参茸安神片处方源于《卫生部颁药品标准》中药成方制剂第八册^[1]，由玉竹、山药、白术（炒）、丹参、芡实、琥珀、人参、远志、酸枣仁（炒）、菟丝子（炒）、玄参、柏子仁、五味子、肉苁蓉（制）、地黄、鹿茸、石菖蒲、桔梗18味中药加工而成，具有补气养血、益精补肾、宁心安神的功效，对精血不足、神志不安、健忘症、心跳失眠等症状治疗效果显著。参茸安神片现行质量控制标准简单，仅规定了性状和显微鉴别，未对该制剂中的活性成分进行定量控制。石上梅等^[2]对参茸安神片中的人参皂苷Rg₁进行定量测定，而单一成分难以控制复方制剂的产品质量。远志和五味子为参茸安神片方中的主要药味，远志具有安神益智、交通心肾的功效，主要成分为远志𠮿酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷和远志皂苷B等^[3]。五味子具有益气生津、补肾宁心等功效，主要成分为五味子醇甲^[3]。为有效控制参茸安神片的质量，确保临床用药的安全，本实验采用HPLC梯度洗脱法同时对参茸安神片中的远志𠮿酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志皂苷B和五味子醇甲进行测定，为全面控制参茸安神片的质量提供参考。

UltiMate 3000型高效液相色谱仪（美国赛默飞）；BS210S型电子天平（德国赛多利斯）；KH2200DB型数控超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）。

远志𠮿酮Ⅲ（批号111850-201504，质量分数95.5%）、细叶远志皂苷（批号111849-201504，质量分数95.6%）、五味子醇甲（批号110857-201513，质量分数99.9%）对照品购自中国食品药品检定研究院； 3,6'-二芥子酰基蔗糖（批号139891-98-8，质量分数91.0%）、远志皂苷B（批号35906-36-6，质量分数98.0%）对照品购自江莱生物科技有限公司；参茸安神片来源于鞍山制药有限公司，批号分别为150605、160302、160411。

乙腈为色谱纯，磷酸、甲醇为分析纯，水为重蒸馏水。

分别精密称取远志𠮿酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志皂苷B和五味子醇甲对照品各适量，用甲醇分别制成质量浓度分别为0.385、0.622、0.657、0.761、0.496 mg/mL对照品储备液。

分别依次量取各对照品储备液适量，用甲醇制成含远志𠮿酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志皂苷B和五味子醇甲各为15.4、31.1、65.7、76.1、49.6 μg/mL的混合对照品溶液。

取6个10 mL量瓶，依次精密吸取5个成分的对照品储备液各0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mL，分别用甲醇稀释并加至刻度，振摇均匀，即得6个系列质量浓度的混合对照品溶液。

取参茸安神片适量，除去糖衣后，研细，取约1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，精密称定，超声提取30 min，放冷，用甲醇补足减失质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

按《卫生部颁药品标准》中药成方制剂第八册中参茸安神片^[1]质量标准项下的处方和工艺过程，分别制备缺远志、缺五味子的样品，按2.1.4项下的方法制成相应的阴性样品溶液。

Kromasil C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱（0～10 min，25.0% A；10～16 min，25.0%A→30.0% A；16～24 min，30.0%A→45.0% A；24～30 min，45.0% A→65.0% A；30～35 min，65.0% A→25.0% A）；检测波长：320 nm^[3-4]（0～16 min检测远志𠮿酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖）、210 nm^{[3, 5]}（16～24 min检测细叶远志皂苷、远志皂苷B）、250 nm^{[3, 6]}（24～35 min检测五味子醇甲）；体积流量：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；进样量为10 μL。理论塔板数均不低于3 500，各峰分离度均大于1.5。在上述色谱条件下，供试品中其他成分对所测成分远志𠮿酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志皂苷B和五味子醇甲的测定无干扰，色谱图见图 1。

图 1 参茸安神片（A）、混合对照品（B）、缺远志阴性样品（C）和缺五味子阴性样品（D）的HPLC色谱图 Fig. 1 HPLC chromatogram of Shenrong Anshen Tablets (A),mixed reference substances (B),negative sample without Polygalae Radix (C),and negative sample without Schisandrae Fructus (D) 1-远志𠮿酮Ⅲ 2-3,6'-二芥子酰基蔗糖 3-细叶远志皂苷 4-远志皂苷B 5-五味子醇甲 1-polygalaxanthone Ⅲ 2-3,6'-disinapoyl sucrose 3-tenuifolin 4-onjisaponin B 5-schisandrin

分别取6个系列质量浓度的混合对照溶液，进样测定。采用质量浓度作为横坐标，测得的峰面积作为纵坐标进行线性回归，计算回归方程，结果见表 1。

表 1(Table 1)

表 1 线性方程、相关系数及线性范围 Table 1 Linear relationship,correlation coefficient,and linearity 成分 线性方程 r 线性范围/(μg·mL-1) 远志𠮿酮Ⅲ A=6.330 9×105 C-288.1 0.999 2 3.85～77.00 3,6'-二芥子酰基蔗糖 A=8.352 7×105 C+305.7 0.999 8 6.22～124.40 细叶远志皂苷 A=1.098 6×106 C-475.8 0.999 3 6.57～131.40 远志皂苷B A=1.351 2×106 C+410.9 0.999 5 7.61～152.20 五味子醇甲 A=1.105 7×106 C+197.0 0.999 9 4.96～ 99.20

