), 162.8 (C-8), 192.6 (C-9), 182.1 (C-10), 133.3 (C-4a), 115.9 (C-8a), 113.8 (C-9a), 133.7 (C-10a)。以上数据与文献报道基本一致[10]，故鉴定化合物2为大黄酚。
化合物3：黄白色油状物质，ESI-MS: m/z 317.3 [M－H]−（C20H14O4）；1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 2.49 (2H, t, J=2.4 Hz, H-2), 2.85 (2H, t, J=2.4 Hz, H-3), 7.54 (2H, d, J=5.2 Hz, H-4′, 5′), 7.46 (2H, dd, J=7.6, 5.2 Hz, H-3′, 6′), 7.11 (1H, d, J=0.8 Hz, H-6), 6.98 (2H, d, J=7.6 Hz, H-2′, 7′), 7.64 (1H, t, J=8.0 Hz, H-7), 7.45 (1H, dd, J=7.6, 0.8 Hz, H-8), 12.44 (1H, s, -OH)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 98.4 (C-1), 29.4 (C-2), 34.1 (C-3), 203.4 (C-4), 162.5 (C-5), 116.7 (C-6), 137.2 (C-7), 119.6 (C-8), 115.4 (C-4a), 134.2 (C-4a′), 140.8 (C-8a), 113.4 (C-8a′) 147.4 (C-1′, 8′), 109.4 (C-2′, 7′), 127.6 (C-3′, 6′), 120.9 (C-4′, 5′)。以上数据与文献报道基本一致[11]，故鉴定化合物3为palmarumycin CP2。
化合物4：白色粉末，ESI-MS: m/z 413.5 [M+H]+（C29H50O）；1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.35 (1H, s, H-6), 3.52 (1H, brs, H-3), 1.01 (3H, s, 18-CH3), 0.68 (3H, s, 19-CH3), 0.93 (3H, d, J=4.0 Hz, 21-CH3), 0.84 (6H, m, 26, 27-CH3), 0.81 (3H, s, 29-CH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 36.5 (C-1), 29.2 (C-2), 71.8 (C-3), 45.9 (C-4), 140.8 (C-5), 121.7 (C-6), 31.7 (C-7), 31.9 (C-8), 50.2 (C-9), 36.1 (C-10), 28.2 (C-11), 39.8 (C-12), 42.3 (C-13), 56.8 (C-14), 26.1 (C-15), 29.6 (C-16), 56.1 (C-17), 11.7 (C-18), 19.8 (C-19), 37.0 (C-20), 19.4 (C-21), 33.9 (C-22), 24.3 (C-23), 37.3 (C-24), 19.0 (C-25), 11.9 (C-26), 23.1 (C-27), 21.1 (C-28), 18.8 (C-29)。以上数据与文献报道基本一致[12]，故鉴定化合物4为β-谷甾醇。
化合物5：白色粉末，ESI-MS: m/z 413.6 [M+H]+（C29H48O）；1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 0.68 (3H, s, H-18), 0.78 (3H, s, H-27), 0.79 (3H, s, H-19), 0.81 (3H, s, H-29), 0.83 (3H, s, H-26), 1.01 (3H, brs, H-21), 3.35 (1H, m, H-3α), 5.13 (1H, m, H-22), 5.30 (1H, d, J=4.0 Hz, H-6)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 37.3 (C-1), 31.8 (C-2), 71.8 (C-3), 41.3 (C-4), 140.7 (C-5), 121.7 (C-6), 31.8 (C-7), 31.9 (C-8), 50.2 (C-9), 36.6 (C-10), 21.2 (C-11), 39.8 (C-12), 42.3 (C-13), 56.9 (C-14), 24.3 (C-15), 29.1 (C-16), 56.1 (C-17), 11.9 (C-18), 19.4 (C-19), 40.5 (C-20), 21.1 (C-21), 138.3 (C-22), 129.2 (C-23), 51.2 (C-24), 31.7 (C-25), 19.0 (C-26), 21.2 (C-27), 25.4 (C-28), 12.0 (C-29)。以上数据与文献报道基本一致[12]，故鉴定化合物5为豆甾醇。
