中草药  2015, Vol. 46 Issue (13): 1883-1886
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山银花化学成分研究
温建辉1,2,3, 倪付勇1,2,3, 赵祎武1,2,3, 黄文哲1,2,3, 王振中1,2,3, 萧伟1,2,3     
1. 江苏康缘药业股份有限公司, 江苏 连云港 222001;
2. 中药制药过程新技术国家重点实验室, 江苏 连云港 222001;
3. 中药提取精制新技术重点研究室, 江苏 连云港 222001
摘要目的 研究华南忍冬Lonicera confusa干燥花蕾(山银花)的化学成分。方法 利用反复硅胶柱色谱, Sephadex LH-20、中压柱色谱及半制备液相色谱等方法分离纯化;通过核磁共振谱、质谱等光谱数据鉴定化合物结构。结果 分离得到10个化合物, 分别鉴定为绿原酸(1)、槲皮素(2)、木犀草素(3)、木犀草素-3'-O-α-L-鼠李糖苷(4)、芹菜素-7-O-α-L-鼠李糖苷(5)、反式桂皮酸(6)、对羟基苯甲醛(7)、2,5-二羟基苯甲酸-5-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(8)、苄基-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、脱落酸(10)。结论 化合物410首次从山银花中分离得到。
关键词山银花     木犀草素-3'-O-α-L-鼠李糖苷     苄基-β-D-吡喃葡萄糖苷     对羟基苯甲醛     脱落酸    
Chemical constituents from flower buds of Lonicera confuse
WEN Jian-hui1,2,3, NI Fu-yong1,2,3, ZHAO Yi-wu1,2,3, HUANG Wen-zhe1,2,3, WANG Zhen-zhong1,2,3, XIAO Wei1,2,3    
1. Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co., Ltd., Lianyungang 222001, China;
2. State Key Laboratory of New-tech for Chinese Medicine Pharmaceutical Process, Lianyungang 222001, China;
3. The Key Laboratory for the New Technique Research of TCM Extraction and Purification, Lianyungang 222001, China
Abstract: Objective To investigate the chemical constituents in the flower buds of Lonicera confusa. Methods The chemical constituents were isolated by repeated silica gel chromatography, Sephadex LH-20, medium pressure column chromatography, and semi-preparative HPLC, and their structures were elucidated by spectroscopic analyses and comparison of NMR data with those reported in literature. Results Ten compounds were isolated and identified to be chlorogenic acid (1), quercetin (2), luteolin (3), luteolin-3'-O-α-L-rhamnopyranoside (4), apigenin-7-O-α-L-rhamnopyranoside (5), trans-cinnamic acid (6), p-hydroxy benzaldehyde (7), gentisic acid-5-O-β-D-glucopyranoside (8), benzyl-β-D-glucoside (9), and abscisic acid (10). Conclusion Compounds 410 are obtained from this plant for the first time.
Key words: Lonicera confuse (Sweet) DC.     luteolin-3'-O-α-L-rhamnopyranoside     benzyl-β-D-glucoside     p-hydroxy benzaldehyde     abscisic acid    

山银花为忍冬科(Caprifoliaceae)忍冬属Lonicera Linn. 植物华南忍冬Lonice confusa (Sweet) DC. 的干燥花蕾,具有清热解毒之功效,药用历史悠久[1]。临床上山银花主要用于治疗痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温热发病等症[2];主要有挥发油类、黄酮类、有机酸类、苷类等化学成分[3]。本实验通过对山银花提取物进行系统化学成分研究,分离得到10个化合物,分别鉴定为绿原酸(chlorogenic acid,1)、槲皮素(quercetin,2)、木犀草素(luteolin,3)、木犀草素-3′-O-α-L-鼠李糖苷(luteolin-3′-O-α-L-rhamnopyranoside,4)、芹菜素-7-O-α-L-鼠李糖苷(apigenin-7-O-α-L- rhamnopyranoside,5)、反式桂皮酸(trans-cinnamic acid,6)、对羟基苯甲醛(p-hydroxy benzaldehyde,7)、2,5-二羟基苯甲酸-5-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(gentisic acid-5-O-β-D-glucopyranoside,8)、苄基-β-D-吡喃葡萄糖苷(benzyl-β-D-glucoside,9)、脱落酸(abscisic acid,10)。其中化合物410首次从山银花中分离得到。

