复方红景天胶囊处方由红景天、玄参2味药材组成，主要用于治疗缺血性脑卒中^[1]。据报道，红景天中主要含有红景天苷、酪醇、大花红天素、没食子酸、洛塞维等成分^{[2, 3]}。红景天苷及其苷元酪醇为红景天已知有效成分^{[4, 5, 6, 7]}，大花红天素是红景天中特有成分，专属性好^[2]，药材中其量较高，对脑及肺微血管内皮细胞凋亡有调节作用^{[8, 9]}。玄参中主要含有环烯醚萜类、苯丙素类、三萜皂苷类、有机酸类等成分，其中哈巴苷、哈巴俄苷、安格洛苷C为玄参主要活性成分^[10]。原标准采用HPLC法分别测定了该制剂中红景天苷、酪醇、哈巴苷、哈巴俄苷、安格洛苷C；为更有效控制复方红景天胶囊的质量，本实验采用HPLC-UV-ELSD在同一色谱条件下，测定该制剂中大花红天素、没食子酸、红景天苷、酪醇、哈巴苷、哈巴俄苷、安格洛苷C、肉桂酸8个成分。结果表明，该方法良好，可为全面控制复方红景天胶囊内在质量提供参考。

ULtiMate 3000高效液相色谱仪，Thermo Fisher公司，DAD紫外检测器，SEDEX80 LT-ELSD检测器；BP211D、XP6电子天平，梅特勒-托利多国际股份有限公司。红景天苷（批号110818-201206，质量分数99.8%）、酪醇（批号111676-200401，质量分数100%）、没食子酸（批号110831-200803，质量分数90.1%）、肉桂酸（批号110786-200503，质量分数100%），均购自中国食品药品检定研究院；大花红天素，自制，批号20131210，质量分数99.89%；哈巴苷（批号MUST-15031105，质量分数99.88%）、哈巴俄苷（批号MUST-13071801，质量分数≥98%）、安格洛苷C（批号MUST-14120502，质量分数99.32%），成都曼斯特生物科技有限公司；复方红景天胶囊（批号140914、141015、141201、150311、150314、150316，规格：0.39 g/粒）由江苏康缘药业股份有限公司提供；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

取大花红天素、哈巴苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成含大花红天素670.84 μg/mL、哈巴苷593.68 μg/mL的混合对照品储备液①。

取红景天苷、哈巴俄苷、安格洛苷C、没食子酸、酪醇、肉桂酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成含红景天苷789.95 μg/mL、哈巴俄苷625.85 μg/mL、安格洛苷C 550.45 μg/mL、没食子酸114.10 μg/mL、酪醇196.25 μg/mL、肉桂酸68.95 μg/mL的混合对照品储备液②。

取复方红景天胶囊内容物约0.2 g，精密称定，至50 mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理30 min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

依照复方红景天胶囊标准，由相关辅料制得复方红景天阴性胶囊，按照“2.2”项下方法制得空白对照溶液。

色谱柱为KromasiL C₁₈柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈-0.3%冰醋酸水溶液^[8]，梯度洗脱程序为0～10 min，3%～10%乙腈；10～25 min，10%～25%乙腈；25～30 min，25%～50%乙腈；30～35 min，50%～80%乙腈；35～36 min，80%～3%乙腈；36～45 min，3%乙腈；体积流量1.0 mL/min，柱温30 ℃，进样体积10 μL；没食子酸、红景天苷、酪醇、哈巴俄苷、安格洛苷C、肉桂酸用紫外检测器检测，检测波长为275 nm；大花红天素、哈巴苷用蒸发光散射检测器检测，漂移管温度40 ℃，载气N₂，压力为150 kPa。

分别精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液，按照“2.4”项下方法进样检测，结果表明供试品色谱图中呈现与对照品主峰保留时间一致的色谱峰，阴性对照无干扰。大花红天素、没食子酸、红景天苷、酪醇、哈巴苷、哈巴俄苷、安格洛苷C、肉桂酸与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5，拖尾因子在1.00～1.10，理论塔板数以各色谱峰计均在10 000以上。结果见图 1～2。

图 1

Fig. 1

图 1 混合对照品 (A)、复方红景天胶囊供试品 (B) 和阴性对照样品 (C) 的HPLC-UV色谱图 Fig. 1 HPLC-UVchromatograms of mixed reference substances (A),sample (B),and negative control sample (C)