化合物6：黄白色油状物质，ESI-MS: m/z 405.3 [M－H]−（C29H42O）；1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 0.82 (3H, t, J=6.8 Hz, 29-CH3), 0.85 (3H, d, J=6.8 Hz, 26-CH3), 0.94 (3H, d, J=6.8 Hz, 27-CH3), 0.96 (3H, s, 21-CH3), 1.00 (3H, s, 19-CH3), 1.05 (3H, d, J=6.8 Hz, 18-CH3), 5.23 (2H, m, H-22, 23), 5.73 (1H, s, H-4), 6.02 (1H, d, J=7.6 Hz, H-6), 6.62 (1H, d, J=7.6 Hz, H-7)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 34.1 (C-1), 34.2 (C-2), 199.5 (C-3), 123.0 (C-4), 164.4 (C-5), 124.5 (C-6), 134.0 (C-7), 124.4 (C-8), 42.9 (C-9), 44.0 (C-10), 18.9 (C-11), 29.7 (C-12), 36.7 (C-13), 156.1 (C-14), 27.7 (C-15), 35.6 (C-16), 55.7 (C-17), 21.2 (C-18), 19.9 (C-19), 39.3 (C-20), 17.6 (C-21), 132.6 (C-22), 135.0 (C-23), 44.4 (C-24), 19.0 (C-25), 33.1 (C-26), 19.7 (C-27), 25.4 (C-28), 16.7 (C-29)。以上数据与文献报道基本一致[13]，故鉴定化合物6为豆甾-4, 6, 8(14), 22-四烯-3-酮。
化合物7：白色粉末，ESI-MS: m/z 557.5 [M－H]−（C36H62O4）；1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 0.87 (3H, t, J=6.8 Hz, 26″-CH3), 1.10～1.48 [48H, m, (CH2)24], 3.93 (3H, s, 4-OMe), 4.20 (2H, t, J=6.4 Hz, -OCH2CH2R), 5.82 (1H, brs, -OH), 6.31 (1H, d, J=16.0 Hz, H-2′), 6.92 (1H, d, J=16.0 Hz, H-5), 7.03 (1H, m, H-2), 7.08 (1H, m, H-6), 7.56 (1H, d, J=16 Hz, H-1′)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 127.3 (C-1), 115.7 (C-2), 144.6 (C-3, 4, 1′), 114.7 (C-5), 123.0 (C-6), 109.3 (C-2′), 169.3 (C-3′), 64.6 (C-1″), 28.8 (C-2″), 26.0 (C-3″), 29.7 (C-4″～C-23″), 31.9 (C-24″), 22.7 (C-25″), 14.1 (C-26″), 59.6 (4-OMe)。以上数据与文献报道基本一致[14]，故鉴定化合物7为erythrinassinate D。
化合物8：白色粉末，ESI-MS: m/z 425.7 [M－H]−（C30H50O）；1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 3.25 (1H, m, H-3), 0.81 (3H, s, H-18), 0.98 (3H, s, H-19), 0.88 (3H, d, J=6.6 Hz, H-21), 5.07 (1H, m, H-24), 1.60 (3H, brs, H-26), 1.68 (3H, brs, H-27), 0.85 (3H, s, H-28), 1.00 (3H, s, H-29), 0.69 (3H, s, H-30)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 36.4 (C-1), 28.0 (C-2), 79.0 (C-3), 38.9 (C-4), 50.9 (C-5), 21.0 (C-6), 28.2 (C-7), 134.4 (C-8), 130.9 (C-9), 37.1 (C-10), 18.3 (C-11), 25.5 (C-12), 44.5 (C-13), 49.8 (C-14), 30.9 (C-15), 29.7 (C-16), 50.4 (C-17), 15.8 (C-18), 18.6 (C-19), 36.3 (C-20), 19.1 (C-21), 35.6 (C-22), 25.7 (C-23), 125.3 (C-24), 134.4 (C-25), 24.9 (C-26), 17.6 (C-27), 24.3 (C-28), 27.9 (C-29), 15.4 (C-30)。以上数据与文献报道基本一致[15]，故鉴定化合物8为羊毛甾醇。