1 材料与仪器

Agilent 1260高效液相色谱仪(美国Agilent公司),配自动进样器、四元泵、MWD检测器,制备柱(美国Agilent公司,250 mm×21.2 mm,7 μm);Bruker-AV-400型核磁共振光谱仪;AE240电子分析天平(瑞士 Mettler公司)。MULTISKAN MK3型酶标仪(Thermo Scientific,美国);Agilent 1290-6538液质联用仪(美国Agilent公司);XT5显微熔点测定仪(北京科仪电光仪器厂);2051型紫外-可见光分光光度仪;Sephadex LH-20(Pharmacia公司);柱色谱硅胶(200~300目,青岛海洋化工);甲醇、乙腈(色谱纯,Oceanpak公司,瑞典);甲酸(分析纯,南京化学试剂有限公司);95%乙醇(食用级,连云港长和酒业有限公司);水(三蒸水,自制);分析纯试剂(南京化学试剂有限公司)。

山银花药材于2013年5月购自安徽亳州(产地湖南溆浦),经南京中医药大学吴启南教授鉴定为忍冬科植物华南忍冬Lonicera confuse (Sweet) DC. 的干燥花蕾,标本(20130506)保存于江苏康缘药业股份有限公司标本室。

2 提取与分离

取山银花10.0 kg,以8倍量70%乙醇回流提取3次,每次2 h,提取液浓缩,得流浸膏7 L,将其混悬于水中,依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取,分别得到石油醚部位(146 g)、醋酸乙酯部位(268 g)、正丁醇部位(234 g)。醋酸乙酯萃取物经硅胶柱色谱,二氯甲烷-甲醇(100∶0→0∶100)进行梯度洗脱,经TLC检识合并得到10个部分(Fr. 1~10)。Fr. 2经反复硅胶柱色谱,二氯甲烷-甲醇(100∶1→8∶1)梯度洗脱,再经Sephadex LH-20柱色谱,以二氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脱纯化,得到化合物1(20 mg)、2(16 mg)、3(13 mg)。

Fr. 9经反复硅胶柱色谱,二氯甲烷-甲醇(100∶1→0∶100)梯度洗脱,得到8个部分Fr. 9-1~9-8,Fr. 9-5经反复硅胶柱色谱,二氯甲烷-甲醇(18∶1)洗脱,再经HPLC制备液相纯化,以17%乙腈作为流动相,体积流量20 mL/min,进样量600 μL,柱温为室温,检测波长210、230、326 nm得到化合物9(10 mg);Fr. 9-7经Sephadex LH-20柱色谱,二氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脱,再经HPLC制备液相纯化,以15%乙腈作为流动相,体积流量20 mL/min,进样量500 μL,柱温为室温,检测波长210、230、326 nm得到化合物10(5 mg)。

Fr. 10经反复硅胶柱色谱,二氯甲烷-甲醇(100∶1→0∶100)梯度洗脱,得到8个部分Fr. 10-1~10-8。Fr. 10-2经Sephadex LH-20柱色谱,二氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脱,再经HPLC制备液相纯化,以20%乙腈作为流动相,体积流量20 mL/min,进样量500 μL,柱温为室温,检测波长210、230、326 nm得到化合物6(9 mg)、8(6 mg);Fr. 10-5经Sephadex LH-20柱色谱,二氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脱,再经HPLC制备液相纯化,以18%乙腈作为流动相,体积流量20 mL/min,进样量500 μL,柱温为室温,检测波长210、230、326 nm得到化合物4(10 mg)、5(6 mg)、7(5 mg)。

3 结构鉴定

化合物1:白色粉末,mp 207~209 ℃,ESI-MS m/z: 353 [M—H]-,1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ: 7.55 (1H,d,J = 16.0 Hz,H-7′),7.04 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-2′),6.96 (1H,dd,J = 8.4,2.0 Hz,H-6′),6.77 (1H,d,J = 8.4 Hz,H-5′),6.25 (1H,d,J = 16.0 Hz,H-8′),5.32 (1H,m,H-3),4.15 (1H,m,H-5),3.72 (1H,dd,J = 8.4,3.2 Hz,H-4),2.23~2.04 (4H,m,H-2,6);13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6) δ: 177.8 (COOH),169.4 (C-9′),150.4 (C-4′),147.9 (C-7′),147.6 (C-3′),128.6 (C-1′),123.8 (C-6′),117.2 (C-5′,8′),116.0 (C-2′),76.9 (C-1),74.3 (C-4),72.8 (C-5),72.1 (C-3),39.6 (C-2),39.0 (C-6)。以上数据与文献报道基本一致[4],故鉴定化合物1为绿原酸。

