2017, Vol. 40
引用本文 | doi: 10.7501/j.issn.1674-6376.2017.02.009 |
2. 天津合美医药科技有限公司, 天津 300308
2. Tianjin Hemay Pharmaceutical Co. Ltd, Tianjin, 300308
左金丸对胃肠道的调节作用，源于黄连与吴茱萸的协同作用，左金丸将辛温吴茱萸与苦寒黄连两种截然不同性味的药物配伍，具有清肝泻火，降逆止呕功效，在临床多用于肝气犯胃证，对于胃肠功能紊乱有明显的治疗作用。
本实验采用不同的药理模型研究左金丸对胃肠道的调节作用，并采用加味左金（在左金丸的基础上加入与黄连等量的有解痉止痛作用的白芍，又称戊己丸）作为参比，同时在部分试验中还比较了左金丸中黄连与吴茱萸配伍，与单用黄连有效成分小檗碱的效果对比，以期对中药左金丸的用药组方的科学合理性进行探讨。
1 材料 1.1 药物左金丸：褐色干浸膏，批号20141022，每克干浸膏含有4 g生药；戊己丸：褐色干浸膏，批号20141022，每克干浸膏含有3.45 g生药，均由天津市现代医药开发研究所提供，临用前用蒸馏水配制成不同浓度的溶液。
盐酸小檗碱片，批号130504，规格0.1 g/片，东北制药集团沈阳第一制药有限公司生产；硫酸阿托品注射液，批号130301，规格2 mL:1 mg，天津人民制药厂生产；溴新斯的明片：批号140622，规格15 mg/片，上海信谊药厂有限公司生产。
1.2 实验动物SPF级CD-1小鼠，雌雄各半，体质量（24±2）g；SPF级Wistar大鼠，雌雄各半，（200±20）g；SPF级豚鼠，雄性，体质量（300±20）g；均购自北京维通利华实验动物技术有限公司，实验动物生产许可证号为SCXK（京）2012-0001。
实验室条件：SPF级动物实验室，温度（23±3）℃，相对湿度40%~70%，12 h明暗交替照明；大小鼠均在动物洁净柜中饲养，饮用经净化器净化的洁净水；饲料购自中国医学科学院实验动物研究所繁育场。
1.3 主要仪器M2型微孔板检测系统酶标仪，Molecular Devices公司生产；ML870型生理记录仪；西班牙AD INSTRUMENTS生产。
2 方法 2.1 对小鼠胃排空的影响取CD-1小鼠80只，雌雄各半，体质量（24±2）g，随机分成8组：对照组，左金丸和戊己丸高、中、低剂量组，阿托品（阳性药）组。对照组给予同体积的纯净水；左金丸和戊己丸高、中、低剂量组分别给予2.0、1.0、0.5 g生药/kg；均ig给药3 d，末次给药后禁食12 h，自由饮水，阿托品组ip阿托品3 mg/kg。10 min后各组均ig给予0.1%甲基橙溶液0.2 mL，20 min后断颈椎处死动物。
摘取胃置于小烧杯中，加入10 mL蒸馏水，沿胃大弯剪开胃，将胃内容物充分洗于蒸馏水中。用5%的碳酸氢钠调pH值至6.0~6.5，倒入离心管中，2 000 r/min离心10 min，取上清液用分光光度计比色（波长420 nm），用蒸馏水调零，测胃中甲基橙吸光度（A）值，以0.1%甲基橙0.2 mL加入10 mL蒸馏水中摇匀后测得的A值作为基数，计算甲基橙胃残留率。
甲基橙胃残留率=胃中甲基橙A值/基数甲基橙A值
胃排空抑制率=（给药组甲基橙胃残留率-对照组甲基橙胃残留率）/对照组甲基橙胃残留率
2.2 对正常小鼠小肠运动的影响CD-1小鼠96只，雌雄各半，动物分组及给药均同“2.1”项，末次给药前禁食12 h，末次给药后30 min，阿托品ip 10 min后，ig 5%的炭末（混悬于10%的阿拉伯胶中）0.5 mL/只，20 min后断颈椎处死小鼠，取出从幽门到结肠的肠管，观察炭末推进距离和肠管的全长，并计算炭末推进率。
