金线莲Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl是兰科兰属多年生草本植物，又名金线兰、金蚕、金不换等，因其叶脉呈金黄色而得名^[1-2]。主要分布于我国广东、广西、福建、江西、四川省；日本、斯里兰卡、印度、尼泊尔也有分布^[3]。民间有“药王”、“金草”之美誉，其味甘、微苦，性平、微寒，具有清热凉血、祛风利湿、强心、固肾、利尿、平肝、降血压、解毒、止痛、镇咳等功效，民间多用于治疗咯血、支气管炎、肾炎、膀胱炎、糖尿病、乳糜尿、血尿、风湿性关节炎、小儿急惊风、毒蛇咬伤等，近年来临床主要用于治疗高血压、糖尿病、心脏病、肺炎、急慢性肝炎、肾炎等症^[4]。

目前金线莲产业发展迅速，市场需求量巨大，福建省政府已将金线莲产业列为十大重点种业创新与产业示范推广工程之一^[5]，如何对金线莲及相关产品的质量进行有效控制已经成为关键问题。阿魏酸是金线莲重要的活性成分之一^[6]，本实验以阿魏酸为定量指标，建立了含量测定的方法，为金线莲及其相关产品的质量控制提供科学依据。

日本岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪；美国Lanbo-Kromasil-C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；KQ5200DB型数控超声波清洗器（江苏昆山市超声仪器有限公司）；美国Millipore SIMS50000超纯净水器；BP211D电子分析天平（北京赛多利斯仪器有限公司，十万分之一）；BS224S电子分析天平（北京赛多利斯仪器有限公司，万分之一）。

阿魏酸对照品由中国食品药品检定研究院提供（批号100081-200406）；甲醇为色谱纯（美国迪马公司），乙酸、石油醚为分析纯；水为超纯水。样品由福建各地金线莲种植基地收集，并经宁德市食品药品检验检测中心刘知远主任中药师鉴定为金线莲Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl，具体信息见表 1。

表 1(Table 1)

表 1 样品信息 Table 1 Information of samples 编号 产地 JXL-1 周宁李墩 JXL-2 周宁李墩 JXL-3 周宁李墩 JXL-4 宁德古田 JXL-5 宁德霍童 JXL-6 宁德屏南 JXL-7 宁德支提山 JXL-8 寿宁斜滩 JXL-9 宁德八都 JXL-10 福鼎太姥山 JXL-11 福安坂中 JXL-12 三明永安 JXL-13 福安赛岐 JXL-14 宁德七都 JXL-15 福安白云山 JXL-16 三明永安 JXL-17 漳州南靖

表 1 样品信息 Table 1 Information of samples

色谱柱为Lanbo-Kromasil-C₁₈（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-1%乙酸溶液（32：68）；体积流量为1 mL/min；检测波长为321 nm^[6]；进样量10 μL；柱温为25 ℃。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于10 000。色谱图见图 1。

1-阿魏酸 1-ferulic acid 图 1 对照品（A）和样品（B）色谱图 Fig. 1 Chromatograms of reference substance (A) and sample (B)

精密称取阿魏酸对照品12 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，溶解摇匀；精密吸取3 mL，置10 mL量瓶，加甲醇至刻度，摇匀，制成质量浓度为36 μg/mL的对照品溶液；过0.45 μm微孔滤膜，即得。

将金线莲干品粉碎，过3号筛备用。精密称取2 g，加入石油醚20 mL，置水浴锅中加热回流30 min，过滤，弃去滤液，挥干残余的石油醚。精密加入75%乙醇溶液25 mL，称定质量，静置25 min。置70℃水浴中超声（200 W，40 kHz）60 min，放置至室温，补足损失的质量，滤过，再过0.45 μm微孔滤膜，即得。

取对照品溶液按进量1、5、10、15、20、30 μL依次进样，分别测定峰面积，以峰面积为纵坐标（Y），进样量（X）为横坐标，进行线性回归，得回归方程：Y=94 224 X+190 554，r=0.999 9；表明阿魏酸在进样量36~1 080 ng与峰面积呈良好的线性关系。

