汤剂为传统中药剂型，由于煎煮不便、质量不稳定等问题限制了其临床应用，中药配方颗粒是对传统中药饮片进行剂型改革的一类新产品，具有可直接冲服、服用剂量小、起效快等诸多优点^[1]。传统汤剂与中药配方颗粒中主要化学成分基本一致，但其量不尽相同。六味地黄汤方出自钱乙《小儿药证直诀》，是滋阴补肾的祖方^[2]。由熟地、酒萸肉、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻6味药组成，毛蕊花糖苷、马钱苷、丹皮酚、尿囊素、茯苓酸和23-乙酰泽泻醇B是本方中各味药的有效成分^{[3, 4, 5, 6]}。本实验通过对这6种有效成分进行定量比较，以探讨中药配方颗粒在中药复方配伍中应用的可行性。

高效液相色谱仪，包括LC-10A型高效液相色谱仪、SPD-10A紫外检测器、Anastar色谱工作站，天津奥特赛恩斯仪器有限公司。

对照品毛蕊花糖苷（批号111530-201310，质量分数93.3%）、马钱苷（批号111640-201005，质量分数99.2%）、尿囊素（批号111501-200202，质量分数＞98%）、丹皮酚（批号110708-200506，质量分数＞98%）、23-乙酰泽泻醇B（批号111846-201203，质量分数99.5%），均购于中国食品药品检定研究院；茯苓酸（批号20140801/span>，天津丹溪国药研究所提供，质量分数＞98%）。

熟地黄为玄参科植物地黄Rehmannia glutinasa Libosch. 干燥块根的炮制加工品、酒萸肉为山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Sieb. et Zucc. 的干燥成熟果肉，除去杂质和残留果核、牡丹皮为毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr. 的干燥根皮、茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos (Schw.) Wolf的干燥菌核、山药为薯蓣科植物薯蓣Dioscrea opposite Thunb. 的干燥根茎、泽泻为泽泻科植物泽泻Alisma orientale (Sam.) Juzep. 的干燥块茎，均购于天津饮片厂，由天津药物研究院魏吉城研究员鉴定。甲醇、乙腈为色谱纯，水为蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

熟地黄16 g、酒萸肉8 g、牡丹皮6 g、山药8 g、茯苓6 g、泽泻6 g。

取上述处方中的6味饮片，分别按煎煮、浓缩、干燥、制粒的工艺制成配方颗粒。每1克配方颗粒相当于饮片的量：熟地黄2.5 g、酒萸肉3.3 g、牡丹皮5.0 g、山药6.7 g、茯苓6.7 g和泽泻5.0 g。

按处方比例称取以上6味饮片，加水200 mL，浸泡30 min，煎煮45 min，倒出煎液，药渣加水150 mL煎煮45 min，合并煎液，调整体积至200 mL，备用。

称与饮片相当量的配方颗粒，混合，加80～100 ℃的水150 mL，搅拌溶解，冷却后加水至200 mL，备用。

毛蕊花糖苷、马钱苷、丹皮酚、尿囊素、茯苓酸、23-乙酰泽泻醇B的色谱条件及系统适应性试验见表 1。对照品、供试品溶液色谱图见图 1。进样量均为10 μL。体积流量均为1.0 mL/min。

表 1(Table 1)

表 1 色谱条件及系统适应性试验 Table 1 Chromatographic conditions and system suitability test 检测指标 色谱条件及系统适应性试验 毛蕊花糖苷 色谱柱为Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液（33∶67）；检测波长334 nm。理论板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于5 000 马钱苷 色谱柱为Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈-水（15∶85）；检测波长240 nm。理论板数按马钱苷峰计算应不低于5 000 丹皮酚 色谱柱为Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水（45∶55）；检测波长274 nm。理论板数按丹皮酚峰计算应不低于5 000 尿囊素 色谱柱为Kromsial NH2柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水（75∶25）；检测波长224 nm。理论板数按尿囊素峰计算应不低于5 000 茯苓酸 色谱柱为Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈-0.5%磷酸水溶液（83∶17）；检测波长210 nm。理论板数按茯苓酸峰计算应不低于5 000 23-乙酰泽泻醇B 色谱柱为Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈-水（73∶27）；检测波长208 nm。理论板数按23-乙酰泽泻醇B峰计算应不低于3 000

表 1 色谱条件及系统适应性试验 Table 1 Chromatographic conditions and system suitability test

图 1 对照品 (A)、传统汤剂 (B) 和配方颗粒 (C) 的HPLC图Fig.1 HPLC of references (A), traditional decoction (B) and formula granule (C)

分别取毛蕊花糖苷、马钱苷、丹皮酚、尿囊素、茯苓酸和23-乙酰泽泻醇B对照品适量，精密称定，加流动相、甲醇或乙腈稀释，制成质量浓度分别为12.3、8.7、7.7、14.5、0.9、2.2 μg/mL的对照品溶液。

分别精密量取传统汤剂和配方颗粒汤剂5、2、2 mL至10、25、25 mL量瓶中，再分别加甲醇、3 mL水与甲醇、甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得供毛蕊花糖苷、马钱苷、丹皮酚定量测定用供试品溶液；分别精密量取传统汤剂和配方颗粒汤剂5、10、5 mL，蒸干，用流动相、甲醇、乙腈溶解并转移至10、5、10 mL量瓶中，再用相应溶媒稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得供尿囊素、茯苓酸、23-乙酰泽泻醇B定量测定用供试品溶液。