化合物2:黄色粉末,mp 315~316 ℃,ESI-MS m/z: 303 [M-H]-1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ: 6.30 (1H,d,J = 1.8 Hz,H-6),6.51 (1H,d,J = 1.8 Hz,H-8),6.99 (1H,d,J = 8.1 Hz,H-5′),7.67 (1H,dd,J = 8.1,2.4 Hz,H-6′),7.81 (1H,d,J = 2.4 Hz,H-2′),9.39 (1H,s,3-OH),10.78 (1H,s,7-OH),12.15 (1H,s,5-OH);13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6) δ: 94.4 (C-8),99.1 (C-6),104.1 (C-10),115.8 (C-2′),116.2 (C-5′),120.9 (C-6′),121.4 (C-1′),136.7 (C-3),162.3 (C-9),145.7 (C-3′),146.9 (C-2),148.3 (C-4′),157.7 (C-7),176.5 (C-4)。以上数据与文献报道基本一致[5],故鉴定化合物2为槲皮素。

化合物3:黄色粉末,mp 328~330 ℃,ESI-MS m/z: 287 [M-H]-1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ: 6.20 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-6),6.45 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-8),6.69 (1H,s,H-3),6.91 (1H,d,J = 8.4 Hz,H-5′),7.44 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-2′),7.53 (1H,dd,J = 8.4,2.0 Hz,H-6′),9.63,9.94,10.80,12.99 (4H,s,4×-OH);13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6) δ: 94.0 (C-6),99.0 (C-8),103.0 (C-3),103.9 (C-10),113.6 (C-5′),116.2 (C-2′),119.2 (C-6′),121.7 (C-1′),145.9 (C-2),157.5 (C-3′),161.7 (C-5),164.1 (C-9),181.8 (C-4)。以上数据与文献报道基本一致[6],故鉴定化合物3为木犀草素。

化合物4:黄色粉末。1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ: 13.00 (1H,s,5-OH),10.00 (1H,s,7-OH),9.44 (1H,s,4′-OH),7.43 (1H,dd,J = 1.8,7.8 Hz,H-6′),7.41 (1H,d,J = 1.8 Hz,H-2′),6.91 (1H,d,J = 7.8 Hz,H-5′),6.76 (1H,s,H-3),6.74 (1H,d,J = 2.4 Hz,H-8),6.38 (1H,d,J = 2.4 Hz,H-6),5.13 (1H,d,J = 1.6 Hz,H-1″),3.20~3.79 (4H,m,H-2″~H-5″),1.20 (1H,d,J = 6.6 Hz,H-6″)。以上数据与文献报道基本一致[7],故鉴定化合物4为木犀草素-3′- O-α-L-鼠李糖苷。

化合物5:淡黄色粉末。1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ: 12.98 (1H,s,5-OH),7.92 (2H,d,J = 8.4 Hz,H-2′,H-6′),6.92 (2H,d,J = 8.4 Hz,H-3′,5′),6.85 (1H,s,H-3),6.83 (1H,d,J = 2.4 Hz,H-8),6.52 (1H,d,J = 2.4 Hz,H-6),5.02 (1H,d,J = 2.5 Hz,H-1″),3.75 (1H,m,H-5″),3.48 (2H,m,H-3″,H-4″),3.20 (1H,m,H-2″),1.19 (3H,d,J = 6.0 Hz,H-6″);13C-NMR (100 MHz,DMSO-d6) δ: 182.1 (C-4),163.5 (C-2),162.9 (C-7),161.3 (C-5,4′),156.6 (C-9),128.5 (C-2′,6′),121.3 (C-1′),116.1 (C-3′,5′),103.7 (C-10),102.9 (C-3),100.7 (C-6),94.9 (C-8),100.7 (C-1″),71.7 (C-2″),70.7 (C-3″),72.1 (C-4″),68.2 (C-5″),17.6 (C-6″)。以上数据与文献报道基本一致[8],故鉴定化合物5为芹菜素-7-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物6:无色针晶(甲醇),mp 133~135 ℃,ESI-MS m/z 147 [M-H]1H-NMR (400 MHz,CDCl3) δ: 7.80 (1H,d,J = 15.9 Hz,H-7),7.56 (1H,d,J = 8.0 Hz,H-2,6),7.43 (3H,m,H-3~5),6.48 (1H,d,J = 15.9 Hz,H-8);13C-NMR (100 MHz,CDCl3) δ: 172.1 (C=O),147.1 (C-3),134.1 (C-1′),130.7 (C-4′),128.9 (C-2′,6′),128.3 (C-3′,5′),117.1 (C-2)。以上数据与文献报道基本一致[9],故鉴定化合物6为反式桂皮酸。

