疏风解毒胶囊（SJC）是由虎杖、连翘、板蓝根、马鞭草、败酱草、柴胡、芦根、甘草8味药材组成的中药复方制剂，用于急性上呼吸道感染属风热证，症见发热、恶心、咽痛、头痛、鼻塞、流浊涕、咳嗽等。体内外实验研究表明，SJC具有抗流感病毒^[1]、肠道病毒^[2]及其他呼吸道病毒^[3]的作用，还具有保护急性肝损伤^[4]及病毒性心肌炎^[5]的作用，并具有抗菌、抗炎作用^[6]，该药经多年临床实践与应用，疗效确切^[7-10]。

SJC药味多、化学成分复杂，方中多种成分已有明确的药理活性，而现有的质量标准仅制定了采用薄层扫描法测定虎杖中大黄素的量^[11]，难以有效地控制药品的内在质量。本课题组前期已建立了HPLC法同时测定SJC中7种活性成分的方法^[12]，本研究将利用HPLC法进行SJC指纹图谱研究，为SJC质量控制提供参考和依据。

Agilent1100-高效液相色谱仪，美国安捷伦公司，配置自动进样器、柱温箱、UV检测器、Agilent 1100色谱工作站；Sartovius BT25S型电子天平（十万分之一），赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；色谱柱为Unitary C₁₈柱（250 mm×4.6 mm，5μm），浙江华谱新创科技有限公司；Mettler Toledo AB204-N型电子天平（万分之一），梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；AS3120超声仪，美国Autoscience公司。

14批SJC，由安徽济人药业有限公司提供，批号分别为140301、140203、140204、140105、140206、140207、140208、140209、140210、140211、140212、140213、140214、140215，分别编号为S1～S14。乙腈（色谱纯）、乙醇（分析纯），天津市康科德科技有限公司；甲酸，分析纯，天津市光复科技发展有限公司；去离子水。

Unitary C₁₈色谱柱（200 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为乙睛-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱：0～65 min，10%～30%乙腈；65～105 min，30%～80%乙腈；105～107 min，80%～10%乙腈；107～120 min，10%乙腈；体积流量1.0 mL/min；检测波长250 nm；柱温30℃；进样量10μL。

取SJC内容物1.0 g，精密称定，置于100 mL圆底烧瓶中，加入50 mL 70%乙醇水溶液，称定质量，回流提取2 h，冷却后称定质量，用70%乙醇溶液补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

精密吸取同一供试品溶液（S8），连续进样6次，按“2.1”项下方法测定。结果各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD分别为0.01%～0.39%、0.85%～2.64%，表明本方法精密度良好。

取SJC样品（S8）6份，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下方法进样测定。结果各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD分别为0.06%～0.29%和1.33%～2.82%，表明本方法重复性良好。

取同一供试品溶液（S8），室温放置，分别于0、4、8、12、24 h，按“2.1”项下方法进样测定。结果各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD分别为0.17%～0.97%和0.25%～2.47%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

根据14批SJC检测所得图谱，标定22个共有峰，采用国家药典颁布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”2012年版进行分析，以中位数法建立对照指纹图谱，见图 1。对14批样品进行相似度计算，结果S1～S14的相似度分别为0.920、0.974、0.951、0.960、0.972、0.974、0.952、0.977、0.974、0.960、0.915、0.919、0.920、0.962。结果表明不同批次的SJC之间相似性良好，质量稳定。

图 1 14批SJC HPLC指纹图谱及对照指纹图谱(R) Fig.1 HPLC fingerprints and control fingerprint (R) for 14 batches of SJC

采用SPSS 21.0软件对14批SJC指纹图谱的22个共有峰峰面积做标准化处理，再对其进行运算，主成分个数的提取原则为主成分对应的特征值大于1的前m个主成分。表 1结果表明，前4个主成分的累积贡献率可达92.28%，包含了大部分信息。其中，第1主成分特征值为10.92，贡献率为49.64%；第2主成分特征值为6.66，贡献率为30.26%；第3主成分特征值为1.54，贡献率为6.98%；第4主成分特征值为1.19，贡献率为5.40%。由因子负荷矩阵表（表 2）可以看出，第1主成分主要反映了来自色谱峰1、6～20的信息，第2主成分主要反映了来自色谱峰3～5、21、22的信息，第3主成分主要反映了来自色谱峰2的信息。前3个主成分代表了原始HPLC指纹图谱的主要信息。

