小儿七星茶口服液组方由钩藤、蝉蜕、山楂、稻芽、薏苡仁、淡竹叶和甘草7种中药配伍而成，具有开胃消滞、清热定惊的功效，用于小儿积滞化热、消化不良、不思饮食、夜寐不安等。目前，《中国药典》2015年版对该制剂的主要质量控制方法为与山楂、钩藤和甘草对照药材进行TLC鉴别；UV法测定总黄酮的量；HPLC法测定甘草酸铵的量。

中药复方成分较复杂，传统质量控制方法只能以其中1～2种化学成分的量为检测指标，难以全面控制复方的内在质量^{[1, 2, 3]}。本研究在文献研究的基础上，采用HPLC分析技术，建立小儿七星茶口服液的指纹图谱，并对各色谱峰进行化学成分归属及分析其对应的来源药材，为小儿七星茶口服液的整体化学成分信息表征、质量控制、工艺改进及组效关系研究提供依据^{[4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16]}。

Waters 2695-2487高效液相色谱仪，美国Waters公司；AB SCIEX TripleTOF^TM 4600液相色谱-质谱联用仪，美国AB SCIEX公司；色谱柱为Ultimate AQ-C₁₈柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)、资生堂MGII-C₁₈柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)、Sepax Bio-C₁₈柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)、Agilent Eclipse XDB-C₁₈柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；Shimadzu(SIL-HTC/SPD-20A/C70-20AC/LC- 20AT)高效液相色谱仪，日本岛津公司；KQ-300DA型超声波清洗器，昆山舒美超声仪器有限公司；CP224S万分之一及CP225D十万分之一电子天平，赛多利斯公司；VOS-201SD真空干燥箱，东京理化公司。

乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。甘草苷(批号为111610-2011106，质量分数按93.7%计)，购于中国食品药品检定研究院。

钩藤、蝉蜕、山楂、稻芽、薏苡仁、淡竹叶、甘草及21批小儿七星茶口服液(批号分别为20120201、20120202、20120203、20120302、20120501、20120502、20120503、20120504、20120602、20120606、20120608、20120610、20120702、20120703、20120710、20120802、20120806、20120812、20120905、20100914、20121002)均由中山市中智药业集团有限公司提供。7味原料药材均经中智药业集团贾世清药师鉴定为正品，其中钩藤Uncariae cum Uncis Ramulus 来源于茜草科(Rubiaceae)植物钩藤Uncaria rhynchophylla (Miq.) Miq. ex Havil的干燥带钩茎枝；蝉蜕Cicadae Cordyceps来源于蝉科昆虫黑蚱Cryptotympana pustulata Fabricius的若虫羽化时脱落的皮壳；山楂Crataegi Fructus来源于蔷薇科(Rosaceae)植物山楂Crataegus pinnatifida Bge. 的干燥成熟果实；稻芽Oryzae Sativae Fructus来源于禾本科(Gramineae)植物稻Oryza sativa L. 的成熟果实经发芽干燥的炮制加工品；薏苡仁Coicis Semen来源于禾本科(Gramineae)薏苡Coix lacryma-jobi L. var. mayuen (Roman.) Stapf的干燥成熟种仁；淡竹叶Lophatheri Herba来源于禾本科(Gramineae)植物淡竹叶Lophatherum gracile Brongn. 的干燥茎叶；甘草Glycyrrhizae Radix来源于豆科(Leguminosae)植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch. 的干燥根和根茎。

色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长为300 nm；柱温为30 ℃；体积流量为1.0 mL/min；进样量为5 μL；以乙腈-0.1%冰醋酸水溶液为流动相，梯度洗脱：0～30 min，5%～15%乙腈；30～60 min，15%～25%乙腈。

使用CDS自动校正；使用信息依赖性扫描(IDA)进行设置；MS范围为m/z 100～1 000，MS/MS范围为8 MS/MS，每组为m/z 50～1 000；采用动态背景扣除(DBS)。

精密称取甘草苷对照品1.40 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，配成质量浓度为0.14 mg/mL的对照品溶液。

取本品溶液用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

称取处方中7味药材，参照《中国药典》2015年版中小儿七星茶口服液的制备方法制备相应的单味药材溶液，即得各味药材供试液。

取批号为20120503的小儿七星茶口服液，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，连续进样6次，按“2.1”项下方法测定，记录色谱图，6张谱图经国家药典委员会的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》的操作规范计算，相似度不小于0.999，各主要色谱峰相对保留时间及峰面积的RSD均小于3%，说明仪器精密度较高。

取批号为20120503的小儿七星茶口服液，共6份，分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液，各取5 μL注入液相色谱仪，按“2.1”项下方法测定，记录色谱图，6张谱图经国家药典委员会的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》操作规范计算，相似度不小于0.999，各主要色谱峰相对保留时间及峰面积的RSD均小于3%，表明方法的重复性较好。

取批号为20120503的小儿七星茶口服液，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下方法，分别在0、3、6、9、12、15、24、30、36 h取样测定，记录色谱图，9张谱图经国家药典委员会的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》的操作规范计算，相似度均大于0.98，说明供试品溶液在36 h内是稳定的。

