中草药  2016, Vol. 47 Issue (9): 1492-1495
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引用本文doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.09.007
罗鑫, 王雪晶, 赵祎武, 黄文哲, 许治良, 王振中, 萧伟. 羌活化学成分研究[J]. 中草药, 2016, 47(9): 1492-1495.
LUO Xin, WANG Xue-jing, ZHAO Yi-wu, HUANG Wen-zhe, XU Zhi-liang, WANG Zhen-zhong, XIAO Wei. Chemical constituents from Notopterygium incisum[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2016, 47(9): 1492-1495.
羌活化学成分研究
罗鑫1,2,3, 王雪晶1,2,3, 赵祎武1,2,3, 黄文哲1,2,3, 许治良1,2,3, 王振中1,2,3, 萧伟1,2,3     
1. 江苏康缘药业股份有限公司, 江苏连云港 222000;
2. 中药制药过程新技术国家重点实验室, 江苏连云港 222000;
3. 中药提取精制新技术重点研究室, 江苏连云港 222000
收稿日期: 2015-12-25
基金项目: 科技部重大新药创制:现代中药创新集群与数字制药技术平台(2013ZX09402203)
作者简介: 罗鑫,硕士,主要从事中药新药研究工作。Tel:18261338700(0518)81152323,E-mail:luo1127xin@163.com
通讯作者: 萧伟,男,研究员级高级工程师,博士,研究方向为中药新药的研究与开发。Tel:(0518)81152367,E-mail:kanionlunwen@163.com
摘要: 目的 对羌活Notopterygium incisum的化学成分进行研究。方法 采用硅胶柱色谱、HPLC以及Sephadex LH-20凝胶柱色谱等方法进行分离纯化,并结合现代波谱学技术对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果 从羌活的70%乙醇提取物中分离得到14个化合物,分别鉴定为7-羟基香豆素(1)、5,7-二甲氧基香豆素(2)、紫花前胡内酯(3)、佛手酚(4)、佛手柑内酯(5)、异虎耳草素(6)、比克白芷内酯(7)、(+)-顺式凯林内酯(8)、(-)-反式凯林内酯(9)、茴香酸对羟基苯乙酯(10)、5-甲氧基-8-羟基补骨脂内酯(11)、阿魏酸(12)、异欧前胡素(13)和异补骨脂素(14)。结论 化合物2 、7~9 和11 为首次从羌活属植物中分离得到。
关键词: 羌活     紫花前胡内酯     比克白芷内酯     (+)-顺式凯林内酯     (-)-反式凯林内酯    
Chemical constituents from Notopterygium incisum
LUO Xin1,2,3, WANG Xue-jing1,2,3, ZHAO Yi-wu1,2,3, HUANG Wen-zhe1,2,3, XU Zhi-liang1,2,3, WANG Zhen-zhong1,2,3, XIAO Wei1,2,3    
1. Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co., Ltd., Lianyungang 222000, China;
2. State Key Laboratory of New-tech for Chinese Medicine Pharmaceutical Process, Lianyungang 222000, China;
3. The Key Laboratory for the New Technique Research of TCM Extraction and Purification, Lianyungang 222000, China
Abstract: Objective To investigate the chemical constituents of Notopterygium incisum. Methods The chemical constituents were isolated by silica gel column chromatography, HPLC, and Sephadex LH-20 column chromatography. Their structures were identified on the basis of spectral data analysis. Results Fourteen compounds were isolated and identified as 7-hydroxycoumarin (1), 5,7-dimethoxycoumarin (2), nodakenetin (3), bergaptol (4), bergapten (5), isopimpinellin (6), byakangelicin (7), (+)-cis-khellactone (8), (-)-trans-khellactone (9), p-hydroxypenehtyl anisate (10), 5-methoxy-8-hydroxypsoralen (11), ferulic acid (12), isoimperatorin (13), and isopsoralen (14). Conclusion Compounds 2, 7-9, and 11 are isolated from the plants of Notopterygium H. Boiss. for the first time.
Key words: Notopterygium incisum Ting ex H.T.Chang     nodakenetin     byakangelicin     (+)-cis-khellactone     (?)-trans-khellactone    