炭末推进率=炭末推进距离/肠管全长
2.3 对新斯的明致小肠运动亢进的拮抗作用取CD-1小鼠90只，雌雄各半，体质量（24±2）g，随机分成9组：对照组，模型组，左金丸及戊己丸高、中、低剂量组，小檗碱组。对照组和模型组给予同体积的纯净水，左金丸及戊己丸高、中、低剂量组分别给予2.0、1.0、0.5 g生药/kg，小檗碱组给予40 mg/kg小檗碱，各组均ig给药3 d。末次给药前禁食12 h，末次给药后30 min，除对照组外，各组均ig给予溴新斯的明2 mg/kg，10 min后ig给予5 %的炭末（混悬于10%的阿拉伯胶中）0.5 mL/只，10 min后断颈椎处死小鼠，取出从幽门到结肠的肠管，观察炭末推进距离和肠管的全长，并按下式计算炭末推进率。
2.4 对组胺致豚鼠离体回肠收缩的影响采用健康豚鼠10只，体质量（300±20）g，雄性，禁食24 h后击脑致昏迷，剖腹取出自盲肠向上回肠约20 cm，迅速放入充氧台氏液中，轻轻冲净管腔内残留物质，剪下2.0~2.5 cm肠管，缝合线两端部分结扎，上端同传感器相连，下端固定于离体器官仪的恒温浴槽底部，浴槽中加入（37±0.5）℃的台氏液30 mL，稳定10 min后，按以下顺序给药：生理盐水（对照）、左金丸低剂量、戊己丸低剂量、左金丸中剂量、戊己丸中剂量、左金丸高剂量、戊己丸高剂量、阿托品，各组给药时均给予组胺，组胺配成500 μg/mL，每次加入0.1 mL，浴槽中终浓度为50 μg/30 mL，左金丸、戊己丸配成4、2、1 g生药/10 mL，阿托品配成3 mg/10 mL，每次均加入0.3 mL，浴槽中左金丸、戊己丸终浓度为4、2、1 mg/mL，阿托品为3 μg/mL，记录肠管收缩幅度并计算收缩抑制率。
回肠收缩抑制率=（对照组收缩幅度-给药组收缩幅度）/对照组收缩幅度
2.5 对大鼠小肠吸收的影响动物分组及各组给药剂量均同“2.1”项，各组均ig给药5 d，于第4次给药后禁食24 h，自由饮水，第5天阿托品组ip给予硫酸阿托品3 mg/kg（1 mL/100 g）。末次给药后1 h即注射阿托品后15 min，ig 3%的D-木糖溶液2 mL/100 g。1 h后自大鼠眼眶采血1 mL，1 500 r/min离心5 min，制备血清，测定血清木糖值。
血清木糖测定法：取不同试管标记“U”“S”和“B”，U管分别加入待测的血清0.05 mL，S管加入标准液0.05 mL（标准液：称D-木糖10 mg，溶于100 mL的0.25 g/dL的苯甲酸溶液中），B管中加入蒸馏水0.05 mL，各管加入显色剂5 mL混匀（显色剂：间苯三酚0.5 g，加100 mL冰醋酸和10 mL的盐酸充分溶解，置棕色瓶中备用）。于100 ℃水浴中加热4 min，取出冷水中冷却，用分光光度计于554 nm波长处比色。以B管调零点，测定各管A值。
木糖值=待测管A值/标准管A值
小肠吸收抑制率=（对照组木糖值-给药组木糖值）/对照组血糖值
2.6 止泻作用实验取小鼠80只，雌雄各半，体质量（20±2）g，随机分成8组：对照组，左金丸及戊己丸高、中、低剂量组，小檗碱（阳性药）组。对照组给予同体积纯净水，左金丸及戊己丸高、中、低剂量组分别给予2.0、1.0、0.5 g生药/kg，小檗碱组给予小檗碱40 mg/kg，各组均连续ig给药3 d。末次给药后30 min ig蓖麻油0.2 mL/10 g，随即将小鼠单只置于金属笼中，笼底垫滤纸，每小时更换滤纸一次，连续6 h，实验过程中禁食禁水，观察记录小鼠稀便次数，并以每小时的累计稀便次数进行统计。
2.7 统计学处理计量资料以x±s表示，实验结果用Yukms统计分析软件做t检验。