化合物9：白色粉末，ESI-MS: m/z 497.7 [M－H]−（C32H50O4）；1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 4.40 (1H, dd, J=2.8, 4.0 Hz, H-3α), 5.17 (1H, t, J=4.0 Hz, H-12), 2.77 (1H, dd, J=2.9, 4.0 Hz, H-18), 0.73 (3H, s, 23-CH3), 0.82 (3H, s, 24-CH3), 0.88 (3H, s, 25-CH3), 1.05 (3H, s, 26-CH3), 1.07 (3H, s, 27-CH3), 0.90 (3H, s, 28-CH3), 0.99 (3H, s, 29-CH3), 1.02 (3H, s, 30-CH3)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 38.7 (C-1), 23.1 (C-2), 79.8 (C-3), 37.4 (C-4), 54.4 (C-5), 17.7 (C-6), 32.1 (C-7), 39.9 (C-8), 46.7 (C-9), 37.1 (C-10), 22.8 (C-11), 121.3 (C-12), 143.7 (C-13), 41.2 (C-14), 27.1 (C-15), 22.5 (C-16), 45.6 (C-17), 40.7 (C-18), 45.4 (C-19), 30.3 (C-20), 33.2 (C-21), 31.2 (C-22), 27.65 (C-23), 16.7 (C-24), 14.9 (C-25), 16.5 (C-26), 25.4 (C-27), 178.5 (C-28), 32.7 (C-29), 23.3 (C-30), 20.9 (Ac), 170.0 (CO)。以上数据与文献报道基本一致[16]，故鉴定化合物9为齐墩果酸-3-乙酸酯。
化合物10：灰白色粉末，ESI-MS: m/z 137.1 [M－H]−（C7H6O3）；1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 9.70 (1H, s, 7-CHO), 7.23 (1H, brs, H-2), 6.91 (1H, d, J=8.0 Hz, H-5), 7.28 (1H, m, H-6)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 129.2 (C-1), 114.8 (C-2), 146.4 (C-3), 152.8 (C-4), 115.9 (C-5), 124.9 (C-6), 191.4 (C-7)。以上数据与文献报道基本一致[17]，故鉴定化合物10为原儿茶醛。
化合物11：白色粉末，mp 298～300℃，难溶于一般有机溶剂，Libermann-Burchard反应阳性，Molish反应阳性，与β-胡萝卜苷对照品在多种溶剂系统展开进行TLC对照，喷硫酸-乙醇显色剂，105℃下加热显色，样品斑点的Rf值与β-胡萝卜苷对照品相同，且均为紫红色，且混合后熔点不下降，故鉴定化合物11为β-胡萝卜苷。
化合物12：橙色油状物，ESI-MS: m/z 313.1 [M+H]+（C17H12O6）；1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 9.46 (4H, brs, -OH), 7.10 (1H, s, H-3), 7.22 (1H, d, J=5.2 Hz, H-6), 6.83 (1H, d, J=8.0 Hz, H-9), 7.12 (1H, s, H-11), 7.23 (1H, d, J=5.2 Hz, H-13), 6.86 (1H, d, J=8.0 Hz, H-16), 7.20 (2H, brs, H-10, 17)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 170.0 (C-1), 121.6 (C-2), 98.6 (C-3), 155.5 (C-4), 119.8 (C-5), 112.7 (C-6), 146.2 (C-7), 148.5 (C-8), 116.5 (C-9), 117.9 (C-10), 134.4 (C-11), 126.9 (C-12), 117.7 (C-13), 148.5 (C-14), 149.2 (C-15), 116.7 (C-16), 124.4 (C-17)。以上数据与文献报道基本一致[18]，故鉴定化合物12为(E)-3-(3, 4-二羟基苯亚甲基)-5-(3, 4-二羟基苯)-2(3H)-呋喃酮。