表 1(Table 1)

表 1 特征值与贡献率 Table 1 Characteristic value and contribution rate 成分 特征值 贡献率/% 累积贡献率/% 1 10.920 49.637 49.637 2 6.656 30.257 79.894 3 1.537 6.985 86.879 4 1.188 5.398 92.276 5 0.516 2.347 94.624 6 0.451 2.051 96.674 7 0.331 1.503 98.177 8 0.205 0.930 99.108 9 0.133 0.603 99.710 10 0.064 0.290 100.000 11 4.437×10−16 2.017×10−15 100.000

表 1 特征值与贡献率 Table 1 Characteristic value and contribution rate

表 2(Table 2)

表 2 因子负荷矩阵 Table 2 Component matrix 色谱峰 主成分 1 2 3 4 1 0.704 −0.535 0.360 0.273 2 0.524 −0.374 0.690 0.297 3 0.477 0.694 −0.305 0.092 4 0.286 0.861 0.088 −0.155 5 0.507 0.740 0.396 −0.043 6 0.638 0.532 0.326 −0.366 7 0.692 −0.568 −0.274 −0.312 8 0.916 −0.225 −0.291 0.106 9 0.842 −0.482 −0.132 −0.023 10 0.837 −0.481 −0.134 −0.044 11 0.717 0.535 −0.217 −0.148 12 0.587 0.405 0.304 −0.543 13 0.937 −0.283 −0.058 −0.059 14 0.918 −0.217 0.061 −0.161 15 0.879 −0.442 −0.066 0.063 16 0.886 −0.150 0.076 0.386 17 0.822 0.536 −0.061 0.129 18 0.720 0.571 0.139 0.265 19 0.788 0.356 −0.150 0.097 20 0.625 0.484 −0.292 0.038 21 −0.310 0.911 0.128 0.129 22 −0.118 0.860 −0.261 0.362

表 2 因子负荷矩阵 Table 2 Component matrix

取虎杖药材、连翘药材、败酱草药材、马鞭草药材、甘草药材粉末（过三号筛）各约1.0 g，精密称定置具塞锥形瓶内，加50%甲醇超声处理30 min，取续滤液，过0.45μm微孔滤膜，即得。

另按照SJC处方及制备工艺依次制备缺虎杖、缺连翘、缺败酱草、缺马鞭草、缺甘草阴性样品，按“2.2”项下方法制得各阴性供试品溶液。

按“2.1”项下色谱条件进样分析，得到如图 2所示各样品色谱峰，通过保留时间和各样品比对分析，指纹图谱中标定的22个共有峰中，8、12、13、14、15、16、21、22号峰来自于虎杖，1、2、3、7、9、10号峰来自于连翘，5、6、11号峰来自于马鞭草，4号峰来自于败酱草，18、19号峰来自于甘草，17、20号峰未能归属到药材。

图 2 SJC指纹图谱中各共有峰归属色谱图 Fig.2 HPLC of each common peak attribution in fingerprint of SJC

利用HPLC-MSⁿ方法对SJC指纹图谱中各色谱峰进行检测，在对相关质谱数据进行数据分析和参照相关文献^[13]的基础上，对其中的16个主要色谱峰进行了结构鉴定和成分指认，相关实验数据及结果见表 3。

表 3(Table 3)