羌活为伞形科（Umbelliferae）羌活属Notoptery- gium H.Boiss.植物羌活Notopterygium incisum Ting ex H.T.Chang或宽叶羌活Notopterygium franchetii H.de Boiss.的干燥根茎和根，性味辛、苦，温，归膀胱、肾经，具有解表散寒、祛风除湿、止痛等功效，用于风寒感冒、头痛项强、风湿痹痛和肩背酸痛[1]。羌活是中、藏、羌医药体系中常用的中药，其药用历史悠久，应用广泛[2]，现代药理学研究表明羌活具有解热、镇痛、抗炎、抗血小板凝集、抗心律失常和抗心肌缺血等作用。其化学成分复杂，主要有挥发油类、香豆素类、酚酸类以及倍半萜类等[3,4,5]。本实验从羌活的70%乙醇提取物中分离得到14个化合物，并鉴定其结构，分别为7-羟基香豆素（7-hydroxycoumarin，1）、5,7-二甲氧基香豆素（5,7-dimethoxycoumarin，2）、紫花前胡内酯（nodakenetin，3）、佛手酚（bergaptol，4）、佛手柑内酯（bergapten，5）、异虎耳草素（isopimpinellin，6）、比克白芷内酯（byakangelicin，7）、(+)-顺式凯林内酯[(+)-cis-khellactone，8]、(−)-反式凯林内酯[(−)-trans-khellactone，9]、茴香酸对羟基苯乙酯（p-hydroxypenehtyl anisate，10）、5-甲氧基-8-羟基补骨脂内酯（5-methoxy-8-hydroxypsoralen，11）、阿魏酸（ferulicacid，12）、异欧前胡素（isoimperatorin，13）和异补骨脂素（isopsoralen，14）。其中化合物2，7～9和11为首次从羌活属植物中分离得到。

1 仪器与材料

Agilent 1260制备型高效液相色谱仪（美国Agilent）；Bruker-AV-400型核磁共振光谱仪；Sephadex LH-20（Pharmacia公司）；Fuji C18色谱柱（250 mm×50 mm，5 μm）；色谱乙腈（OCEANPAK）；薄层及柱色谱硅胶（青岛海洋化工厂）；分析纯试剂（南京化学试剂有限公司）。

羌活药材经南京中医药大学吴启南教授鉴定为伞形科植物羌活Notopterygium incisum Ting ex H.T.Chang的干燥根茎。

2 提取分离

羌活的干燥根茎10 kg，加95%乙醇回流提取3次，每次2 h，合并提取液，减压浓缩得浸膏500 g。用水分散后依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取，减压浓缩得石油醚萃取物120 g，醋酸乙酯萃取物100 g，正丁醇萃取物50 g。取石油醚萃取物100 g经硅胶柱色谱，以石油醚-丙酮（80∶1→0∶100）梯度洗脱，收集流分A1～A9，其中A3经纯化得到化合物13（55mg）；A5经硅胶柱色谱以石油醚-醋酸乙酯梯度洗脱，纯化后得化合物2（25mg），5（28mg）；A6经硅胶柱色谱以石油醚-醋酸乙酯梯度洗脱，再经Sephadex LH-20纯化得到化合物14（18 mg）。醋酸乙酯萃取物经硅胶柱色谱，以石油醚-丙酮（90∶1→0∶100）梯度洗脱后，收集流分B1～B6，其中B1经Sephadex LH-20反复纯化得到化合物1（22 mg）；B2经硅胶柱色谱以石油醚-醋酸乙酯（20∶1→0∶100）梯度洗脱，结合制备型HPLC，分离纯化得化合物6（8 mg），11（12 mg），12（10 mg）；B4、B5经制备型HPLC，以乙腈（B）-水（A）为流动相，按照0～80 min，30%～45% B，80～100 min，45%～100% B的条件进行梯度洗脱，结合Sephadex LH-20反复纯化，最终得化合物3（42mg）、4（18mg）、7（13mg）、8（10mg）、9（17mg）、10（25mg）。