3 结果 3.1 对小鼠胃排空的影响左金丸及戊己丸中、高剂量组可使小鼠甲基橙胃残留率明显增加，与对照组比较差异显著（P＜0.05、0.01），表明这两种药均可明显抑制小鼠的胃排空。在相同剂量比较时，二者的作用基本一致。结果见表 1。
|
表 1 左金丸对小鼠胃排空的影响(x±s, n=10) Table 1 Effects of Zuojin Pill on gastric emptying in mice (x±s, n=10) |
3.2 对正常小鼠小肠运动的影响
左金丸、戊己丸各剂量组对正常小鼠的小肠运动均无明显影响，与对照组比较差异明显。结果见表 2。
|
|
表 2 左金丸对正常小鼠小肠运动的影响(x±s, n=12) Table 2 Effects of Zuojin Pill on normal intestinal transit in mice (x±s, n=12) |
3.3 对新斯的明致小肠运动亢进的拮抗作用
与对照组比较，模型组炭末推进率明显增加，表明在本实验条件下给予新斯的明可使小鼠小肠炭末推进率增高；左金丸及戊己丸中、高剂量组可剂量相关性地显著抑制新斯的明致小鼠小肠炭末推进率增高，与模型组比较差异显著（P＜0.05、0.01）。表明二者均可明显抑制新斯的明所致小鼠小肠运动亢进，在相同剂量比较时作用基本一致。结果见表 3。
|
|
表 3 左金丸对新斯的明致小鼠小肠运动亢进的影响(x±s, n=10) Table 3 Effective suppression of Zuojin Pill on accelerated movement induced by neostigmine (x±s, n=10) |
3.4 对豚鼠离体回肠的影响
左金丸及戊己丸中、高剂量组均可使组胺所致豚鼠离体回肠收缩明显抑制，与对照组比较差异显著（P＜0.05、0.01）；回肠收缩抑制率随左金丸和戊己丸浓度的增加而增大，在相同剂量比较时，左金丸的作用更加明显，高剂量组抑制率可达56.60%。结果见表 4。
|
|
表 4 左金丸对豚鼠离体肠管的影响(x±s, n=10) Table 4 Effects of Zuojin Pill on isolated ileum muscles in guinea pigs (x±s, n=10) |
3.5 对大鼠小肠吸收的影响
左金丸及戊己丸中、高剂量组可使大鼠血清木糖水平明显下降，与对照组比较差异显著（P＜0.05、0.01），表明二者均可明显抑制大鼠小肠吸收，且相同剂量下作用基本一致。结果见表 5。
|
|
表 5 左金丸对小鼠小肠吸收的影响(x±s, n=10) Table 5 Effects of Zuojin Pill on contraction intensity in mice (x±s, n=10) |
3.6 止泻作用实验
左金丸虽为清泻肝火，止呕降逆方，但一些临床工作者根据中医辨证治疗的理论，用其治疗一些肠道疾患，如痢疾、腹泻、胃肠功能紊乱等，效果明显。泄泻是以大便次数增多，粪质稀薄或如水样为其主症，是临床常见疾病，而用左金丸治疗本病多有良效。本实验采用蓖麻油致小鼠腹泻，研究了左金丸的止泻作用，并采用戊己丸作为参比，同时以小檗碱作为阳性对照，对三者的作用进行了比较。
结果表明，左金丸各剂量组在给药2 h后，可明显抑制小鼠由蓖麻油引起的累计稀便次数，与对照组比较差异显著（P＜0.05、0.01），表明本品具有较好的止泻作用。其中2 g生药/kg剂量的左金丸作用比提纯的小檗碱的作用更为明显，同时在该剂量时，左金丸的作用也比戊己丸略强。结果见表 6。
|
|
表 6 左金丸对蓖麻油所致小鼠腹泻的影响(x±s, n=10) Table 6 Effects of Zuojin Pill on inhibited diarrhea in mice (x±s, n=10) |
