延胡索为罂粟科（Papaveraceae）紫堇属Corydalis Vent. 植物延胡索Corydalis yanhusuo W. T. Wang的干燥块茎，性味辛、苦、温，用药历史久远，早在《本草拾遗》就有记载，现主产陕西、浙江^[1]。《中国药典》2015年版中详细记载了其功效，用于治疗经闭痛经、产后瘀阻、脘腹疼痛、跌扑肿痛等症^[2]，经验上来看，其醋制品疗效更佳，故临床以醋制为主^[3]，延胡索化学成分主要含有生物碱、酚酸、甾体、三萜等类化合物^[4]，其中又以生物碱为主^[5]。

近年来延胡索生物碱活性研究一直有报道，集中在其对中枢神经、心脑血管和消化系统的影响以及抗肿瘤等药理作用方面。生物碱种类已有报道达44个之多，本实验通过对延胡索块茎乙醇提取物系统分离，得到3个生物碱类化合物，分别鉴定为1-[2-(N-甲基铵乙基)]-3,4,6,7-四甲氧基菲（1-[2-(N- methylaminoethy)]-3,4,6,7-tetramethoxyphenanthrene，1 ）、1-乙胺甲基-3,4,6,7-四甲氧基菲 [1-(N-ethylamino- methy)-3,4,6,7-tetramethoxyphenanthrene，2]、氧代海罂粟达林碱（oxoglaucidaline，3 ）。其中，化合物1为新天然产物，化合物2为新化合物，命名为延胡索菲碱A（coryphenanthrine A），化合物3为首次从延胡索中分离得到。

Waters 2695高效液相色谱仪：包括Waters 2489型PDA检测器，Empower工作站（Waters公司）；Synapt MS飞行时间二级质谱仪（QTOF）；ACF-400P核磁共振仪（德国Bruker公司）；AG285电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；KQ-2200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；柱色谱用硅胶（100、200～300目），甲醇、二氯甲烷、石油醚等均为分析纯（江苏汉邦公司）。

药材延胡索由江阴天江药业有限公司提供，采集于浙江省，由南京中医药大学陈建伟教授鉴定为罂粟科植物延胡索Corydalis yanhusuo W. T. Wang的干燥块茎。

延胡索干燥块茎25 kg研磨后用95%乙醇水溶液分批回流提取，每次药材3 kg，按料液比1：3，每批重复提取3次，回收乙醇得浸膏1.6 kg。所得浸膏再用5% HCl捏溶，得酸不溶部分，滤去，得滤液；再放置过夜，析出沉淀部分；酸水液再用石油醚萃取，得石油醚部分；剩余部分用10% NaOH调pH值，先将pH值调至8，发现分液漏斗壁上有不溶黏稠物，再用二氯甲烷萃取至萃取液颜色较淡时，发现底部有大量黑色沉淀，二氯甲烷萃取液浓缩后得pH 8（A部），同样得到pH 9～10（B部）、pH 13（C部）、萃取后黑色不溶物部分。A部分先经过硅胶柱色谱分离，石油醚-二氯甲烷、二氯甲烷-甲醇梯度洗脱；所得馏份再用石油醚-二氯甲烷-丙酮，二氯甲烷-丙酮-甲醇梯度洗脱，分得化合物1（30 mg）、2（19 mg）、3（9 mg）。

化合物1：白色晶体，碘化铋钾反应呈现阳性，推测可能为生物碱类化合物。通过比较¹H-和¹³C-NMR数据，结合质谱数据推测相对分子质量为356，解析得其分子式为C₂₁H₂₆NO₄，结构见图 1。

图 1 化合物1的结构 Fig.1 Structure of compound 1

在化合物1的¹H-NMR (400 MHz,DMSO-d₆)谱，共有26个氢信号。其中，芳香氢信号有5个，分别为δ 9.12 (1H,s),7.88 (1H,d, J = 9.2 Hz),7.68 (1H,d,J = 9.1 Hz),7.46 (1H,s),7.42 (1H,s)，甲基氢信号1个δ 2.61 (3H,s)，亚甲基氢信号2个，分别为δ 3.44 (2H,m) 和3.19 (2H,m)，甲氧基信号4个，分别为δ 3.99 (3H,s),3.95 (3H,s),3.93 (3H,s),3.87 (3H,s)，-NH₂上氢信号1个，为δ 9.01 (2H,brs)。

