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伸筋草Lycopodii Herba为石松科植物石松Lycopodium japonicum Thunb. 的干燥全草[1],古称石松,最早记载于唐《本草拾遗》[2]:“生石上似松,高一、二尺”。伸筋草全国范围内分布广泛,在海拔2 000 m以下较多。伸筋草所含生物碱种类丰富,此外,还含有三萜类、挥发油及其他成分[3]。其味微苦、辛,性温,归肝、脾、肾经;具有祛风除湿、舒筋活络的功能。现代药理研究表明其具有抗炎、镇痛、抗菌、抑制乙酰胆碱酯酶活性等作用。临床常用于治疗类风湿性关节炎、颈椎病和急慢性软组织损伤等疾病[4,5,6,7]。为进一步了解伸筋草化学成分,探讨开发利用伸筋草药用资源,对其化学成分及药理作用等方面研究进展进行综述。1 化学成分
迄今为止,从伸筋草中发现的化合物结构类型主要有生物碱类、三萜类,此外还含有少量蒽醌类成分及挥发油等。 1.1 生物碱类
石松生物碱是一类特殊的杂环生物碱,其基本骨架主要是由C16N和C16N2组成的三环或四环化合物,也有少量生物碱是C11N、C15N2、C22N2或C27N3型骨架。Ayer根据生物碱的结构特点将其分为4类:lycopodine型、lycodine型、fawcettimine型和miscellaneous型,代表化合物分别为石松碱(lycopodine)、石松定碱(lycodine)、法西亭明碱(fawcettimine)和phlegmarine,结构式见图 1。4种 类型母核的C环和D环都有相同的构型,故推断它们之间存在共同的生物起源和转换关系[8,9,10]。
![]() | 图 1 伸筋草中4种石松生物碱的代表化合物 Fig. 1 Representative compounds of four kinds of lycopodium alkaloids from Lycopodii Herba |
近年来,对伸筋草生物碱成分的研究越来越多,不断有新的生物碱发现[11,12,13,14,15,16]。伸筋草主要含有前3种类型的生物碱。 1.1.1 Lycopodine型生物碱
该类型生物碱发现最早,数量最多。其结构一般为含有1个顺式喹诺里嗪(quinolizine)环的4个叠六元环结构(C-4和C-13相连),大部分C-5位有羰基,少数在C-6位;石松碱(1)是该类型的代表化合物,其羰基α位的C-4、C-6
和叔碳C-7位的氢原子容易被氧化成羟基,如4α,8β- dihydroxylycopodine(10)、8β-hydroxylycoposerramine K(21)、11β-hydroxy-12-epilycodoline(14);其N原子可以被氧化,如miyoshianine C(23)。此类化合物A、B和C环较稳定,骨架变化主要集中在D环,该类型化合物见表 1和图 2。
![]() | 图 2 伸筋草中lycopodine型石松生物碱结构式 Fig. 2 Structures of lycopodine-type lycopodium alkaloids from Lycopodii Herba |
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表 1 伸筋草中lycopodine型石松生物碱 Table 1 Lycopodine-type lycopodium alkaloids from Lycopodii Herba < td width="72%" valign="top" style='width:72.06%;padding:0cm 5.4pt 0cm 5.4pt; height:11.35pt'> clavolonine |
目前发现具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的石松碱大部分出自此类化合物,其结构一般也是四环,与lycopodine型生物碱的区别是喹诺里嗪环(A+C环)转化成分开的吡啶或吡啶酮A环和六氢吡啶C环。其代表性化合物为石松定碱(29),该类型化合物见表 2和图 3。
![]() | 图 3 伸筋草中lycodine型石松生物碱结构式 Fig. 3 Structures of lycodine-type lycopodium alkaloids from LycopodiiHerba |
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表 2 伸筋草中lycodine型石松生物碱 Table 2 Lycodine-type lycopodium alkaloids from Lycopodii Herba |