(1)不同色谱柱的耐用性试验：取批号为20120503的小儿七星茶口服液，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别采用4根不同的色谱柱进样，按“2.1”项下方法测定，记录色谱图。色谱柱分别为Ultimate AQ-C₁₈柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；资生堂MGII-C₁₈柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；Sepax Bio-C₁₈柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；Agilent Eclipse XDB-C₁₈柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)。4张谱图经国家药典委员会的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》操作规范计算，相似度均大于0.95。说明本法对不同色谱柱的适用性广。

(2)不同液相色谱仪的耐用性试验：取批号为20120503的小儿七星茶口服液，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别采用Waters 2695-2487和Shimadzu(SIL-HTC/SPD-20A/C70-20AC/LC-20AT)液相色谱仪进样，色谱柱均为Ultimate AQ-C₁₈(150 mm×4.6 mm，5 μm)，按“2.1”项下方法测定，记录色谱图。2张谱图经国家药典委员会的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》操作规范计算，相似度均大于0.98，说明本法对不同色谱仪的选择性低。

精密吸取小儿七星茶口服液供试品溶液(批号20120503)5 μL，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图。其中11号峰(甘草苷)峰形好，分离度好，选为参照峰(S)。

取小儿七星茶口服液21批，分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下方法测定，记录色谱图(图 1)。对21批样品指纹图谱进行数据分析：平均值法生成对照指纹图谱(图 1)，时间窗宽度为0.1 min，校正方式为多点校正。确定了12个色谱峰为小儿七星茶口服液所共有，确定其为共有指纹峰，且共有峰的总面积占总峰面积的90%以上。

图 1 21批小儿七星茶口服液指纹图谱及其对照指纹图谱 (R)Fig.1 HPLC fingerprint of 21 batches of Xiaoer Qixing Cha Oral Liquid and their reference fingerprints (R)

采用国家药典委员会的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》，将测定的21批样品指纹图谱数据与生成的对照指纹图谱进行相似度分析，结果21批样品的指纹图谱与对照图谱的相似分别为0.92、0.90、0.89、0.90、0.99、0.97、0.99、0.99、0.98、0.99、0.98、0.98、0.98、0.98、0.95、0.97、0.98、0.98、0.99、0.98、0.98。21批样品的指纹图谱与对照图谱比较，仅1批样品的相似度为0.89，其余20批样品的相似度均在0.90以上，说明本品的质量稳定性较好。

取小儿七星茶口服液供试品溶液(批号为20120503)、甘草苷对照品及7味药材供试品溶液，按“2.1”项下方法用DAD检测器测定，记录色谱图。通过各共有峰的保留时间和DAD光谱图比较分析，可知1号峰主要来源于薏苡仁、山楂、稻芽药材；2号峰来源于蝉蜕；3、4、6、7、8、9号峰主要来源于淡竹叶药材；5号峰来源于钩藤和淡竹叶；11、12号峰主要来源于甘草药材。10号峰未得到归属。处方中7味药的化学成分都在本指纹图谱中体现(图 2)。

图 2 小儿七星茶口服液指纹图谱中各共有峰归属色谱图Fig.2 Chromatogram of each common peak attribution in fingerprint of Xiaoer Qixing Cha Oral Liquid

用AB SCIEX Triple TOF^TM 4600液相色谱-质谱联用仪分析小儿七星茶口服液样品，Peakview软件判断化合物结构，各共有峰的成分指认结果如下：1号峰为vanilloloside，2号峰为protocatechuic acid，3号峰为neochlorogenic acid，4号峰为5-O-coumaroy-lquinic acid，5号峰为chlorogenic acid，6号峰为cryptochlorogenic acid，7号峰为3-O-coumaroy-lquinic acid，8号峰为4-O-coumaroylquinic acid，9号峰为p-coumaric acid，10号峰为phloridzin，11号峰为甘草苷(liquiritin)，12号峰为异甘草苷(isoliquiritin)。

本研究考察了直接微孔滤膜滤过进样、醋酸乙酯萃取回收溶剂后甲醇溶解、正丁醇萃取回收溶剂后甲醇溶解、正丁醇萃取过聚酰胺柱纯化甲醇洗脱液、加40%盐酸加热回流提取回收溶剂甲醇溶解，共6种小儿七星茶口服液供试品溶液制备方法，比较6种不同制备方法所得样品的分析图谱，结果直接滤过进样所得的图谱检测的成分相对较多、各峰高之间的比例适中，且基线比较平稳，样品不经过前处理有利于保存化学成分，故采用小儿七星茶口服液直接微孔滤膜滤过作为供试品溶液制备方法。

本研究比较了280、300、320、340 nm波长处的样品图谱，结果在300 nm波长下检测到的成分相对较多、各峰高比例适中、基线比较平稳，故确定检测波长为300 nm。

考察了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸溶液、乙腈-0.1%醋酸、乙腈-0.1%甲酸溶液、乙腈-0.1%冰醋酸溶液、乙腈-0.5%冰醋酸、乙腈-0.05%冰醋酸、乙腈-0.02%冰醋酸、乙腈-0.01%冰醋酸共10组流动相洗脱系统，采用乙腈-0.1%冰醋酸作为流动相，检测供试品所得峰的信息较多，基线较平稳，分离度、峰形和柱效均较佳。