4 讨论
实验结果表明，左金丸具有明显的抑制胃肠运动亢进的作用，能明显抑制由新斯的明引起的小鼠小肠运动亢进，但对正常小鼠的小肠运动却无明显影响，并能抑制组胺引起的豚鼠离体回肠收缩，同时具有明显的止泻作用，还可以抑制小肠吸收。戊己丸在这些方面的作用与左金丸基本一致，但在相同剂量比较时，左金丸的作用更为明显一些。在左金丸中，以黄连为主药，辅以吴茱萸，吴茱萸能助疏肝解郁；同时兼能制黄连之寒，防其寒凉伐胃之弊，因此药效更为明显。
吴茱萸的主要活性成分是吴茱萸次碱，吴茱萸次碱具有抑制胃肠道运动亢进的作用，其机制可能与其对抗胆碱能神经功能亢进有关。同时吴茱萸次碱还具有显著的抗炎作用，可直接抑制COX2的活性，或通过抑制花生四烯酸的释放来减少PGE的合成，而PGE作为一主要的炎性介质在溃疡性结肠炎的病理过程中具有重要作用。因此，吴茱萸的抗炎和对胃肠道运动亢进的抑制作用，是左金丸临床上用于调节胃肠道运动或缓解腹痛腹泻等症状的作用基础。
生理状态下，胃肠道的运动受自主神经壁内神经丛的支配，胃肠道激素、局部体液因素如组胺、前列腺素等及一些物理化学因素对胃肠道运动也有调节作用。左金丸对正常小鼠胃排空有明显的抑制作用，且呈剂量相关性，提示在完整的神经体液因素调节下，左金丸对胃运动呈现抑制作用。新斯的明是胆碱酯酶抑制剂，能使局部乙酰胆碱浓度增加，引起肠蠕动亢进。左金丸对新斯的明所引起能肠蠕动亢进具有显著的对抗作用。提示左金丸对胃肠运动抑制可能与其作用于胆碱能神递质有关。在离体肠管收缩实验中，左金丸对组胺所引起豚鼠回肠收缩有显著的对抗作用，表明了左金丸对肠管运动存在非特异性抑制的一面。实验结果表明，左金丸能延缓实验动物胃排空，缓解离体肠管平滑肌痉挛，抑制亢进的胃肠运动，其机制可能与其对抗胆碱能神经对胃肠道运动支配有关。同时，左金丸对正常小鼠的肠蠕动影响很小，提示左金丸对肠道运动的抑制作用可能主要集中在对抗肠管的异常运动上。这些实验结果表明，左金丸不仅对胃粘膜有明显的保护作用，也能够治疗胃肠道运动亢进所致的胃肠道功能紊乱，表明左金丸对胃肠道功能的调节确实具有积极的意义。
随着现代药理和临床研究的不断深入，通过对左金丸各种作用机制了解的不断加深，左金丸这种古老的中药方剂必然在现代临床上发挥更加广泛的作用。
| [1] | 江丰, 李彬, 郑文科, 等. 辛开苦降之法调理枢机之效-张伯礼教授临床应用左金丸举隅[J]. 天津中医药, 2014,31(8):451–452. |
| [2] | 徐叔云. 药理实验方法学[M].第2版. 北京: 人民卫生出版社, 1985 . |
| [3] | 黄保民, 王秀云, 李月华, 等. 开胃消食口服液对实验动物胃肠功能的影响[J]. 中医研究, 1998,11(01):21–22. |
| [4] | 郭建生, 聂子文, 张猛, 等. 乌药提取物对豚鼠离体回肠的影响[J]. 时珍国医国药, 2012,23(1):56–58. |
| [5] | 陈永辉, 朱珊. 健脾止泻颗粒对实验动物消化吸收功能影响的研究[J]. 中药药理与临床, 2000,16(5):34–35. |
| [6] | 李彤彤. 针刺健脾不同穴组对脾气虚大鼠血清胃泌素和D-木糖含量的影响[J]. 辽宁中医药大学学报, 2013,15(5):235–236. |
| [7] | 郭威, 郭炜. 论药量增减对左金丸功效影响[J]. 辽宁中医药大学学报, 2014,16(4):118–119. |
| [8] | 汤庆丰, 季青, 周文超, 等. 左金丸及其加味药在消化系统疾病防治中的研究进展[J]. 重庆医学, 2014,43(5):615–617. |