天舒胶囊是在金•刘完素《宣明论方》中的大川芎方基础上研究开发的现代中药制剂，由川芎、天麻2味药组成，具有活血平肝、通络止痛之功效，治疗瘀血阻络肝阳上亢所致的头痛诸证，收载于《中国药典》2010年版一部，其标准中规定采用HPLC- UV分别测定指纹图谱和川芎、天麻中的指标性成分阿魏酸、天麻素的量，用于天舒胶囊质量的评价。天舒胶囊处方中药味川芎、天麻和原方大川芎方的体内外化学成分分析已有文献报道^{[1, 2, 3, 4]}，但该制剂经提取浓缩等工序处理后其物质效应基础可能区别于大川芎方，关于天舒胶囊药效物质基础研究的报道较少^[5]，尚未见其化学成分及入血成分研究，本研究应用UPLC-Q-TOF-MS技术分析了天舒胶囊的化学成分及其入血成分，确定了除阿魏酸和天麻素外更多的有效成分，共推断出24个化学成分，其中5个来源于天麻，其他19个来源于川芎；为其体内物质基础研究及质量标准的完善奠定了基础。

Agilent 1290超高压液相色谱仪，Agilent 6538 Q-TOF质谱仪（美国Agilent公司）；BP211D型电子分析天平（德国Sartorius公司）；Centrifuge 5415D高速离心机（德国Eppendorf公司）；Milli-Q Academic纯水机（美国Millipore公司）；GL-88B旋涡混合器（江苏海门其林贝尔仪器制造有限公司）；KQ-250DB型超声波清洗仪（昆山市超声波仪器有限责任公司）。

天舒胶囊（批号121003，江苏康缘药业股份有限公司）；对照品阿魏酸（批号110773-200701）、咖啡酸（批号110885-200102）、盐酸川芎嗪（批号110817-201006）、天麻素（批号110807-200605）、欧当归内酯A（批号111826-201102）、Z-藁本内酯（批号111737-201102）和5-羟甲基糠醛（批号111626- 201007）均购于中国食品药品检定研究院。肝素钠（国药集团化学试剂有限公司）；甲醇（色谱纯，Merck公司）；甲酸（色谱纯，Fluka公司）；Millipore超纯水。

SD健康雄性大鼠，体质量（400±50）g，SPF级，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，生产许可证号SCXK（沪）2008-0016。

色谱条件：Proshell 120 SB-C₁₈色谱柱（150 mm×4.6 mm，2.7 μm），柱温40 ℃；流动相A为甲醇，B为0.1%甲酸水溶液，线性梯度洗脱，0～5 min，5%～15% A；5～35 min，15%～95% A；35～40 min，95%～100% A；体积流量0.5 mL/min；进样量为10 μL；检测波长为276 nm。

质谱条件：电喷雾电离源（ESI），正负离子全扫描检测，扫描范围m/z 100～1 100，加热毛细管温度325 ℃，干燥气体积流量9 L/min，喷雾器压力310 kPa，毛细管电压4 000 V（正离子模式），3 500 V（负离子模式），碎裂电压140 V，锥孔电压65 V。

取阿魏酸、咖啡酸、盐酸川芎嗪、天麻素、5-羟甲基糠醛、欧当归内酯A和Z-藁本内酯对照品适量，精密称定，用甲醇制成质量浓度分别为10、10、10、10、12、13和17 μg/mL的混合对照品溶液。

取天舒胶囊内容物，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入50%甲醇25 mL，超声（功率250 W，频率40 kHz）处理30 min，放冷，离心，取上清液，作为天舒胶囊UPLC-Q-TOF-MS分析的供试品溶液。

取天舒胶囊内容物，用0.5%羧甲基纤维素钠溶液配制成每100毫升含天舒胶囊18 g的样品溶液。

SD健康雄性大鼠，体质量（400±50）g，给药前不禁食，不禁水，给药前眼眶采血取空白血浆后给药，ig给药天舒胶囊样品溶液3.6 g/kg后30 min对大鼠进行眼眶取血1.0 mL，以肝素抗凝，4 000 r/min离心10 min收集上清液，血浆于-20 ℃冰冻保存。

取空白血浆和给药血浆约0.8 mL，分别加入50 μL 1%甲酸水溶液和500 μL甲醇，涡旋30 s，超声（功率250 W，频率40 kHz）处理3 min，12 000 r/min离心5 min，转移上清液，残渣再加入500 μL甲醇，涡旋30 s，超声处理3 min，12 000 r/min离心5 min，合并上清液，40 ℃氮气吹干，残渣加入200 μL甲醇溶解，12 000 r/min离心5 min，转移上清液进行分析。

