桔梗Platycodon grandiflorum (Jacq.) A. DC. 为桔梗科（Campanulaceae）桔梗属Platycodon A. DC.多年生草本植物，其以根入药，又被称作土人参、白药、和尚头等，具有宣肺、利咽、祛痰、排脓等 功效，主治咳嗽痰多、胸闷不畅、咽痛音哑及肺痈吐脓^[1]，广泛用于各种方剂中。

桔梗的原植物分布区域非常广泛。在我国桔梗产于华北、东北、华中、华东及西南地区。习惯上将产于吉林、辽宁、黑龙江、河北、山东、山西及内蒙古的商品桔梗称为“北桔梗”；产于安徽、江苏、浙江的称为“南桔梗”；产于四川的称为“川桔梗”^[2]。由于我国桔梗资源分布广泛，产地的自然环境差异大，故桔梗中主要药用成分桔梗皂苷的量存在差异，从而导致各地桔梗的品质参差不齐，因此科学地评价桔梗的质量十分有意义。本研究采用改进的称重法及HPLC法对全国17个不同省份的桔梗药材中的桔梗总皂苷和桔梗皂苷D量进行了测定，旨在为桔梗质量标准的完善提供理论依据。

菲恰尔GL-16A型离心机（上海菲恰尔分析仪器有限公司）；XMTD-2MA型电热恒温水浴箱（龙口市先科仪器公司）；303-2型电热恒温干燥箱（江苏省东台县电器厂）；美国安捷伦Agilent1100型高效液相色谱仪（美国）；DAD检测器；Waters Symmetry-C₁₈型色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；BP221S型电子天平（Sartorius公司）；KQ-600KDE型超声提取仪（昆山市超声仪器有限公司）；RE-52旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）。

桔梗皂苷D对照品（质量分数≥98%，批号20121105）购自上海金穗生物科技有限公司；甲醇（色谱纯，莱阳市康德化工有限公司）；甲醇（分析纯，天津市恒兴化学试剂制造有限公司）；乙醚（分析纯，烟台市双双化工有限公司）；正丁醇（分析纯，莱阳市康德化工有限公司）。

桔梗药材购买于当地药房或药材市场，药材来源见表 1。所有药材均由胡正海教授鉴定为桔梗Platycodon grandiflorum (Jacq.) A. DC.。

表 1(Table 1)

表 1 样品来源及编号 Table 1 Sources and numbers of samples 编号 来源 编号 来源 1 江苏 10 江西 2 四川 11 安徽 3 河北 12 湖北 4 黑龙江 13 河南 5 辽宁 14 福建 6 陕西 15 宁夏 7 湖南 16 浙江 8 云南 17 山东 9 内蒙古

表 1 样品来源及编号 Table 1 Sources and numbers of samples

精密称定样品粗粉4 g置于50mL离心管中，加入40 mL甲醇，超声提取50 min，室温下5 000 r/min离心10 min，提取滤过液。重复3次提取离心，合并3次滤液。滤液于电热恒温水浴箱上加热浓缩至15～20 mL，放冷，加乙醚50 mL，振摇，放置 澄清，弃去上清液。沉淀分次加甲醇（20、10、5 mL），加热使沉淀溶解，放冷，滤过，合并甲醇液。甲醇液加热浓缩至15～20 mL，放冷，加乙醚50 mL，振摇，同上法处理，合并甲醇液，置已事先干燥至恒重的蒸发皿中。将蒸发皿中甲醇液于加热恒温水浴箱中蒸发至干，然后于电热干燥箱中干燥至恒定质量。蒸发皿前后质量之差即为桔梗总皂苷质量，然后计算得出药材中桔梗总皂苷量，结果见表 2。

表 2(Table 2)

表 2 不同产地桔梗中桔梗总皂苷和桔梗皂苷D量 Table 2 Contents of total platycodin and platycodin D in Platycodi Radix from different habitats 产地 桔梗总皂苷/% 桔梗皂苷D/% 1 3.67 0.134 2 4.18 0.130 3 5.04 0.017 4 10.27 0.075 5 8.57 0.143 6 3.51 0.039 7 3.31 0.385 8 3.24 0.654 9 3.56 0.028 10 7.50 0.138 11 8.45 0.350 12 2.35 0.042 13 1.57 0.107 14 1.68 0.216 15 3.59 0.199 16 12.03 0.176 17 8.23 0.343

表 2 不同产地桔梗中桔梗总皂苷和桔梗皂苷D量 Table 2 Contents of total platycodin and platycodin D in Platycodi Radix from different habitats

