养阴降压胶囊是由白芍、青木香、龟甲（沙烫）、珍珠层粉等16味中药加工而成，具有滋阴潜阳、平肝安神、活血通络的功效，临床上主要用于肝肾阴虚，肝阳上亢引起的高血压病，头晕头痛、颈不适、目眩耳鸣、行走不稳、心悸心疼、烦躁易怒、失眠多梦等症状的治疗^[1]。养阴降压胶囊收载于《卫生部颁药品标准》中药成方制剂第12册，但标准仅规定了性状和理化鉴别，无其他质量控制检测项目^[2]。由于养阴降压胶囊由16味中药组成，成分较多，单一指标不能较全面地控制产品质量。白芍和青木香在养阴降压胶囊的制剂处方中用量最大，是方中的主要药物^[3]；氧化芍药苷、芍药内酯苷和芍药苷为白芍的指标性成分，马兜铃酸Ⅰ为青木香的指标性成分。本实验采用HPLC波长切换法同时对养阴降压胶囊中氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷和马兜铃酸Ⅰ进行测定，为有效控制养阴降压胶囊的质量，确保临床用药的安全提供依据。

Agilent 1100系列四元梯度泵高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；AL104电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；KQ-S2000VDE三频数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），UV-2100型紫外可见分光光度计（成都科析电子商务有限公司）。

马兜铃酸Ⅰ（批号110746-201510，质量分数99.1%）、芍药苷（批号110736-201640，质量分数95.2%）对照品均购自中国食品药品检定研究院；氧化芍药苷对照品（批号39011-91-1，质量分数98.0%）购自上海道壹生物科技有限公司；芍药内酯苷对照品（批号39011-90-0，质量分数98.0%）购自上海纯优生物科技有限公司。养阴降压胶囊由山西黄河中药有限公司生产，规格0.5 g/粒，批号分别为20151201、20160101、20160301；流动相用甲醇和乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

Venusil MP C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相A：甲醇-乙腈（2：1），流动相B：0.02%磷酸溶液，梯度洗脱^[4-5]（0~16 min，42.0%A；16~32 min，42.0%→65.0%A；32~40 min，65.0% →42.0%A）；0~16 min在390 nm^[6]波长下检测马兜铃酸Ⅰ，16~40 min时在230 nm^[7-8]波长下检测氧化芍药苷、芍药内酯苷和芍药苷；体积流量1.0 mL/min；柱温35 ℃；进样量10 μL。

分别精密称取马兜铃酸Ⅰ、氧化芍药苷、芍药内酯苷和芍药苷对照品适量，分别置不同的20 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得含马兜铃酸Ⅰ 0.472 mg/mL、氧化芍药苷0.395 mg/mL、芍药内酯苷0.639 mg/mL、芍药苷1.981 mg/mL单一成分的对照品储备溶液。分别依次量取各对照品储备液2.5、2.0、5.0、5.0 mL，置同一50 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。

取养阴降压胶囊适量，倾出内容物，研细，取约1.0 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加入甲醇适量，超声提取30 min，放冷，用甲醇加至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

按养阴降压胶囊的处方工艺，分别制备不含青木香和不含白芍的阴性样品，按供试品溶液的制备项下方法操作，制成相应的阴性样品溶液。

分别精密吸取单一成分的对照品储备溶液（马兜铃酸Ⅰ0.472 mg/mL、氧化芍药苷0.395 mg/mL、芍药内酯苷0.639 mg/mL、芍药苷1.981 mg/mL）各0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mL，将其置于10 mL量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得到一系列质量浓度的混合对照品溶液，进样测定。以测得的峰面积对质量浓度进行线性回归，绘制标准曲线，得回归方程，见表 1。

表 1(Table 1)

表 1 线性关系试验结果 Table 1 Results of linear relationship test 组分 回归方程 r 线性范围/(μg·mL-1) 马兜铃酸Ⅰ Y=1.010 3×106 X+107.2 0.999 8 4.72~94.40 氧化芍药苷 Y=7.654 2×105 X+380.6 0.999 9 3.95~79.00 芍药内酯苷 Y=1.229 7×106 X-400.8 0.999 9 6.39~127.80 芍药苷 Y=1.451 9×106 X+379.5 0.999 1 19.81~396.20

表 1 线性关系试验结果 Table 1 Results of linear relationship test

精密吸取混合对照品、供试品溶液和阴性样品溶液各适量，件进行检测。结果显示，各阴性样品溶液的色谱图中，在所测马兜铃酸Ⅰ、氧化芍药苷、芍药内酯苷和芍药苷4个成分对应的位置无干扰，色谱图见图 1。