在化合物1的¹³C-NMR (100 MHz,DMSO-d₆)谱，共有21碳信号；结合HMQC实验，4个甲氧基碳信号分别为δ 59.9,56.9,55.8,55.7，对应的氢信号分别为δ 3.87,3.99,3.93,3.95；δ 33.0为甲基碳信号，对应的氢信号为2.61 (3H,s)；2个亚甲基碳信号分别为δ 49.6,30.1；对应的氢信号分别3.19 (2H,m),3.44 (2H,m)；芳香碳信号有14个，分别为δ 150.6,149.1,148.7,145.3,130.2,128.4,125.5,125.5,124.6,124.1,120.7,115.4,109.0,108.7，结合氢谱中5个芳香氢，推测化合物1为阿朴菲类生物碱^[6]。芳香氢中，存在2个d峰 (δ 7.68,7.88)，为苯环上邻位氢，即H-9，H-10。根据HMQC实验，确定C-2，C-5，C-8上结合的H信号分别δ 7.42,9.12,7.46；根据HMBC谱（图 2），由H-8、H-10和H-9与δ 124.6远程相关，故定位了δ 124.6为C-8a信号；同理由H-5和H-9都与δ 128.4远程相关，故定位了δ 128.4为C-5a信号；根据Ar-CH₂和H-2与δ 130.2远程相关，确定C-1位置；由H-2和H-10都δ 125.5远程相关，确定C-10a位置；同样方法定位了4个OCH₃。

图 2 化合物1的HMBC相关 Fig.2 HMBC correlation of compound 1

综合以上信息，结合氢谱、碳谱数据，推测该化合物分子式为C₂₁H₂₆NO₄，并将该化合物的谱图数据与文献报道的化合物1-甲胺乙基-3,4,6,7-四甲氧基菲（C₂₁H₂₅NO₄）^[7]比对，发现同为阿朴菲类生物碱，化合物1在N上多了1个H，经质谱确认相对分子质量为356。经SciFinder查询发现为人工合成化合物，参照专利^[8]，确定化合物1为新天然产物1-[2-(N-甲基铵乙基)]-3,4,6,7-四甲氧基菲（1-[2-(N-methylaminoethy)]-3,4,6,7-tetramethoxyphenan-threne）。化合物1的氢谱、碳谱数据见表 1、2。

表 1(Table 1)

表 1 化合物1～3的氢谱数据(400 MHz) Table 1 1H-NMR data for compounds 1—3 (400 MHz)     碳位 δH 1 2 3 1 2 7.42 (1H, s) 7.28 (1H, s) 3 7.22 (1H, s) 3a 4 4a 5 7.37 (1H, s) 9.22 (1H, s) 7.37 (1H, s) 5a 6 6a 7 7a 8 7.46 (1H, s) 7.11 (1H, s) 8.14 (1H, s) 8a 9 7.68 (1H, d,J = 9.2 Hz) 7.55 (1H, d,J = 9.1 Hz) 10 7.88 (1H, d,J = 9.1 Hz) 7.88 (1H, d,J = 9.1 Hz) 10a 11 9.07 (1H, s) 11a 12 12a 1-CH2 3.44 (2H, m) 3.80 (2H, m) N-CH2 3.19 (2H, m) 3.35 (2H, m) N-CH3 2.61 (3H, s) 2.79 (3H, t,J= 0.5 Hz) 3.81 (3H, s) N-H2 9.01 (2H, brs) 10.01 (2H, brs) 3-OCH3 3.99 (3H, s) 3.89 (3H, s) 4-OCH3 3.87 (3H, s) 4.05 (3H, s) 6-OCH3 3.93 (3H, s) 3.99 (3H, s) 7-OCH3 3.95 (3H, s) 4.00 (3H, s) 1-OCH3 4.10 (3H, s) 2,10-OCH3 4.11 (6H, s) 9-OCH3 4.11 (3H, s)

表 1 化合物1～3的氢谱数据(400 MHz) Table 1 1H-NMR data for compounds 1—3 (400 MHz)

表 2(Table 2)

表 2 化合物1～3的碳谱数据 Table 2 13C-NMR data of compounds 1—3     碳位 δC 1 2 3 1 130.2 129.0 152.5 2 115.4 114.5 149.4 3 150.6 150.4 108.8 3a 121.4 4 145.3 145.7 156.4 4a 124.1 125.0 5 109.0 108.9 113.7 5a 128.4 128.2 6 148.7 148.6 6a 130.6 7 149.1 149.0 175.6 7a 127.8 8 108.7 107.9 112.3 8a 124.6 124.3 9 125.5 125.8 154.0 10 120.7 120.0 149.9 10a 125.5 125.4 11 108.7 11a 123.8 12 118.5 12a 124.2 1-CH2 30.1 30.8 N-CH2 49.6 50.4 N-CH3 33.0 33.2 30.5 N-H2 3-OCH3 56.9 56.7 4-OCH3 59.9 60.0 6-OCH3 55.8 55.8 7-OCH3 55.7 55.7 1-OCH3 55.9 2,10-OCH3 60.5, 56.0 9-OCH3 56.5