3 结构鉴定

化合物1：白色针晶（丙酮）。ESI-MS m/z: 161 [M-H]−。1H-NMR(400 MHz,CD3OD)δ:6.18(1H,d,J=9.5 Hz,H-3),6.70(1H,d,J=2.2 Hz,H-8),6.79(1H,dd,J=8.5,2.3 Hz,H-6),7.44(1H,d,J=8.5 Hz,H-5),7.84(1H,d,J=9.5 Hz,H-4)；13C-NMR(100 MHz,CD3OD)δ: 162.3(C-2),113.1(C-3),144.6(C-4),129.3(C-5),111.8(C-6),161.7(C-7),102.0(C-8),155.8(C-9),110.9(C-10)。以上数据与文献报道一致[6]，鉴定该化合物为7-羟基香豆素。

化合物2：白色结晶（CHCl3）。ESI-MS m/z: 207 [M＋H]+。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ:7.96(1H,d,J=9.4 Hz,H-4),6.42(1H,d,J=2.2 Hz,H-8),6.25(1H,d,J=2.2 Hz,H-6),6.17(1H,d,J=9.4 Hz,H-3),3.92(3H,s,7-OCH3),3.87(3H,s,5-OCH3)；13C-NMR(100 MHz,CDCl3)δ: 163.1(C-2),110.9(C-3),138.6(C-4),157.2(C-4a),156.5(C-5),94.6(C-6),161.0(C-7),92.3(C-8),103.6(C-8a),60.1(7-OCH3),55.7(5-OCH3)。以上数据与文献报道一致[7]，鉴定该化合物为5,7-二甲氧基香豆素。

化合物3：无色针晶（丙酮）。ESI-MS m/z: 245 [M-H]−。1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ:7.93(1H,d,J=9.6 Hz,H-4),7.47(1H,s,H-5),6.84(1H,s,H-8),6.24(1H,d,J=9.6 Hz,H-3),4.75(1H,t,J=8.8 Hz,H-2′),3.22(2H,m,H-3′),1.26(3H,s,H-5′),1.23(3H,s,H-6′)；13C-NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ: 160.6(C-2),111.3(C-3),144.6(C-4),124.1(C-5),125.6(C-6),163.0(C-7),97.0(C-8),155.0(C-9),112.2(C-10),90.4(C-2′),28.8(C-3′),70.8(C-4′),21.8(C-5′),23.2(C-6′)。以上数据与文献报道一致[8]，鉴定该化合物为紫花前胡内酯。

化合物4：无色针晶（丙酮）。1H-NMR(400 MHz,CD3OD)δ: 6.22(1H,d,J=9.8 Hz,H-3),8.32(1H,d,J=9.8 Hz,H-4),7.70(1H,d,J=2.3 Hz,H-2′),7.05(1H,d,J=1.8 Hz,H-3′),7.01(1H,s,H-8)；13C-NMR(100 MHz,CD3OD)δ: 163.8(C-2),114.2(C-3),141.7(C-4),146.0(C-5),111.6(C-6),159.4(C-7),92.2(C-8),154.4(C-9),105.1(C-10),149.7(C-2′),105.6(C-3′)。以上数据与文献报道一致[9]，鉴定该化合物为佛手酚。

化合物5：无色针晶（甲醇）。ESI-MS m/z: 217 [M＋H]+。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ:8.16(1H,d,J=9.8 Hz,H-4),7.62(1H,d,J=2.3 Hz,H-2′),7.13(1H,s,H-8),7.05(1H,d,J=2.3 Hz,H-3′),6.29(1H,d,J=9.8 Hz,H-3),4.27(3H,s,5-OCH3)；13C-NMR(100 MHz,CDCl3)δ: 161.1(C-2),112.9(C-3),139.2(C-4),149.5(C-5),113.4(C-6),157.0(C-7),94.3(C-8),152.2(C-9),106.6(C-10),144.8(C-2′),105.1(C-3′),60.3(5-OCH3)。以上数据与文献报道一致[10]，鉴定该化合物为佛手苷内酯。

