中草药  2016, Vol. 47 Issue (9): 1477-1479
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引用本文doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.09.004
邹辉, 徐康平, 易美玲, 盛习锋, 谭桂山. 翠云草中1个新的双黄酮类化合物[J]. 中草药, 2016, 47(9): 1477-1479.
ZOU Hui, XU Kang-ping, YI Mei-ling, SHENG Xi-feng, TAN Gui-shan. A new biflavonoid from Selaginella uncinata[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2016, 47(9): 1477-1479.
翠云草中1个新的双黄酮类化合物
邹辉1, 徐康平2, 易美玲1, 盛习锋1, 谭桂山2,3     
1. 湖南师范大学医学院, 湖南长沙 410013;
2. 中南大学药学院, 湖南长沙 410013;
3. 中南大学湘雅医院, 湖南长沙 410006
收稿日期: 2016-01-19
基金项目: 国家自然科学基金项目(31370370)
作者简介: 邹辉,讲师,硕士生导师。Tel:(0731)88912473,E-mail:zouhui308@163.com
通信作者: 谭桂山,教授,博士生导师。 Tel:(0731)82650395 E-mail:tgs395@csu.edu.cn
摘要：目的 研究翠云草Selaginella uncinata全草的化学成分。方法 采用大孔吸附树脂、硅胶、Sephadex LH-20、高效液相色谱等柱色谱方法进行分离纯化,通过NMR、HR-ESI-MS等技术鉴定化合物的结构。结果 从翠云草全草75%乙醇水提取物中分离得到1个新的双黄酮类化合物,鉴定为4',7″-二甲氧基-2″,3″-二氢南方贝壳杉双黄酮(1)。结论 化合物1 为新的南方贝壳杉型的双黄酮类化合物,命名为翠云草双黄酮。
关键词： 翠云草     卷柏属     4',7"-二甲氧基-2",3"-二氢南方贝壳杉双黄酮     翠云草双黄酮     双黄酮    
A new biflavonoid from Selaginella uncinata
ZOU Hui1, XU Kang-ping2, YI Mei-ling1, SHENG Xi-feng1, TAN Gui-shan2,3    
1. Medical College, Hunan Normal University, Changsha 410013, China;
2. School of Pharmaceutical Sciences, Central South University, Changsha 410013, China;
3. Xiangya Hospital of Central South University, Changsha 410006, China
Abstract: Objective To investigate the chemical constituents from the whole plants of Selaginella uncinata. Methods The compound was isolated and purified by macroporous resin, silica gel, and Sephadex LH-20 column chromatography, as well as preparative HPLC. Its structure was identified on the basis of spectroscopic techniques including UV, IR, 1D-, 2D-NMR, and HR-ESI-MS. Results One biflavonoid was isolated from the 75% ethanol aqueous extract and identified as 4',7″-di-O-methyl-2″,3″-dihydrorobustaflavone (1). Conclusion Compound 1 is a new biflavonoid named uncibiflavone.
Key words: Selaginella uncinata(Desv.) Spring     Selaginella P.Beauv.     4',7"-di-O-methyl-2",3"-dihydrorobusta-flavone     uncibiflavone     biflavonoid    

翠云草Selaginella uncinata (Desv.) Spring为卷柏科（Belaginellaceae）卷柏属Selaginella P. Beauv. 植物翠云草的全草，又名蓝地柏、绿绒草，主要分布于我国中部、南部各省份，是一种在民间被广泛使用的中草药，具有清热利湿、解毒、消瘀及止血的功效[1]。现代药理研究发现翠云草具有抗菌[2]、抗病毒[3]、抗缺氧[4]及抗肿瘤[5]等作用，植物化学研究证实翠云草中的主要活性成分为黄酮类化合物[6, 7, 8]。本实验从翠云草75%乙醇水提取物中分离得到1个新的双黄酮类化合物，鉴定为4′,7″-二甲氧基-2″,3″-二氢南方贝壳杉双黄酮（4′,7″-di-O-methyl-2″,3″-dihydrorobustaflavone，1），命名为翠云草双黄酮。

1 仪器与材料

Bruker 傅里叶变换红外光谱仪（德国Bruker公司）；UV Probe-2450型紫外分光光度计（日本岛津公司）；Bruker AV-500 MHz超导核磁共振仪（德国Bruker公司）；Finnigan LCQ-Advantage型质谱仪（美国ThermoFinnigan公司）；D101大孔吸附树脂（安徽三星树脂科技有限公司）；薄层色谱硅胶GF254和柱色谱硅胶（200～300目）均为青岛海洋化工厂生产；聚酰胺（100～200目，国药集团）；Agilent 1100型液相色谱仪；依利特Sinochrom ODS-BP色谱柱（250 mm×10 mm，10 μm）；Sephadex LH-20（日本TOYOPEARL TOSOH公司）；乙醇、三氯甲烷、甲醇均为分析纯，乙腈为色谱纯，纯水机自制超纯水。

翠云草药材于2009年7月采自湖南省怀化中方县，由厦门大学李政基教授鉴定为卷柏属植物翠云草Selaginella uncinata (Desv.) Spring的全草，标本（No. 20090710）保存于中南大学药学院。