表 3 SJC指纹图谱主要色谱峰的指认结果[10] Table 3 Identification results of main peaks in SJC fingerprint 峰号 tR/min 质谱数据 分子式 相对分子质量 鉴定结果 1 7.281 463 [M＋H]+ C20H30O12 462.451 0 连翘酯苷E 5 13.040 243 [M＋H-Glu]+ C17H24O11 404.371 0 戟叶马鞭草苷 6 15.848 227 [M＋H-Glu]+, 195 [M＋H-Glu-CH4O]+ C17H24O10 388.371 6 马鞭草苷 7 27.324 641 [M＋H]+ C29H36O16 640.196 2 羟基化连翘酯苷A 8 28.659 391 [M＋H]+ C20H22O8 390.383 9 虎杖苷 9 30.060 557 [M＋Na]+, 355 [M＋H－Glu]+ C27H34O11 534.560 4 连翘苷 10 30.648 643 [M＋H2O＋H] + C29H36O15 624.595 8 连翘酯苷A 11 32.343 643 [M＋H2O＋H] + C29H36O15 624.595 8 毛蕊花糖苷 12 36.230 643 [M＋H2O＋H] +, 625 [M＋H]+ C29H36O15 624.595 8 异连翘酯苷A 13 45.268 271 [M＋H]+ C15H10O5 270.236 9 芦荟大黄素 14 58.174 433 [M＋H]+ C21H20O20 432.110 4 大黄素-8-O-葡萄糖苷 15 60.562 285 [M＋H]+ C15H8O6 284.220 4 大黄酸 18 78.012 841 [M＋H]+ C42H65NO16 839.962 6 甘草酸单铵盐 19 79.813 409 [M＋H]+ C25H28O5 408.494 3 3-羟基光甘草酚 21 92.305 271 [M＋H]+, 243 [M＋H－CO]+ C15H10O5 270.241 4 大黄素 22 105.207 255 [M＋H]+ C15H10O4 254.230 4 大黄酚

表 3 SJC指纹图谱主要色谱峰的指认结果[10] Table 3 Identification results of main peaks in SJC fingerprint

HPLC-MSⁿ分析条件：Thermo Fishier LCQ Advantage Max离子阱液质联用仪。Nitary C₁₈柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为乙睛-0.1%甲酸水溶液；检测波长250 nm；体积流量1 mL/min；柱温30℃；进样体积5μL。流动相梯度为0～65 min，10%～30%乙腈；65～105 min，30%～80%乙腈；105～107 min，80%～10%乙腈；107～120 min，10%～10%乙腈。离子化模式为ESI；离子检测模式为全扫描；分析模式为正离子模式；采集范围为m/z：100～1 000；毛细管温度为250℃；喷雾电压为4.5 kV；毛细管电压为25 V；鞘气体积流量为3.5 L/min；辅助气体积流量为2.0 L/min。

本实验考察对比了不同的流动相系统，包括甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.1%甲酸水溶液、乙腈-0.1%甲酸水溶液，结果表明，以乙腈-0.1%甲酸水溶液体系为流动相，采用梯度洗脱方法，能够达到较好的洗脱效果，各色谱峰的峰形和分离度较好，故选用乙腈-0.1%甲酸水溶液作为流动相系统。

利用DAD检测器对供试品溶液在200～400 nm进行全波长扫描，并分析比较在230、250、330 nm波长下HPLC色谱图，结果显示在250 nm波长下色谱峰信息较多，基线平稳，因此选择250 nm为检测波长。

本实验通过对比分析供试品溶液HPLC色谱图优选了供试品溶液制备方法，分别对提取方式、提取溶剂、提取时间、提取次数进行逐个考察，结果表明，采用70%乙醇回流提取2 h时，供试品色谱图中色谱峰数量较多，提取收率较高，故选择此法作为供试品溶液制备方法。

本实验建立了SJC的HPLC指纹图谱，共标定了22个共有峰，计算了14批SJC的相似度均大于0.9，表明不同批次SJC在化学成分组成上差异较小，质量稳定。同时采用HPLC-MS²方法对其中主要色谱峰进行了药材归属和成分指认。

本实验所建立的方法操作简单、稳定性好、结果可靠，能够全面反映SJC中多种成分的有无及成分间的比例，将建立的SJC特征图谱用于其生产过程，可为该产品提供更全面可靠的控制手段。