表 2 化合物1～3的碳谱数据 Table 2 13C-NMR data of compounds 1—3

化合物2：白色晶体（二氯甲烷-丙酮），碘化铋钾反应呈现阳性，推测可能为生物碱类。通过比较¹H-NMR和¹³C-NMR数据，结合质谱数据知其相对分子质量为356，解析得其分子式为C₂₁H₂₆NO₄，结构见图 3。化合物2的¹H-NMR (400 MHz,CDCl₃) 谱共有26个氢信号。其中，芳香氢信号有5个，分别为δ 9.22 (1H,s),7.88 (1H,d, J = 9.1 Hz),7.55 (1H,d, J = 9.1 Hz),7.28 (1H,s),7.11 (1H,s)；甲基氢信号δ 2.79 (3H,t,J = 0.5 Hz)；亚甲基氢信号2组，分别为δ 3.80 (2H,m) 和3.35 (2H,m)；甲氧基氢信号4个，分别为δ 4.05 (3H,s),4.00 (3H,s),3.99 (3H,s),3.89 (3H,s)；-NH₂上氢信号1个，为δ 10.01 (2H,brs)。¹³C-NMR (100 MHz,CDCl₃) 谱中共出现21个碳信号，结合HMQC实验可知，4个甲氧基碳信号δ 60.0,56.7,55.8,55.7对应的4个甲氧基氢信号分别为δ 3.89,4.05,3.99,4.00；甲基碳信号δ 33.2对应的氢信号为δ 2.79 (3H,t,J = 0.5 Hz)；2个亚甲基碳信号δ 50.4,30.8对应的氢信号分别为δ 3.35 (2H,m),3.80 (2H,m)；芳香碳信号有14个，分别为δ 150.4,149.0,148.6,145.7,129.0,128.2,125.8,125.4,125.0,124.3,120.0,114.5,108.9,107.9。

图 3 化合物2的结构 Fig.3 Structure of compound 2

结合NMR谱，推测化合物2为阿朴菲类生物碱，与化合物1结构相似。与化合物1的NMR谱相比，化合物2中有δ 2.79 (3H,t,J = 0.5 Hz) 信号，推测为-CH₃，同时根据HMQC和HMBC实验得知有-CH₂-CH₃结构存在。芳香氢中，存在2个d峰，为苯环上邻位氢，为C-9、C-10位上H；根据HMQC实验，确定C-2、C-5、C-8、C-9、C-10上H归属分别为 δ 7.28,9.22,7.11,7.55,7.88；再根据HMBC谱（图 4），首先由H-10、H-9和H-8都与碳信号δ 124.3远程相关分，故定位C-8a；同理根据H-5、H-8和H-9都与碳信号δ 128.2远程相关，定位C-5a；根据Ar-CH₂和H-1确定C-1；由H-2、H-10和H-9都与δ 125.4远程相关，确定了C-10a位置；同样定位4个OCH₃各自的归属。

图 4 化合物2的HMBC相关 Fig.4 HMBC correlation of compound 2

综合以上信息，结合氢谱、碳谱数据，推测该化合物分子式为C₂₁H₂₆NO₄，并将该化合物的谱图数据与化合物1-[2-(N-甲基铵乙基)]-3,4,6,7-四甲氧基菲（C₂₁H₂₅NO₄）、化合物1（C₂₁H₂₆NO₄）^[7]比对发现，同为阿朴菲类生物碱，C-1位上-NH₂位置发生变化，经质谱确认相对分子质量与化合物1相同，为356。根据以上分析确定化合物2为1-乙胺甲基- 3,4,6,7-四甲氧基菲。经SciFinder检索确定化合物2为1个新化合物，命名为延胡索菲碱A。氢谱、碳谱数据见表 1、2。

化合物3：红色晶体，碘化铋钾反应呈现阳性，推测可能为生物碱类。根据¹H-NMR (400 MHz,CDCl₃) 和¹³C-NMR (100 MHz,CDCl₃) 数据（表 1、2），结合文献报道^[9]，解析得其分子式为C₂₁H₂₀NO₆，确定化合物3为氧代海罂粟达林碱。

延胡索历来作为镇痛良药，对其化学研究也主要在生物碱类成分上，有原小檗碱类、阿朴菲类生物碱等。本实验分离鉴定得1种新的生物碱，后续会对该化合物进一步研究，以期为延胡索今后理论研究、开发利用提供一定化学基础。