分别取毛蕊花糖苷、马钱苷、丹皮酚、尿囊素、茯苓酸、23-乙酰泽泻醇B对照品适量，精密称定，用流动相或甲醇或乙腈制成质量浓度为102.2、144.2、127.6、120.5、89.9、217.4 μg/mL的对照品储备液。将6种对照品储备液制成一系列不同质量浓度的对照品溶液，按上述色谱条件进样分析，以进样量为横坐标，相应的峰面积值为纵坐标，进行线性回归，结果分别为毛蕊花糖苷A＝524 195.2 C－295.4，r＝0.999 9，线性范围81.76～408.80 ng；马钱苷A＝919 871.7 C＋929.8，r＝0.999 9，线性范围57.68～288.40 ng；丹皮酚A＝2 522 429.7 C－353.8，r＝0.999 7，线性范围25.52～255.20 ng；尿囊素A＝149 169.3 C－615.4，r＝0.999 8，线性范围48.2～771.2 ng；茯苓酸A＝603 465.0 C＋73.0，r＝0.999 9，线性范围3.60～35.96 ng；23-乙酰泽泻醇B A＝550 586.5 C－32.6，r＝0.999 8，线性范围17.39～86.96 ng。

分别吸取“2.2.2”项下对照品溶液，按上述色谱条件重复进样6次，测定峰面积值，其RSD值分别为0.43%、0.48%、0.33%、0.55%、0.61%、0.48%，结果表明仪器精密度良好。

分别精密吸取同一传统饮片汤剂供试品溶液，按上述色谱条件分别在0、2、4、6、8、24 h进样，测定峰面积值，其RSD值分别为0.57%、0.57%、0.46%、0.57、0.70%、0.51%，结果表明供试品溶液在24 h内稳定。

分别取“2.2.6”项下同一六味地黄方传统饮片汤剂，按“2.2.3”项下供试品溶液制备方法操作，平行制备6份，按上述色谱条件测定峰面积值，计算平均质量浓度及RSD值。结果分别为21.8 μg/mL及1.03%、107.1 μg/mL及1.12%、9.5 μg/mL及1.08%、28.3 μg/mL及0.90%、0.5 μg/mL及1.28%、5.2 μg/mL及1.11%。

分别精密量取“2.2.6”项下同一六味地黄方传统饮片汤剂，再对应添加毛蕊花糖苷对照品溶液（102.2 μg/mL）0.5 mL、马钱苷对照品溶液（28.8 μg/mL）4.0 mL、丹皮酚对照品溶液（2.6 μg/mL）4.0 mL、尿囊素对照品溶液（24.1 μg/mL）3.0 mL、茯苓酸对照品溶液（0.9 μg/mL）3.0 mL、23-乙酰泽泻醇B对照品溶液（4.3 μg/mL）3.0 mL，分别按“2.2.3”项下供试品溶液制备方法操作，平行制备6份，按上述色谱条件测定峰面积值，计算回收率及RSD值。结果平均回收率及RSD分别为99.59%及1.25%、100.21%及1.54%、100.25%及1.45%、100.13%及1.28%、99.83%及1.44%、99.79%及1.43%。

取传统汤剂与配方颗粒，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液。按上述色谱条件测定，并计算样品中毛蕊花糖苷、马钱苷、丹皮酚、尿囊素、茯苓酸和23-乙酰泽泻醇B的量。结果见表 2。

表 2(Table 2)

表 2 样品的测定结果 (n = 3) Table 2 Determination results of samples (n = 3) 制剂类型 质量分数/(μg∙g−1) 毛蕊花糖苷 马钱苷 丹皮酚 尿囊素 茯苓酸 23-乙酰泽泻醇B 传统汤剂 304.5 2 473.6 3 135.1 708.8 5.9 104.4 配方颗粒 298.6 3 685.7 706.5 714.2 17.4 217.8

表 2 样品的测定结果 (n = 3) Table 2 Determination results of samples (n = 3)

从表 2结果看，传统汤剂与配方颗粒中毛蕊花糖苷和尿囊素的量基本一致，这是由于毛蕊花糖苷和尿囊素的水溶性较好，易从饮片中提取出来；马钱苷、茯苓酸和23-乙酰泽泻醇B的量，配方颗粒明显高于传统饮片，这是由于配方颗粒的生产工艺所用溶媒量远远高于汤剂，煎煮时间又远远长于汤剂，这样提取的效率就明显高于汤剂；丹皮酚的量，配方颗粒明显低于传统饮片，这是由于丹皮酚为挥发性成分，在配方颗粒的生产过程中损失较大；加之在传统汤剂合煎过程中，中药中其余成分可能对丹皮酚的溶解起到促进作用，造成配方颗粒中丹皮酚的量比传统汤剂低。因此，针对某些含有易挥发性等不稳定成分的配方颗粒，应进行相应工艺参数的优化，达到最优的效果。

从化学成分的角度考虑，现有的配方颗粒的生产参数大多是合理的、科学的，大多可以替代传统汤剂使用，节省人力、物力、财力，方便患者，是具有前途的一类新产品。