天舒胶囊供试品溶液正、负总离子流图见图 1，结合对照品及相关文献数据^{[1, 2, 3, 4]}对比进行化学成分确认（表 1），共推断出24个化学成分，通过与天麻和川芎在相同条件下获得的TIC图和质谱信息比较，其中TIC图中1、2、3、5和6号峰5个化学

图 1 天舒胶囊276 nm下的液相色谱图 (A) 和总离子流图 (B-正离子，C-负离子)Fig. 1 HPLC (A) and total ion chromtogram (B-kation,C-anion) of Tianshu Capsual (at 276 nm)

表 1(Table 1)

表 1 天舒胶囊化学成分UPLC-Q-TOF-MS数据及结果推测 Table 1 Speculation and results on UPLC-Q-TOF-MS data of chemical constituents in Tianshu Capsual 编号 tR/min 一级离子 测定值 理论值 误差 分子式 化合物 1*+ 7.23 [M＋NH4]+ [M＋Cl]- 304.139 8 321.076 0 304.139 1 321.074 7 -2.30 -4.00 C13H18O7 天麻素 2*+ 8.68 [M＋H]+ 127.031 5 127.031 7 1.60 C6H6O3 5-羟甲基糠醛 3 12.52 [M＋NH4]+ [M－H]- 478.156 1 459.114 2 478.155 5 459.114 4 -1.20 -0.40 C19H24O13 2-[4-(β-D-glucopyranosyloxy) benzyl] citrate 4 13.89 [M＋H]+ [M－H]- 355.103 1 353.086 5 355.102 4 353.087 8 -2.00 3.70 C16H18O9 咖啡酰奎宁酸 5 16.32 [M－H]- 727.210 5 727.209 1 -1.90 C32H40O19 巴利森苷C 6 17.68 [M－H]- 995.305 2 995.303 8 -1.40 C45H56O25 巴利森苷 7*+ 18.71 [M＋H]+ [M－H]- 195.065 4 193.050 8 195.065 2 193.050 6 -1.00 -1.00 C10H10O4 阿魏酸 8 19.79 [M＋H]+ [M＋Na]+ [2M＋Na]+ 227.127 9 249.109 8 475.230 9 227.127 8 249.109 7 -0.40 -0.40 C12H18O4 洋川芎内酯J 9+ 21.82 [M＋H]+ [M＋Na]+ [2M＋Na]+ 225.111 6 247.093 6 471.192 0 225.112 1 247.094 1 2.20 2.00 C12H16O4 洋川芎内酯I 10+ 22.74 [M＋H]+ [M＋Na]+ [2M＋Na]+ 225.111 4 247.093 4 471.197 7 225.112 1 247.094 1 3.10 2.80 C12H16O4 洋川芎内酯H 11 25.16 [M－H]- 221.082 8 221.081 9 -4.10 C12H14O4 洋川芎内酯D 12 26.77 [M＋H]+ [M－H]- 209.117 5 207.103 7 209.117 2 207.102 7 -1.40 -4.80 C12H16O3 洋川芎内酯G 13 27.43 [M＋H]+ [M－H]- 207.101 3 205.087 6 207.101 6 205.087 0 1.40 -2.90 C12H14O3 洋川芎内酯F 14+ 28.68 [M＋H]+ 193.122 8 193.122 3 -2.60 C12H16O2 洋川芎内酯A 15 28.89 [M＋H]+ 191.106 8 191.106 7 -0.50 C12H14O2 丁基苯酞 16 30.09 [M＋H]+ 195.138 3 195.138 0 -1.50 C12H18O2 蛇床内酯 17 30.26 [M＋H]+ 191.107 2 191.106 7 -2.60 C12H14O2 E-藁本内酯 18*+ 30.78 [M＋H]+ 191.106 1 191.106 7 3.10 C12H14O2 Z-藁本内酯 19 31.62 [M＋H]+ [M＋NH4]+ 381.206 5 398.233 6 381.206 0 398.232 6 -1.30 -2.50 C24H2 8O4 dimer 20 33.46 [M＋H]+ [M＋Na]+ 383.221 6 405.203 4 383.221 7 405.203 6 0.26 0.49 C24H30O4 dimer 21 33.70 [M＋H]+ [M＋NH4]+ 381.208 1 398.233 0 381.206 0 398.232 6 -5.50 -1.00 C24H2 8O4 dimer 22 33.88 [M＋H]+ [M＋NH4]+ 381.207 7 398.233 7 381.206 0 398.232 6 -4.40 -2.80 C24H2 8O4 欧当归内酯A 23 34.15 [M＋H]+ [M＋NH4]+ 381.205 9 398.232 8 381.206 0 398.232 6 0.26 -0.50 C24H2 8O4 dimer 24 34.42 [M＋H]+ [M＋Na]+ 383.222 5 405.205 1 383.221 7 405.203 6 -2.10 -3.70 C24H30O4 dimer *经过对照品比对鉴定的化合物；+为质量标准中控制的化合物 *compounds identified by comparison on reference substances; +compounds controlled in quality standards