化合物13：白色粉末，ESI-MS: m/z 359.1 [M+H]+（C16H22O9）；1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 7.26 (1H, s, H-2), 2.95 (1H, m, H-4), 2.07 (1H, m, H-5a), 1.45 (1H, m, H-5b), 1.84 (1H, m, H-7), 3.89 (1H, s, H-8), 5.12 (1H, s, H-10), 1.71 (1H, brs, H-11), 0.98 (1H, d, J=8.0 Hz, H-12), 4.49 (1H, d, J=8.0 Hz, H-1′), 2.97 (1H, m, H-2′), 3.16 (1H, m, H-3′), 3.04 (1H, m, H-4′), 3.14 (1H, m, H-5′), 3.89 (1H, m, H-6a′), 3.44 (1H, m, H-6b′)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 112.6 (C-1), 151.0 (C-2), 167.4 (C-3), 31.2 (C-4), 42.2 (C-5), 45.2 (C-7), 72.6 (C-8), 96.2 (C-10), 41.0 (C-11), 13.9 (C-12), 99.1 (C-1′), 73.6 (C-2′), 77.2 (C-3′), 70.6 (C-4′), 77.8 (C-5′), 61.6 (C-6′)。以上数据与文献报道基本一致[19]，故鉴定化合物13为lomacarinoside B。
化合物14：白色粉末，ESI-MS: m/z 461.2 [M－H]−（C21H34O11）；1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 6.68 (1H, s, H-3), 2.13 (1H, m, H-4β), 1.47 (1H, m, H-6), 1.35 (2H, m, H-5, 7), 3.48 (1H, s, H-8), 3.98 (1H, d, J=8.2 Hz, H-9), 2.90 (1H, brs, H-10), 3.10 (1H, m, H-11), 2.81 (1H, brs, H-12), 4.12 (1H, d, J=8.2 Hz, H-14α), 3.17 (1H, m, H-14β), 4.31 (1H, d, J=8.2 Hz, H-15), 4.90 (1H, m, H-16), 3.61 (1H, s, H-17), 3.69 (1H, s, H-18), 3.75 (1H, d, J=8.2 Hz, H-19α), 2.24 (1H, m, H-19α), 3.51 (1H, m, H-19β), 1.76 (3H, s, H-20), 0.92 (3H, s, H-21)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 166.9 (C-1), 127.6 (C-2), 142.45 (C-3), 25.0 (C-4), 35.3 (C-5), 29.7 (C-6), 34.6 (C-7), 68.0 (C-8), 102.4 (C-9), 73.9 (C-10), 77.1 (C-11), 72.1 (C-12), 75.8 (C-13), 70.2 (C-14), 102.0 (C-15), 72.7 (C-16), 71.2 (C-17), 69.0 (C-18), 66.9 (C-19), 12.9 (C-20), 25.5 (C-21)。以上数据与文献报道基本一致[20]，故鉴定化合物14为(2E, 6S)-8-(α-L-arabinopyranosyl-(1″→6′)-β-D-glucopyranosyloxy)-2, 6-dimethyloct-2-eno-1, 2″-lactone。
3.2 抗炎活性对化合物1～3、6、8～10、12～14进行抗炎活性研究。荧光显微镜下观察巨噬细胞炎症反应，计算炎症细胞数量，统计样品对炎症反应的影响，并观察胚胎死亡或畸形情况。各个化合物的抗炎活性见表 2。
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表 2 化合物对斑马鱼炎症的影响 Table 2 Effects of compounds against zebrafish inflammation |
结果表明，当质量浓度为1、10μg/mL时，所有化合物均未表现出抗炎活性；当质量浓度为100μg/mL时，化合物9、10表现出明显的抗炎活性，其他化合物均未表现出抗炎活性。
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