此类化合物为lycopodine型的C4-Cl3键断开形成C4-Cl2键的结果。与N原子相连的叔碳C-13化学性质不稳定,易被氧化成羟基或断开C13-N键形成C13-羰基。其代表性的化合物为法西亭明碱(35),其已被证实为醇胺式和酮胺式的平衡体,由此演化成醇胺类(carbinol- amine form)和酮胺类(keto-amine form)两大部分,醇胺类是N原子与C13相连的fawcettimine类化合物,如lycopoclavamine A(34);酮胺类生物碱没有N-C13键,如palhinine A(41)。此外,近年来研究发现,伸筋草中还含有新型生物碱,如Wang等[14]从伸筋草提取物中发现3种新的生物碱:lycojaponi- cumin A~C(44~46),其C4-C9连接方式为首次发现,lycojaponicumin A~B是伸筋草中首次发现的具有5/5/5/5/6的五环化合物。该类型化合物见表 3和图 4。
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表 3 伸筋草中fawcettimine型石松生物碱 Table 3 Fawcettimine-type lycopodium alkaloids from Lycopodii Herba |
![]() | 图 4 伸筋草中fawcettimine型石松生物碱结构式 Fig. 4 Structures of fawcettimine-type lycopodium alkaloids from Lycopodii Herba |
伸筋草中也含有多种三萜类成分[17,18,19,20,21,22,23],Yan等[17]从伸筋草中分离得到7种三萜类化合物,其中 (3β,8β,14α,21α)-26,27-dinoronocerane-3,8,14,21-tetrol、(3β,8β,14α,21α)-26,27-dinoronocerane-3,8,14,21-tetrol、lycopodiin A均为首次从该植物中分离得到;史利利等[20]从伸 筋草正丁醇提取物中分离得到7种化合物,其中16-oxo-3α-hydroxyserrat-14-en-21α-ol和β-胡萝卜苷均为首次从伸筋草中分离得到。伸筋草中三萜类化合物见表 4和图 5。
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表 4 伸筋草中的三萜类成分 Table 4 SolubilityTriterpenoids from LycopodiiHerba |
![]() | 图 5 伸筋草中三萜类成分的结构 Fig. 5 Structures of triterpenoids from Lycopodii Herba |
伸筋草中还含有脂肪醇、蒽醌类[24],见表 5和图 6。此外,伸筋草中也含有挥发油和微量元素等,冯毅凡等[25]采用水蒸气蒸馏法从伸筋草中提取出挥发油,GC-MS共鉴定51个色谱峰;分析检索出其中的36种化学成分,均为首次从该植物中得到。杨再波等[26]采用SPE-GC-MS联用法从伸筋草中共分离出98个挥发油成分,鉴定了其中的81个化合物,主要为癸酸、B-马榄烯、反-石竹烯、白菖蒲油烯、A-古芸烯、A-姜黄烯、A-蛇床烯、D-杜松烯、A-雪松醇等组分。微量元素研究表明[27,28,29],伸筋草中含有Fe、Cu、Zn、Mn、Ca、Mg、K、Na、Cl、S等元素。
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表 5 伸筋草中的其他成分 Table 5 Other constituents from LycopodiiHerba |
![]() | 图 6 伸筋草中其他类化学成分的结构 Fig. 6 Structures of other constituents from LycopodiiHerba |
伸筋草临床应用历史悠久,主要含有生物碱和三萜类成分,有多种药理作用,如抗炎、镇痛、抗菌、抑制乙酰胆碱酯酶活性等。 2.1 抗炎、镇痛