表 1 线性方程、相关系数及线性范围 Table 1 Linear relationship,correlation coefficient,and linearity

取混合对照品溶液，连续进样6次，测定峰面积，结果远志𠮿酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志皂苷B和五味子醇甲峰面积的RSD值分别为1.12%、0.41%、1.07%、0.82%、0.95%。

取参茸安神片（批号150605）样品，制备供试品溶液，在室温下放置0、2、4、6、8、12 h依次进样测定，结果远志𠮿酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志皂苷B和五味子醇甲峰面积的RSD值分别为1.08%、1.01%、0.90%、1.35%、0.87%，结果表明供试品溶液中5个成分在室温下放置12 h稳定。

取参茸安神片（批号150605）约1.0 g，精密称定，共称取6份，制备供试品溶液，进样测定，分别计算远志𠮿酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志皂苷B和五味子醇甲的质量分数，结果RSD值分别为1.69%、0.71%、1.16%、0.57%、1.21%。

精密称取参茸安神片（批号150605）样品6份，除去糖衣后，研细，每份约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入混合对照品溶液（含远志𠮿酮Ⅲ 0.082 4 mg/mL、3,6'-二芥子酰基蔗糖0.148 2 mg/mL、细叶远志皂苷0.316 8 mg/mL、远志皂苷B 0.403 2 mg/mL、五味子醇甲0.263 0 mg/mL）5 mL，制备供试品溶液，进样测定，计算回收率，结果远志𠮿酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志皂苷B和五味子醇甲的平均回收率分别为98.17%、99.24%、99.90%、97.63%、96.83%，RSD值分别为1.14%、1.23%、0.70%、1.52%、0.81%。

取3批参茸安神片各适量，制备供试品溶液，依法测定，采用外标法计算样品中远志𠮿酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志皂苷B和五味子醇甲的质量分数，结果见表 2。

表 2(Table 2)

表 2 参茸安神片中远志𠮿酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志皂苷B和五味子醇甲的测定结果（n=3 ） Table 2 Determination of polygalaxanthone Ⅲ,3,6’-disinapoyl sucrose,tenuifolin,onjisaponin B,and schisandrin in Shenrong Anshen Tablets (n=3 ) 批号 质量分数/(mg·g-1) 远志𠮿酮Ⅲ 3,6'-二芥子酰基蔗糖 细叶远志皂苷 远志皂苷B 五味子醇甲 150605 0.813 1.479 3.152 4.074 2.636 160302 0.862 1.550 3.007 3.975 2.816 160411 0.829 1.374 3.388 4.200 2.497

表 2 参茸安神片中远志𠮿酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志皂苷B和五味子醇甲的测定结果（n=3 ） Table 2 Determination of polygalaxanthone Ⅲ,3,6’-disinapoyl sucrose,tenuifolin,onjisaponin B,and schisandrin in Shenrong Anshen Tablets (n=3 )

实验对回流提取和超声提取进行了对比考察，以远志𠮿酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志皂苷B和五味子醇甲的提取率为考察指标，结果2种提取方式下所测各成分的提取率差异不大。考虑到超声提取操作简便，重复性高等因素，选取超声提取作为供试品溶液制备的提取方式；在此基础上，对不同的提取溶剂乙醇、50%甲醇、70%甲醇^[4-6]、甲醇^[7-8]进行了对比考察，以所测成分的提取率为指标，优选出的最佳提取溶剂为甲醇；同时考察了不同超声提取时间（15、30、45 min），结果显示超声提取30 min各成分就可以提取完全。故最终优化供试品溶液提取条件为甲醇超声提取30 min。

在流动相的确定上，实验考察了甲醇-水^[7]、乙腈-水^[8]、乙腈-磷酸溶液^{[4-6, 9]}。以基线平稳、各峰之间干扰性、拖尾情况等方面为指标，优选最佳的流动相体系，结果表明以乙腈-磷酸溶液为流动相时，所测各成分峰形和分离效果较好，基线较平稳；在此基础上又考察了不同体积分数的磷酸水溶液（乙腈-0.05%磷酸溶液^[3-4]、乙腈-0.1%磷酸水溶液^{[6, 9]}）的分离效果，最终选择以乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脱为流动相对参茸安神片中5个成分进行同时测定。同时还比较不同柱长色谱柱（200 mm×4.6 mm、250 mm×4.6 mm）对所测定5个成分分离效果的影响，结果显示使用色谱柱（200 mm×4.6mm）时，细叶远志皂苷与杂质峰得不到有效分离，使用色谱柱（250 mm×4.6 mm）时，所测5个成分均能达到有效分离，故最终选用Kromasil C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）作为参茸安神片定量测定用色谱柱。

本文建立了HPLC梯度洗脱法同时测定参茸安神片中远志𠮿酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志皂苷B和五味子醇甲，该方法稳定可靠、简便易行，为全面控制参茸安神片的质量提供了参考。