千金藤Stephania japonica (Thunb.) Miers为防己科千金藤属植物。本属植物全世界有60余种，我国有39种，主要分布在长江流域及其以南各省区，其中以广西、云南分布最广泛^[1]。千金藤的根和蔓茎具有清热解毒、利尿消肿、祛风止痛的功效，为民间常用草药^[2]。千金藤素是从千金藤属植物中提取出的一种双苄基异喹啉类生物碱^[3]，具有消炎、抑菌、调节免疫等作用^[4]。近年来，关于千金藤素抗肿瘤活性及作用机制的研究^[5-6]也日益深入，普遍认为其通过刺激动物网状内皮系统、活化造血组织、促进骨髓组织增生，起到促进白细胞升高的作用，在临床上主要用于治疗矽肺、癌症患者化疗后白细胞减少症。千金藤属植物千金藤、地不容S. epigaea Lo、白药子S. cepharantha Hayata在民间均有应用^[7-11]。为了明确千金藤与同属其他易混植物的品质差异及合理安全用药，本实验以千金藤素为指标，采用HPLC法研究不同来源植物、不同产地、不同部位千金藤中千金藤素，为千金藤药材基源选择、质量标准建立和合理用药提供实验依据。

Shimadzu LC-10AT高效液相色谱仪（日本岛津公司）；BSA124S电子天平（德国Sartorius公司）；DK-98-Ⅱ电热恒温水浴锅（天津斯泰特仪器有限公司）；N-1100旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）。

95%工业酒精；色谱纯甲醇、色谱纯乙腈（山东禹王实业有限公司）；色谱纯三乙胺、色谱纯磷酸（天津市科密欧化学试剂有限公司）。千金藤素对照品（规格20 mg/支，质量分数98.2%，天津一方科技有限公司）。

17批药材采自江苏、安徽、河北、湖南、湖北等地，均由沈阳药科大学中药分析及鉴定教研室潘英妮副教授鉴定，见表 1。

表 1(Table 1)

表 1 不同产地、不同部位千金藤属各植物中千金藤素的测定结果 Table 1 Determination ofcepharanthine in plants of Stephania Lour. from various habitats and parts 编号 原植物 部位 产地 收集地 收集时间 千金藤素/% No.1 千金藤 饮片 江苏 江苏 2014-10 0.0022 No.2 千金藤 饮片 湖北 安徽毫州 2014-11 0.0005 No.3 千金藤 饮片 湖北 河北安国 2014-11 0.0003 No.4 地不容 根饮片 云南 安徽毫州 2014-11 0.0077 No.5 地不容 根饮片 云南 河北安国 2014-11 0.0056 No.6 千金藤 根饮片 广西 广西 2015-03 0.0001 No.7 千金藤 茎饮片 广西 广西 2015-03 微量 No.8 千金藤 根饮片 广西 广西 2015-03 0.0039 No.9 千金藤 茎饮片 广西 广西 2015-03 微量 No.10 千金藤 根饮片 广西 广西 2015-03 0.0002 No.11 千金藤 茎饮片 广西 广西 2015-03 0.0021 No.12 千金藤 根饮片 湖南 湖南 2015-03 0.0030 No.13 千金藤 茎饮片 湖南 湖南 2015-03 0.0139 No.14 千金藤 果实 湖南 湖南 2015-03 0.0001 No.15 千金藤 叶 湖南 湖南 2015-03 0.0018 No.16 千金藤 饮片 湖北 湖北 2015-06 0.0026 No.17 白药子 根饮片 广西 安徽毫州 2015-09 0.1221

表 1 不同产地、不同部位千金藤属各植物中千金藤素的测定结果 Table 1 Determination ofcepharanthine in plants of Stephania Lour. from various habitats and parts

Angela C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（52：48，含0.5%三乙胺、0.01%磷酸）；检测波长：282 nm；柱温：30 ℃；体积流量：1.0 mL/min；进样体积：20 μL。

精密称取药材粗粉1.0 g，加50倍量80%乙醇水回流提取2次，每次2 h，合并提取液，浓缩至干，加52%乙腈水定容至5 mL，超声溶解，0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得。

精密称取千金藤素对照品3.00 mg，置于10 mL量瓶中，分别加52%乙腈溶液溶解，并稀释得到9、18、36、54、90、144、216 μg/mL系列质量浓度溶液，备用。