化合物6：无色针晶（甲醇）。1H-NMR(400 MHz,CD3OD)δ: 6.34(1H,d,J=9.8 Hz,H-3),8.18(1H,d,J=9.8 Hz,H-4),8.09(1H,d,J=2.3 Hz,H-2′),7.40(1H,d,J=2.3 Hz,H-3′),4.17(3H,s,5-OCH3),4.03(3H,s,8-OCH3)；13C-NMR(100 MHz,CD3OD)δ: 160.1(C-2),112.9(C-3),140.2(C-4),144.7(C-5),114.8(C-6),149.9(C-7),127.6(C-8),143.5(C-9),107.2(C-10),146.8(C-2′),106.2(C-3′),61.8(5-OCH3),61.2(8-OCH3)。以上数据与文献报道一致[11]，鉴定该化合物为异虎耳草素。

化合物7：白色针晶（甲醇）。ESI-MS m/z: 335 [M＋H]+。1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ:6.34(1H,d,J=9.8 Hz,H-3),8.19(1H,d,J=9.8 Hz,H-4),4.17(3H,s,5-OCH3),8.10(1H,d,J=2.3 Hz,H-2′),7.39(1H,d,J=2.3 Hz,H-3′),5.00(1H,d,J=5.7 Hz,H-2″),4.45(1H,dd,J=10.0,2.2 Hz,H-2″),3.64(1H,ddd,J=8.0,5.7,2.3 Hz,H-3″),4.38(1H,s,3″-OH),4.20(1H,s,4″-OH),1.04(3H,s,H-5″),1.13(3H,s,H-6″)；13C-NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ: 160.1(C-2),112.9(C-3),140.2(C-4),144.5(C-5),114.9(C-6),150.0(C-7),127.3(C-8),143.6(C-9),107.3(C-10),146.8(C-2′),106.1(C-3′),61.3(5-OCH3),76.3(C-2″),77.1(C-3″),71.2(C-4″),24.9(C-5″),27.7(C-6″)。以上数据与文献报道一致[12]，鉴定该化合物为比克白芷内酯。

化合物8：无色针晶（甲醇）。ESI-MS m/z: 263 [M＋H]+。1H-NMR(400 MHz,CD3OD)δ:6.24(1H,d,J=9.5 Hz,H-3),7.86(1H,d,J=9.5 Hz,H-4),7.44(1H,d,J=8.6 Hz,H-5),6.76(1H,d,J=8.6 Hz,H-6),3.75(1H,d,J=4.7 Hz,H-3′),5.07(1H d,J=4.7 Hz,H-4′),1.42(3H,s,H-5′),1.43(3H,s,H-6′)；13C-NMR(100 MHz,CD3OD)δ: 163.4(C-2),112.8(C-3),146.3(C-4),129.9(C-5),113.7(C-6),155.8(C-7),115.8(C-8),157.9(C-9),112.7(C-10),80.2(C-2′),62.1(C-3′),73.1(C-4′),21.4(C-5′),26.9(C-6′)。以上数据与文献报道一致[13]，鉴定该化合物为(+)-顺式凯林内酯。

化合物9：无色针晶（甲醇）。ESI-MS m/z: 263 [M＋H]+。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ: 6.25(1H,d,J=9.5 Hz,H-3),7.88(1H,d,J=9.5 Hz,H-4),7.46(1H,d,J=8.6 Hz,H-5),6.80(1H,d,J=8.6 Hz,H-6),3.74(1H,d,J=4.3 Hz,H-3′),4.92(1H d,J=4.3 Hz,H-4′),1.38(3H,s,H-5′),1.45(3H,s,H-6′)；13C-NMR(100 MHz,CD3OD)δ: 163.5(C-2),112.7(C-3),146.4(C-4),129.9(C-5),113.8(C-6),156.0(C-7),115.9(C-8),158.0(C-9),112.2(C-10),79.9(C-2′),66.1(C-3′),75.0(C-4′),23.2(C-5′),25.0(C-6′)。以上数据与文献报道一致[13]，鉴定该化合物为(−)-反式凯林内酯。