表 1 天舒胶囊化学成分UPLC-Q-TOF-MS数据及结果推测 Table 1 Speculation and results on UPLC-Q-TOF-MS data of chemical constituents in Tianshu Capsual

成分来源于天麻，其他19个成分来源于川芎，为酚酞类成分、苯酞类成分和苯酞二聚体化合物。色谱峰19、20、21、23和24均为苯酞二聚体化合物，准分子离子峰为m/z 381.2 [M＋H]⁺，可能为riligustilide和tokinolide B，准分子离子峰为m/z 383.2 [M＋H]⁺ 可能为senkyunolide P，但由于质谱相似及无对照品，难以进行区分。

对比空白血浆、给药血浆和天舒胶囊TIC图（图 2、图 3），仅发现阿魏酸（ferulic acid，7号峰）和洋川芎内酯D（senkyunolide D，11号峰）为天舒胶囊入血成分。再根据“2.6”项中天舒胶囊推断的24个化合物，选择丰度相对较高的离子作为特征目标离子，分别从空白血浆、给药血浆和天舒胶囊中获得对应化合物的提取离子流图。对获得的3个提取离子流图进行比较，在给药血浆和天舒胶囊中对应位置共同存在而在空白血浆中未出现的色谱峰，推断为吸收入血原型成分。依据此方法，共发现13个吸收入血成分，分别为天麻素（gastrodin，1号峰）、阿魏酸（ferulic acid，7号峰）、洋川芎内酯J（senkyunolide J，8号峰）、洋川芎内酯I（senkyunolide I，9号峰）、洋川芎内酯H（senkyunolide H，10号峰）、洋川芎内酯D（senkyunolide D，11号峰）、洋川芎内酯G（senkyunolide G，12号峰）、洋川芎内酯A（senkyunolide A，14号峰）、丁基苯酞（butylphthalide，15号峰）、蛇床内酯（cnidilide，16号峰）、E-藁本内酯（E-ligustilide，17号峰）、Z-藁本内酯（Z-ligustilide，18号峰）和欧当归内酯A（levistolide A，22号峰）。

A-空白血浆 B-给药血浆 C-天舒胶囊A-blank plasma B-plasma with administration C-Tianshu Capsual 图 2 吸收入血化学成分正离子模式下提取离子流图Fig. 2 Extraction ion chromatogram of chemical constituents obsorbed in plasma under kation patten

A-空白血浆 B-给药血浆 C-天舒胶囊A-blank plasma B-plasma with administration C-Tianshu Capsual图 3 吸收入血化学成分负离子模式下提取离子流图Fig. 3 Extraction ion chromatogram of chemical constituents obsorbed in plasma under anion patten

由于给药10倍临床剂量后血浆中成分的量仍比较低，而TIC图上包含了所有化合物的峰，内源性物质干扰严重，从总离子流图中很难直接观测到原型成分，通过总离子流色谱图对比，仅能观察到2个入血成分。根据天舒胶囊推断的24个化合物，选择丰度相对较高的离子作为特征目标离子，分别从空白血浆、给药血浆和天舒胶囊中获得对应化合物的提取离子流图，然后进行入血成分对比分析，不仅大大提高了分析灵敏度，而且还提高了选择性。

实验考察了固相萃取小柱对血浆样品的处理，结果固相萃取小柱处理后未能提高检测灵敏度。又分别考察了有机溶剂法和加酸法处理血浆的效果，结果表明加酸法优于有机溶剂法，因此采用加酸法处理血浆样品。

本研究考察了ig 1倍、3倍和10倍临床剂量的给药剂量，结果给药10倍临床剂量的血浆EIC图峰的数目最多且响应值较高，故选定10倍临床剂量为给药剂量。分别在给药后15、30、60和120 min后进行眼眶取血，测定分析，结果给药30 min后血浆EIC图中峰的数目最多且响应值较高，故选定给药后30 min眼眶取血。

本实验对天舒胶囊化学成分和入血成分进行了研究，推断出天舒胶囊中24个化学成分，其中5个化学成分来源于天麻，其他19个成分来源于川芎，给药后血浆中共发现13个原型成分，对于研究天舒胶囊体内物质基础及质量标准的完善具有重要意义。