分别精密吸取系列质量浓度的千金藤素对照品溶液各20 μL，进样分析，记录色谱峰面积值。以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得方程Y＝45 087 X＋85 975（r＝0.999 7）。结果表明千金藤素质量浓度在9～216 μg/mL时与峰面积值呈良好的线性关系。

精密吸取144 μg/mL千金藤素对照品溶液20 μL，连续进样6次，测定峰面积值，计算得千金藤素峰面积值的RSD值为0.9%。

精密吸取室温下放置的No.17白药子供试品溶液，分别在配制后0、2、4、6、12 h进样分析，测定峰面积值，计算得千金素峰面积值的RSD值为0.8%，结果表明供试品溶液在室温下12 h内稳定。

取批号No.17白药子粗粉1.0 g，共5份，分别精密称定，制备供试品溶液，进样分析，测定峰面积值，计算得千金素质量分数的RSD值为1.5%。

精密称取批号No.17白药子粗粉0.5 g，平行6份，加入千金藤素对照品0.6 mg，制备供试品溶液，进样分析，测定峰面积值，计算得千金藤素的平均回收率为96.0%，RSD值为2.0%。

取各样品，制备供试品溶液。精密吸取各供试品溶液20 μL，进样分析，按外标法计算样品中千金藤素的质量分数，测定结果见表 1，色谱图见图 1。可见产自湖南的千金藤（No.13）、产自广西的白药子（No.17）中千金藤素的量较高，分别为0.013 9%、0.122 1%；同一植株的不同用药部位（No.12～15）中千金藤素的量也不尽相同，湖南产千金藤中千金藤素主要分布在茎之中，其质量分数为0.013 9%。

图 1 千金藤素对照品（A）、白药子（B）、千金藤（C）和地不容（D）的HPLC图谱 Fig. 1 HPLC Chromatograms of cepharanthine reference substance (A), S. cepharantha (B),S. japonica (C) and S. epigaea (D) *-千金藤素 *-cepharanthine

双苄基异喹啉类生物碱大多存在于植物界中较原始的多心皮类群中，如防己科、毛茛科、小檗科，具有显著的抗疟、抗炎、抗菌活性，在心血管疾病治疗方面亦有应用。千金藤素是防己科植物千金藤属植物中的特征性双苄基异喹啉类生物碱，具有抗结核、抗菌、抗麻风、抗肿瘤等作用，在临床上作为升白药应用，有显著的疗效。因此千金藤素可作为千金藤属药用植物中的一个指标性活性成分进行测定，对中药质量控制、基源植物鉴别、临床安全用药都具有一定意义。

千金藤属植物在民间应用较广泛，应用范围存在地域性差异。实验结果显示广西白药子（No.17）中千金藤素的量偏高，但本实验研究批次太少，不具有代表性，可否作为千金藤的代用药材还有待进一步考察。

千金藤属植物基源复杂，千金藤市售品存在严重的同名异物的现象，同一植物在不同地区命名也存在差异。如防己科千金藤属头花千金藤的块根在浙江被称为金线吊蛤蟆，在广西则为白药子。但目前未见有关其质量评价的报道。该属植物所含的生物碱成分多具有生物活性，故选千金藤素作为指标性成分进行千金藤的质量控制。从各批千金藤药材的HPLC法测定结果分析可知，各批次药材中均含有千金藤素。

从同株植物不同部位中千金藤素的测定结果可见，不同的用药部位中千金藤素的量差异较大。但市售的药材中有将根、茎、叶等部位切片混合使用的，今后有必要增加药材的批次及药材质量，对各部位中有效物质的测定作进一步研究。

通过对千金藤素进行全波长紫外扫描，发现其在282 nm下吸收最强，比较了不同波长及75%甲醇水、乙腈-水（52：48，含0.5%三乙胺、0.01%磷酸）不同流动相对千金藤素分离度的影响，结果表明，在选定的色谱条件下供试品中千金藤素的分离效果最好。

考察了不同体积分数（60%、70%、80%、95%）乙醇、粉碎粒度（饮片、细粉、7目、40目、100目）、提取次数（1、2、3次）、提取时间（1、2、3 h）对千金藤浸出物的影响，结果表明用80%乙醇、提取2次，每次2 h浸出物提取率最高。

本实验建立的方法精密度良好、重现性好，试样在12 h内稳定性良好，因此操作简便、精确，可作为千金藤中千金藤素的测定方法。