化合物10：无色针晶（丙酮）。ESI-MS m/z: 272 [M＋H]+。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ:6.76(2H,d,J=8.5 Hz,H-2,6),7.11(2H,d,J=8.5 Hz,H-3,5),2.96(2H,t,J=7.0 Hz,H-7),4.42(2H,t,J=7.0 Hz,H-8),7.96(2H,d,J=8.5 Hz,H-2′,6′),6.90(2H,d,J=8.5 Hz,H-3′,5′),3.85(3H,s,-OCH3)；13C-NMR(100 MHz,CDCl3)δ: 122.3(C-1),131.4(C-2,6),115.6(C-3,5),154.4(C-4),34.6(C-7),65.6(C-8),129.4(C-1′),113.4(C-2′,6′),129.8(C-3′,5′),163.4(C-4′),166.4(C-7′),55.4(-OCH3)。以上数据与文献报道一致[14]，鉴定该化合物为茴香酸对羟基苯乙酯。

化合物11：无色针晶（丙酮）。ESI-MS m/z: 233 [M＋H]+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ: 8.18(1H,d,J=9.8 Hz,H-4),8.08(1H,d,J=2.3 Hz,H-2′),7.29(1H,d,J=2.3 Hz,H-3′),6.34(1H,d,J=9.8 Hz,H-3),4.11(3H,s,5-OCH3)；13C-NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ: 160.1(C-2),112.3(C-3),139.6(C-4),141.4(C-5),114.6(C-6),147.0(C-7),125.3(C-8),140.0(C-9),107.0(C-10),146.4(C-2′),105.8(C-3′),61.3(5-OCH3)。以上数据与文献报道一致[15]，鉴定该化合物为5-甲氧基-8-羟基补骨脂内酯。

化合物12：白色粉末，ESI-MS m/z: 217 [M＋Na]+。1H-NMR(400 MHz,CD3OD)δ: 7.60(1H,d,J=15.9Hz,H-7),7.17(1H,d,J=1.9 Hz,H-2),7.06(1H,dd,J=1.9,8.2 Hz,H-6),6.81(1H,d,J=8.2 Hz,H-5),6.31(1H,d,J=15.9 Hz,H-8),3.89(3H,s,-OCH3)；13C-NMR(100MHz,CD3OD)δ: 171.1(-COOH),146.8(C-7),150.5(C-4),149.4(C-3),127.8(C-1),124.0(C-8),116.5(C-6),116.1(C-5),111.7(C-2),56.4(-OCH3)。以上数据与文献报道一致[16]，鉴定该化合物为阿魏酸。

化合物13：无色针晶（丙酮）。ESI-MS m/z: 271 [M＋H]+。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ:8.05(1H,d,J=9.8 Hz,H-4),7.55(1H,d,J=2.3 Hz,H-2′),7.04(1H,s,H-8),6.92(1H,d,J=2.3 Hz,H-3′),6.14(1H,d,J=9.8 Hz,H-3),5.45(1H,t,J=7.0 Hz,H-3″),4.88(2H,d,J=7.0 Hz,H-2″),1.70(3H,s,H-5″),1.79(3H,s,H-6″)；13C-NMR(100MHz,CDCl3)δ: 161.1(C-2),112.3(C-3),140.0(C-4),149.4(C-5),114.2(C-6),157.8(C-7),94.3(C-8),152.5(C-9),107.8(C-10),144.3(C-2′),104.8(C-3′),69.7(C-2″),119.5(C-3″),139.1(C-4″),25.2(C-5″),20.9(C-6″)。以上数据与文献报道一致[17]，鉴定该化合物为异欧前胡素。

化合物14：无色针晶（丙酮）。ESI-MS m/z: 187 [M＋H]+。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ:7.78(1H,d,J=9.8 Hz,H-4),7.69(1H,d,J=2.3 Hz,H-2′),7.42(1H,d,J=8.5 Hz,H-5),7.36(1H,d,J=8.5 Hz,H-6),7.12(1H,d,J=2.3 Hz,H-3′),6.34(1H,d,J=9.8 Hz,H-3)；13C-NMR(100 MHz,CDCl3)δ:160.1(C-2),114.3(C-3),144.6(C-4),124.4(C-5),109.2(C-6),157.8(C-7),117.3(C-8),149.0(C-9),113.8(C-10),146.3(C-2′),104.8(C-3′)。以上数据与文献报道一致[18]，鉴定该化合物为异补骨脂素。

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