取对照品溶液重复进样6次，每次进样量10 μL，测定阿魏酸峰面积，结果RSD为0.6%（n=6），表明仪器精密度良好。

取样品（JXL-1），按照“2.3”项方法重复制备6份供试品溶液，依次进样10 μL，依法测定阿魏酸的量，结果RSD为2.3%（n=6），表明该法重复性良好。

取样品（JXL-1），按照“2.3”项方法制备供试品溶液，分别于0、3、6、9、12、15 h进样10 μL，阿魏酸峰面积，结果峰面积RSD为2.5%（n=6），表明供试品溶液在15 h内较稳定。

精密称取样品（JXL-1）2 g，共9份，分成3组；精密量取“2.2”项第一步稀释的对照品溶液0.15、0.3、0.6 mL分别加入样品中，按照“2.3”项同法制备供试品溶液，依次进样10 μL，分别测定阿魏酸的量，结果回收率为99.7%，RSD为2.5%。

取不同产地的样品按照“2.3”项下方法制备供试液，分别进样10 μL，分别测定峰面积，计算质量分数，结果见表 2。

表 2(Table 2)

表 2 样品测定结果 Table 2 Results of samples determination (n=3) 编号 阿魏酸/% JXL-1 0.018 1 JXL-2 0.019 5 JXL-3 0.018 4 JXL-4 0.017 7 JXL-5 0.019 4 JXL-6 0.022 6 JXL-7 0.015 7 JXL-8 0.014 6 JXL-9 0.013 9 JXL-10 0.019 6 JXL-11 0.018 7 JXL-12 0.014 0 JXL-13 0.013 8 JXL-14 0.012 3 JXL-15 0.016 7 JXL-16 0.013 3 JXL-17 0.019 5

表 2 样品测定结果 Table 2 Results of samples determination

本实验共收集了17批不同产地的样品，含量测定结果表明：金线莲中阿魏酸质量分数范围为0.012 3%~0.022 6%，平均为0.016 9%。质量分数最高的是JXL-6号样品，为0.022 6%；最低的是JXL-14号样品，为0.012 3%。不同地域的金线莲阿魏酸含量存在差异，造成含量高低不同的原因尚有待进一步研究。

金线莲主要含有多糖、挥发油、黄酮、三萜、甾体、有机酸及其配糖体等成分^[7]。杨秀伟等^[8]采用柱色谱法对金线莲化学成分进行分离、纯化，用IR、NMR和MS等方法进行结构鉴定，证明金线莲含阿魏酸等10个化合物。王振等^[9]研究发现阿魏酸具有抑制血小板聚集、抑制5-羟色胺从血小板中释放、阻止静脉旁路血栓形成、抗动脉粥样硬化、清除自由基、增强免疫功能等多方面药理活性。张娟等^[10]研究发现阿魏酸具有抗血小板凝聚和血栓形成、清除亚硝酸盐、氧自由基、过氧化亚硝基、抗菌消炎、抗肿瘤、抗突变、增强免疫功能、增强精子活力和运动性等。另外，阿魏酸具有核心结构--对羟基苯丙烯酸，以其为先导化合物设计合成新型阿魏酸衍生物，已经初步研究证明了其抗炎活性及心血管安全性^[11]。因此本实验以阿魏酸为定量成分。

阿魏酸易溶于乙醇，难溶于石油醚^[12]。通常植物体细胞表面都含有脂质^[13]，因此先用石油醚加热回流，去除细胞表面的脂质，以便于下一步的提取。提取方法采用正交法进行优选，分别用50%、75%、95%的乙醇，提取温度分别为50、70、90 ℃，时间分别为30、45、60 min，选用L₉（3⁴）正交表格，结果最佳提取方法为：提取溶剂为75%乙醇溶液，温度70℃，时间60 min。

阿魏酸的化学结构为4-羟基-3-甲氧基肉桂酸，是桂皮酸的衍生物之一，呈酸性，因此应使用酸性的流动相。通过对甲醇和不同浓度的乙酸及磷酸进行比较，发现甲醇-1%乙酸溶液（32：68）流动相系统色谱峰峰形最好，且保留时间较为理想。

质量控制是中药开发利用的关键，本方法简便、快速、准确、重复性好，可作为金线莲及其相关产品质量控制的理想方法。