图 1 养阴降压胶囊（A）、混合对照品（B）、缺青木香阴性样品（C）和缺白芍阴性样品（D）的HPLC图谱 Fig. 1 HPLC Chromatograms of Yangyin Jiangya Capsules (A), mixed reference substances (A), negative sample without Aristolochiae Radix (C) and negative sample without Paeoniae Alba Radix(D) 1-马兜铃酸Ⅰ 2-氧化芍药苷3-芍药内酯苷4-芍药苷 1-aristolochic acid Ⅰ 2-oxypaeoniflorin 3-alibiflorin 4-paeoniflorin

取混合对照品溶液，连续进样测定6次，记录峰面积，结果马兜铃酸Ⅰ、氧化芍药苷、芍药内酯苷和芍药苷峰面积的RSD值分别为0.97%、1.05%、0.83%、0.72%。

取养阴降压胶囊样品（批号20151201）6份，制备供试品溶液，进行测定，分别计算马兜铃酸Ⅰ、氧化芍药苷、芍药内酯苷和芍药苷的质量分数，结果RSD值分别为1.52%、1.77%、1.29%、1.14%。

取养阴降压胶囊（批号20151201）样品制备的同一份供试品溶液，在室温下放置0、2、4、6、8、12 h，测定马兜铃酸Ⅰ、氧化芍药苷、芍药内酯苷和芍药苷的峰面积值，RSD值分别为1.01%、1.36%、0.95%、0.74%。结果显示供试品溶液在室温下12 h内稳定。

取养阴降压胶囊（批号20151201）6份，内容物研细，每份约0.5 g，精密称定，分别置不同的50 mL量瓶中，精密加入混合对照品溶液（马兜铃酸Ⅰ0.023 6 mg/mL、氧化芍药苷0.015 8 mg/mL、芍药内酯苷0.063 9 mg/mL、芍药苷0.198 1 mg/mL）25 mL，制备供试品溶液，进样测定，计算得马兜铃酸Ⅰ、氧化芍药苷、芍药内酯苷和芍药苷的平均回收率分别为97.47%、99.09%、100.09%、98.88%，RSD值分别为1.19%、1.60%、0.84%、0.65%。

取3批养阴降压胶囊，制备供试品溶液，进样测定，采用外标法计算马兜铃酸Ⅰ、氧化芍药苷、芍药内酯苷和芍药苷的质量分数，结果见表 2。

表 2(Table 2)

表 2 养阴降压胶囊中马兜铃酸Ⅰ、氧化芍药苷、芍药内酯苷和芍药苷的测定结果 Table 2 Determination of aristolochic acid Ⅰ, oxypaeoniflorin, alibiflorin, and paeoniflorin in Yangyin Jiangya Capsules (n=3) 批号 质量分数/(mg·g-1) 马兜铃酸Ⅰ 氧化芍药苷 芍药内酯苷 芍药苷 20151201 1.247 0.726 3.152 9.391 20160101 1.129 0.782 3.374 9.920 20160301 1.458 0.695 2.933 8.657

表 2 养阴降压胶囊中马兜铃酸Ⅰ、氧化芍药苷、芍药内酯苷和芍药苷的测定结果 Table 2 Determination of aristolochic acid Ⅰ, oxypaeoniflorin, alibiflorin, and paeoniflorin in Yangyin Jiangya Capsules

曾考察了不同提取方式（加热回流提取、超声提取）对马兜铃酸Ⅰ、氧化芍药苷、芍药内酯苷和芍药苷提取率的影响，结果显示加热回流提取和超声提取所测4个成分的提取效果差异不大，考虑到测定操作的便捷性和稳定性，选取超声提取作为供试品溶液制备的最佳提取方式；在超声提取的基础上对不同提取溶剂（乙醇、甲醇）、不同提取时间（20、30、40 min）进行考察，最终优选出养阴降压胶囊样品最佳的供试品溶液制备方法为甲醇超声提取30 min。

分别对乙腈-0.02%磷酸溶液^[3]、乙腈-0.05%磷酸溶液、乙腈-0.2%醋酸溶液^[4]、乙腈-0.1%醋酸溶液、甲醇-乙腈（2：1）与0.02%磷酸溶液不同的流动相体系进行了考察，结果显示，采用甲醇-乙腈（2：1）与0.02%磷酸溶液流动相体系时所得到的色谱图基线平稳，所测4个成分马兜铃酸Ⅰ、氧化芍药苷、芍药内酯苷和芍药苷分离效果较好，因此选择甲醇-乙腈（2：1）与0.02%磷酸溶液进行梯度洗脱。

本实验采用HPLC波长切换法同时对养阴降压胶囊中氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷和马兜铃酸Ⅰ进行了测定，方法简便，重复性好，为有效控制养阴降压胶囊的质量提供了依据。