色谱柱Waters Symmetry-C₁₈柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为乙腈-水（22∶78）；检测波长 210 nm；体积流量1.0 mL/min；进样量 20 μL；柱温 30 ℃；分析时间 60 min。

精密称取干燥至恒定质量的桔梗皂苷D对照品4.33 mg，加入甲醇（色谱纯）溶解后，定容于10 mL量瓶中，配制成质量浓度为0.433 mg/mL的对照品溶液，备用。

精密称取4 g桔梗样品粉末，装入50 mL离心管中，加入25 mL甲醇，超声提取30 min。常压滤过后使用旋转蒸发器回收甲醇，所得提取物加水20 mL，再加入30 mL乙醚脱脂，水液以水饱和的正丁醇提取，提取液利用旋转蒸发器蒸干。所得蒸干产物以甲醇（色谱纯）定容至10 mL量瓶中备用。

将0.433 mg/mL的对照品溶液分别稀释3、8、16、64、128倍，配制为144.0、54.0、27.06、6.77、3.38 μg/mL的溶液，分别吸入20 μL注入高效液相色谱仪进行测定，以桔梗皂苷D质量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为Y＝124.87 X－6.166 3，r＝0.999 7，线性范围为0.067 6～2.880 0 μg。

取桔梗皂苷D对照品溶液，在上述色谱条件下进行测定，连续进样5次，每次进样量为20 μL，结果峰面积的RSD为3.91%。

取同一桔梗药材供试品（河南）5份，按“2.2.3”项下的方法制备样品溶液，按上述色谱条件进行测定，结果其质量分数的RSD为4.3%。

取同一供试品溶液（辽宁）在室温下放置，分别在0、2、4、6、8、10 h按上述色谱条件进行测定，结果其峰面积RSD为2.1%。

精密称取已知桔梗皂苷D量的样品（安徽）5份，准确加入等量的对照品，按“2.2.3”项下的方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，结果平均回收率为97.56%，RSD为1.412%。

样品溶液过0.45 μm滤膜后，分别吸取制备好的不同供试品溶液20 μL，在上述色谱条件下进行测定，依据标准曲线来换算样品中桔梗皂苷D的量。HPLC色谱图见图 1。桔梗皂苷D的测定结果见表 2。

图 1 对照品 (A) 和供试样品溶液 (B) 的HPLC色谱图Fig.1 HPLC of reference substances (A) and sample solution (B)

由测定结果可以看出：不同产地桔梗药材中桔梗总皂苷的量差异较大。《中国药典》2005年版规定桔梗药材中桔梗总皂苷的量不得低于6%^[3]，而《中国药典》2010年版已不将桔梗总皂苷的量作为质量控制标准。在测定的17个不同省份的桔梗药材中，产自浙江的桔梗药材中桔梗总皂苷的量最高，为12.03%；此外，黑龙江、辽宁、安徽、山东、江西产桔梗药材中桔梗总皂苷的量依次减少，但其量均大于6%。而河北、四川、江苏、宁夏、内蒙古、陕西、湖南、云南、湖北、福建、河南的桔梗药材中桔梗总皂苷量均低于6%，河南的桔梗药材中桔梗总皂苷的量最低，仅为1.57%。

肖培根^[4]曾报道，桔梗以东北、华北产量较大，以华东地区产品质量较好。本实验结果显示，浙江、黑龙江、辽宁、安徽、山东、江西的桔梗药材中桔梗总皂苷量均高于《中国药典》的规定，其药材质量较好。对于桔梗皂苷D来说，云南省的量最高，为0.654%，为最低的河北省的38.47倍。《中国药典》2010年版以桔梗皂苷D作为评价桔梗药材的质量标准，其量不低于0.10%^{[1, 5]}。在测定的17个不同省份的桔梗药材中，仅黑龙江、湖北、陕西、内蒙古和河北桔梗药材中桔梗皂苷D量低于此标准，其量依次减少，量最低的河北仅为0.017%。

将桔梗总皂苷和桔梗皂苷D综合来看，同一药材中桔梗总皂苷量高者，其桔梗皂苷D量并不一定高，反之亦然。两者在同一药材中未显示出相关性。因此，不应单独用某一成分作为评价桔梗药材质量的标准，应兼顾两者为宜。本研究建立的方法操作简便，测定结果准确可靠，可用于桔梗药材中桔梗总皂苷和桔梗皂苷D量的测定。