化合物7:白色针晶(丙酮),mp 105~106 ℃,ESI-MS m/z: 121 [M-H]1H-NMR (400 MHz,CD3OD) δ: 9.75 (1H,s,H-7),7.75 (2H,d,J = 8.0 Hz,H-2,6),6.86 (2H,d,J = 8.0 Hz,H-3,5);13C-NMR (CD3OD,100 MHz) δ: 193.1 (C-7),165.4 (C-4),133.7 (C-2,6),130.6 (C-1),117.6 (C-3,5)。由以上数据与文献报道一致[10],故鉴定化合物7为对羟基苯甲醛。

化合物8:无色胶状物。1H-NMR (400 MHz,CD3OD) δ: 7.53 (1H,d,J = 3.0 Hz,H-6),7.04 (1H,dd,J = 3.0,8.4 Hz,H-4),6.67 (1H,d,J = 8.4 Hz,H-3),4.71 (1H,d,J = 7.2 Hz,H-1′),3.84 (1H,d,J = 12.0 Hz,H-6′a),3.67 (1H,dd,J = 3.6,12.0 Hz,H-6′b),3.35~3.41 (4H,m,H-2′~5′);13C-NMR (100 MHz,CD3OD) δ: 175.7 (C-7),158.0 (C-5),150.9 (C-2),123.8 (C-4),120.2 (C-1),119.6 (C-6),117.5 (C-3),103.7 (C-1′),75.0 (C-2′),78.0 (C-3′),71.3 (C-4′),77.9 (C-5′),62.5 (C-6′)。以上数据与文献报道基本一致[11],故鉴定化合物8为2,5-二羟基苯甲酸- 5-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物9:白色无定形粉末;ESI-MS m/z: 293 [M+Na]1H-NMR (400 MHz,CD3OD) δ: 7.32 (2H,d,J = 7.5 Hz,H-2,6),7.23 (2H,t,J = 7.5 Hz,H-3,5),7.17 (1H,t,J = 7.5 Hz,H-4),4.83 (1H,d,J = 11.5 Hz,H-7a),4.57 (1H,d,J = 11.5 Hz,H-7b),4.26 (1H,d,J = 8.0 Hz,H-1′),3.80 (1H,dd,J = 2.0,11.5 Hz,H-6′a),3.59 (1H,dd,J = 5.5,11.5 Hz,H-6′b),3.27~3.14 (5H,m,H-2′~5′);13C-NMR (100 MHz,CD3OD) δ: 137.9 (C-1),128.1 (C-2,6),128.0 (C-3,5),127.5 (C-4),102.1 (C-1′),76.9 (C-5′),76.9 (C-3′),74.0 (C-2′),70.6 (C-7),70.5 (C-4′),61.6 (C-6′)。以上数据与文献报道基本一致[12],故鉴定化合物9为苄基-β- D-吡喃葡萄糖苷。

化合物10:白色无定形粉末,ESI-MS m/z: 287 [M+Na]+1H-NMR (400 MHz,CDCl3) δ: 7.92 (1H,d,J = 16.0 Hz,H-4),6.38 (1H,d,J = 16.0 Hz,H-5),5.82 (1H,s,H-8),5.75 (1H,s,H-2),2.54 (1H,d,J = 17.0 Hz,H-10a),2.14 (1H,d,J = 17.0 Hz,H-10b),2.05 (3H,s,15-CH3),1.90 (3H,s,14-CH3),1.07 (3H,s,12-CH3),1.03 (3H,s,13-CH3);13C-NMR (100 MHz,CDCl3) δ: 197.2 (C-9),167.1 (C-1),163.1 (C-3),151.0 (C-7),138.3 (C-5),128.6 (C-4),127.3 (C-8),118.6 (C-2),80.0 (C-6),50.3 (C-10),42.2 (C-11),24.7 (C-14),23.5 (C-13),21.2 (C-15),19.1 (C-12)。以上数据与文献报道基本一致[13],故鉴定化合物10为脱落酸。

参考文献
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