2 提取与分离

翠云草全草（20 kg）粉碎后用75%乙醇水回流提取（2×2 h），合并提取液，浓缩、真空干燥后得提取物2.5 kg。提取物拌样上大孔吸附树脂D101柱，分别以水及40%、70%、95%乙醇梯度洗脱得4个部位；70%乙醇部位经正相硅胶柱色谱，以三氯甲烷-甲醇（100∶0→0∶100）梯度洗脱，TLC检测后合并得到7个流分（A～G），流分B经聚酰胺柱色谱，以乙醇-水梯度洗脱，得到50个流分（Fr. B1～B50）；Fr. B23～B25（乙醇-水50∶50）经Sephadex LH-20柱色谱和半制备HPLC（45%乙腈-水），得化合物1（13 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：淡黄色无定形粉末，盐酸-镁粉反应呈阳性；UV光谱显示在268、293、334 nm有最大吸收；IR谱提示含有共轭羰基（1 645,1 635 cm-1）和苯环（1 601,1 575,1 488 cm-1），以上信息提示化合物1为黄酮类化合物。HR-ESI-MS m/z 567.129 8 [M－H]-（计算值为567.129 1），推断该化合物的分子式为C32H24O10。

化合物1的1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6) 谱在低场区显示13个氢信号，δH 12.95 (1H,s,5-OH),12.19 (1H,s,5″-OH) 为黄酮类化合物5-OH的特征信号，δH 8.07 (1H,dd,J = 8.5,2.5 Hz,H-6′),7.77 (1H,d,J = 2.5 Hz,H-2′),7.22 (1H,d,J = 8.5 Hz,H-5′) 为1组AMX偶合系统的芳香氢信号，提示该化合物中含有1个1,3,4-三取代苯环的结构片段；δH 7.38 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-2′′′,6′′′),6.83 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-3′′′,5′′′) 为1组AA′XX′偶合系统的芳香氢信号，提示该化合物中含有1个对位取代苯环的结构片段；δH6.20 (1H,brs,H-6),6.50 (1H,brs,H-8) 为黄酮单元中A环间位取代芳香氢信号，δH6.87 (1H,s) 为黄酮单元H-3的信号；δH 6.33 (1H,s) 为二氢黄酮单元H-8的信号，δH 5.62～5.54 (1H,m) 为二氢黄酮单元H-2的信号；高场区给出2个甲氧基信号δH3.79 (3H,s),3.72 (3H,s)；此外，δH3.46～3.37 (1H,m),2.80～2.74 (1H,m) 为二氢黄酮单元2个H-3的信号。13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6) 谱共显示32个碳信号，结合HSQC谱确定其中包括1组黄酮单元碳信号、1组二氢黄酮单元碳信号以及2个甲氧基碳信号 (δC 56.4,56.7)。上述谱学数据表明化合物1是由1分子黄酮单元（Ⅰ）和1分子二氢黄酮单元（Ⅱ）连接而成的双黄酮类化合物。

在HMBC谱（图 1）中，H-2″与C-2′′′,6′′′远程相关，H-2′′′,6′′′与C-2″远程相关，H-3″与C-1′′′远程相关，提示结构单元Ⅱ为二氢黄酮单元；H-8″与C-6″,C-7″,C-9″远程相关，H-2′与C-6″的远程相关，提示单元Ⅰ和单元Ⅱ通过C-3′-C-6″的连接方式相连，即属于robustaflavone型的双黄酮[8]；4′-OMe,H-2′,H-6′与C-4′远程相关，提示一个甲氧基 (δH 3.79/3.78) 连在C-4′位；7″-OMe,H-8″与C-7″的远程相关提示另一甲氧基 (δH 3.72) 应连在C-7″，由此确定化合物1的平面结构。此外，由C-4′和C-7″的2个甲氧基引起旋转异构现象，使得化合物1的谱图信号出现多重性[9]，由此推断化合物1为一对旋转异构体。

图 1 化合物1的关键HMBC相关图 Fig. 1 Key HMBC of compound 1

综合以上解析，鉴定化合物1为4′,7″-二甲氧基- 2″,3″-二氢南方贝壳杉双黄酮，结构如图 2所示，该化合物是未见报道的新化合物，命名为翠云草双黄酮。结合1H-NMR、13C-NMR、1H-1H COSY、HSQC及HMBC谱对该化合物的碳氢信号进行归属，1H- NMR、13C-NMR数据见表 1。

图 2 化合物1的结构式 Fig. 2 Chemical structure of compound 1

表 1 化合物1的1H-NMR 和13C-NMR 数据 (500/125 MHz, DMSO-d6) Table 1 1H-NMRand 13C-NMR spectral data of compound 1 (500/125 MHz, DMSO-d6)
4 讨论

本实验对翠云草进行了化学成分研究，发现了1个新的双黄酮类化合物，该化合物属于南方贝壳杉型的黄酮类化合物，这一类型的化合物目前报道具有抗缺氧[7]、抗肿瘤[10]等药理作用，研究表明翠云草中的活性成分主要为黄酮类化合物，本实验报道的翠云草双黄酮（1）可能是翠云草发挥药效的又一物质基础，其药理活性值得进一步研究。

参考文献
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