曾元儿等[30]采用热板法、鼠耳二甲苯致炎法、醋酸扭体法、大鼠足跖浮肿法、醋酸引起腹膜炎法,比较伸筋草氯仿、正丁醇、水3个不同提取部位抗炎、镇痛的药效作用,结果显示3个不同提取部位均有较好的镇痛作用,其中以氯仿提取部位作用最强。张东军等[31]研究了伸筋草乙醇提取物的抗炎作用,并检测治疗后大鼠血液中的类风湿因子,用电 镜观察大鼠关节滑膜的形态学变化,结果表明伸筋草的乙醇提取物对佐剂性关节炎大鼠有明显的抗炎作用,且以低剂量组效果最佳。随后,很多专家学者对其抗炎镇痛机制进行了研究,吕衡等[32]研究伸筋草乙醇、正丁醇提取物对佐剂性关节炎大鼠血清类风湿因子(RF)及免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA)的影响,ELISA法和免疫透射比浊法进行检测,结果表明伸筋草乙醇、正丁醇提取物能有效降低大鼠血清中RF和IgA的量,乙醇提取物高剂量时能降低IgM的量,且无明显的副作用,说明伸筋草乙醇、正丁醇提取物可通过免疫调节机制对佐剂性关节炎发挥治疗作用。苗兵等[33]进一步研究了伸筋草乙醇提取物对佐剂性关节炎大鼠RF因子和血清细胞因子如白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的作用,ELISA法和放射性免疫法检测结果表明其均可使模型组RF和IL-1B、IL-6、TNF-A水平显著降低,提示伸筋草乙醇提取物可能是通过调节细胞因子的水平抑制RF,从而达到治疗或减轻类风湿关节炎的目的。敖鹏等[34,35]通过实验研究证明了伸筋草正丁醇、氯仿提取物同样具有抗炎作用,并推测其可能通过免疫调节机制,从而对佐剂性关节炎发挥治疗作用。 2.2 乙酰胆碱酯酶的抑制作用
He等[12]从伸筋草中发现的新生物碱lycojapodine A,并通过活性实验证明其具有乙酰胆碱酯酶的抑制作用和抗HIV-1活性。Yan等[17]从伸筋草中分离得到3个新的三萜类化合物和4种已知化合物,并对其进行活性筛选,发现lycopodiin A和3-epilycoclavanol具有抑菌活性,lycoclavanol和α-onocerin具有抑制乙酰胆碱酯酶活性。 2.3 抗血小板凝集
戴克敏等[36]通过豚鼠离体肠平滑肌实验,证明 了伸筋草总提取物有兴奋作用,且与总生物碱的量相吻合,并进行了抗血小板凝聚实验,结果表明其具有抗凝作用。邹桂欣等[37]对其抗血小板凝聚作用进行进一步研究,采用HPLC法对伸筋草石油醚、氯仿、正丁醇、水4个提取部位中α-玉柏碱的量进行分析,并进行抗家兔血小板聚集活性研究,结果 发现,α-玉柏碱与不同提取物均有抑制血小板聚集作用,为阐明伸筋草抗血小板聚集的药效物质提供实验依据。 2.4 清除活性氧自由基及抗氧化作用
张建胜等[38]利用光照核黄素产生超氧阴离子自由基,Fenton反应产生羟自由基(•OH),用分光光度法研究了伸筋草体外清除活性氧自由基的作用,结果表明伸筋草能有效清除活性氧自由基,最大清除率可达79.72%。对Fenton反应产生的•OH最大清除率高达94.04%。并用硫代巴比妥酸(TBA)分光光度法研究伸筋草对•OH诱发卵磷脂脂质过氧化损伤的抑制作用,结果表明对卵磷脂脂质过氧损伤有显著抑制作用。然而伸筋草中主要表现抗氧化活性的具体成分有待进一步研究。
邹桂欣等[39]采用HPLC法测定DPPH反应体系中DPPH变化,同时观察伸筋草石油醚、氯仿及正丁醇提取物不同时间对DPPH自由基的清除率。结果表明,伸筋草3种提取物对DPPH自由基的清除均有抑制作用,且呈明显的量效关系,不同提取物强度顺序为正丁醇提取物>氯仿提取物>石油醚提取物,其清除率随着作用时间增长而增加。 2.5 其他作用
伸筋草还可对中枢神经系统产生影响,张百舜等[40]通过研究发现伸筋草能显著延长戊巴比妥钠对小鼠的催眠作用,进一步证明该药具有一定的中枢神经抑制作用,但作用强度较弱,对士的宁等中枢兴奋药无抑制作用。对盐酸可卡因反应的影响实验显示伸筋草能增强可卡因的毒性反应,说明伸筋草对中枢特定部位有一定兴奋作用,其具体作用部位及有关化学有效成分值得进一步深入研究。 3 总结与展望
伸筋草含有多种生物碱、三萜类等化学成分。临床上除用于治疗类风湿性关节炎、颈椎病、强直性脊柱炎外,还用于治疗急性软组织损伤、高血压性眩晕、带状疱疹等,有长期的临床应用实践,值得进一步的研究与开发。但其质量评价研究还比较有限,在《中国药典》2010年版一部中,仅规定了显微鉴别、薄层色谱鉴别项目。目前的研究多集中在新的化学成分的研究和临床应用方面,但其中的药效物质基础的研究还不够深入。因此,对伸筋草的药效物质基础和质量控制开展进一步的研究显得尤为重要。除了建立以测定指标成分的量作为质控方法外,还应结合药效学实验,进行中药谱效学研究,实现伸筋草药材质量与药效的统一,为伸筋草药材的全面质量控制提供依据。
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