摘要:
目的 基于miR-212-3p/E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)通路探讨雷公藤甲素(TPL)对卵巢癌细胞紫杉醇(TAX)耐药的影响。方法 体外培养卵巢癌细胞SKOV3及其TAX耐药细胞SKOV3/TAX,以实时荧光定量PCR( qRT-PCR)检测2者miR-212-3p、ZEB2表达。构建SKOV3/TAX移植瘤裸鼠模型,以TPL干预SKOV3/TAX细胞及动物后,CCK-8法检测细胞存活率,测量肿瘤体积,筛选其最佳作用浓度/剂量。将SKOV3/TAX、SKOV3细胞随机分为对照组、TPL(20 nmol·L-1)组、inhibitor-NC(100 nmol·L-1)组、TPL(20 nmol·L-1)+ miR-212-3p inhibitor(100 nmol·L-1)组,同时以TAX(0、5、10、20、40、60 nmol·L-1)处理细胞,检测SKOV3/TAX细胞耐药指数。将SKOV3/TAX细胞随机分为对照组、TAX(30 nmol·L-1)组、TPL(20 nmol·L-1)+TAX(30 nmol·L-1)组、inhibitor-NC(100 nmol·L-1)组、TPL(20 nmol·L-1)+TAX(30 nmol·L-1)+ miR-212-3p inhibitor(100 nmol·L-1)组,干预24 h;将SKOV3/TAX移植瘤裸鼠随机分为对照组、TAX(8 mg·kg-1,ip给药)组、TPL(30 μg·kg-1,ip给药) +TAX(8 mg·kg-1)组、inhibitor-NC(5 nmol,瘤内注射)组、TPL(30 μg·kg-1) +TAX(8 mg·kg-1) +miR-212-3p inhibitor(5 nmol,瘤内注射)组,干预2周。qRT-PCR法检测细胞和组织中miR-212-3p、ZEB2表达,以CCK-8、流式细胞实验分别检测细胞增殖、凋亡;测量肿瘤体积; Western blotting检测ZEB2、Bax、Bcl-2、多药耐药蛋白1(MDR1)蛋白表达。结果 与SKOV3细胞比较,SKOV3/TAX细胞miR-212-3p降低且ZEB2 mRNA表达升高(P<0.05)。TPL可降低SKOV3/TAX细胞耐药指数(P<0.05) ,miR-212-3p inhibitor可逆转TPL上述作用(P<0.05)。与对照组相比,TAX组细胞存活率、肿瘤体积、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率、Bax蛋白表达升高(P<0.05); TPL+ TAX组细胞存活率、肿瘤体积、ZEB2 mRNA与蛋白表达、Bcl-2与MDR1蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率、miR-212-3p表达、Bax蛋白表达升高(P<0.05); inhibitor-NC组细胞各指标无显著变化。与TAX组相比,TPL+TAX组细胞存活率、肿瘤体积、ZEB2 mRNA与蛋白表达、Bcl-2与MDR1蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率、miR-212-3p表达、Bax蛋白表达升高(P<0.05)。与TPL+TAX组相比,TPL+TAX+miR-212-3p inhibitor组细胞存活率、肿瘤体积、ZEB2 mRNA与蛋白表达、Bcl-2与MDR1蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率、miR-212-3p表达、Bax蛋白表达降低(P<0.05)。结论 TPL可拮抗卵巢癌细胞的TAX耐药性,机制可能与调控miR-212-3p/ZEB2信号通路相关。