图 2

Fig. 2

图 2 混合对照品 (A)、复方红景天胶囊供试品 (B) 和阴性对照样品 (C) 的HPLC-ELSD图谱 Fig. 2 HPLC-ELSD chromatograms of mixed reference substances (A),sample (B),and negative control sample (C)

取“2.1”项下混合对照品储备液①，精密量取1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、10.0 mL，分别置于10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得系列混合对照品溶液。按“2.4”项色谱条件，分别精密吸取上述溶液各10 μL，测定峰面积，以质量浓度对数为横坐标（X），峰面积对数为纵坐标（Y）进行线性回归，结果表明，大花红天素、哈巴苷在相应质量浓度范围内呈良好线性关系，线性范围、回归方程、相关系数分别为大花红天素Y＝1.030 8 X－1.590 7，R²＝0.999 2，线性范围67.084～670.84 μg/mL；哈巴苷Y＝1.007 6 X－1.756 8，R²＝0.999 8，线性范围59.368～593.68 μg/mL。

取“2.1”项下混合对照品储备液②，精密量取1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL，分别置于10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得系列混合对照品溶液。按“2.4”项色谱条件，分别精密吸取上述溶液各10 μL，测定峰面积，以质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，结果表明，红景天苷、哈巴俄苷、安格洛苷C、没食子酸、酪醇、肉桂酸在相应质量浓度范围内呈良好线性关系，线性范围、回归方程、相关系数分别为没食子酸：Y＝0.306 8 X＋0.146 0，R²＝0.999 4，线性范围11.410～114.100 μg/mL；酪醇：Y＝0.053 9 X＋0.035 4，R²＝0.999 7，线性范围19.625～196.250 μg/mL；肉桂酸：Y＝0.288 6 X＋0.065 4，R²＝0.999 8，线性范围6.895～68.950 μg/mL；红景天苷：Y＝0.024 6 X－0.092 2，R²＝0.999 6，线性范围78.995～789.95 μg/mL；哈巴俄苷：Y＝0.432 2 X－0.684 7，R²＝0.999 5，线性范围62.585～625.85 μg/mL；安格洛苷C：Y＝0.097 1 X＋0.132 6，R²＝0.999 6，线性范围55.045～550.45 μg/mL。

精密吸取“2.1”项下的混合对照品溶液，连续进样6次，按上述色谱条件测定峰面积，计算，求得大花红天素、哈巴苷、没食子酸、酪醇、肉桂酸、红景天苷、哈巴俄苷、安格洛苷C峰面积的RSD分别为0.39%、1.03%、0.37%、1.01%、0.86%、0.65%、0.58%、0.31%。

取胶囊（批号140914）内容物，按照“2.2”项下方法制备6份供试品溶液，分别进样，测定峰面积，计算质量分数。结果大花红天素、哈巴苷、没食子酸、酪醇、肉桂酸、红景天苷、哈巴俄苷、安格洛苷C的平均质量分数的RSD分别为1.27%、0.97%、1.11%、0.57%、1.20%、1.56%、0.31%、0.23%。

取胶囊（批号140914）内容物，按照“2.2”项下方法制备供试品溶液，分别于2、4、8、12、16、24 h进样测定，记录峰面积。结果大花红天素、哈巴苷、没食子酸、酪醇、肉桂酸、红景天苷、哈巴俄苷、安格洛苷C峰面积的RSD分别为1.10%、1.84%、0.96%、1.91%、0.78%、1.33%、1.13%、1.85%。表明供试品溶液在24 h内稳定。

取已测定的样品（批号140914，大花红天素、没食子酸、红景天苷、酪醇、哈巴苷、哈巴俄苷、安格洛苷C、肉桂酸分别为33.78、4.42、29.80、8.52、27.46、24.11、22.88、2.72 mg/粒）0.1 g，精密称定，置50 mL量瓶中，精密加入大花红天素对照品8.708 mg、红景天苷对照品7.827 mg、哈巴苷对照品7.212 mg、哈巴俄苷对照品6.332 mg、安格洛苷C对照品6.009 mg、没食子酸、肉桂酸、酪醇对照品溶液（1.162、0.714、2.238 mg/mL）各1 mL，采用“2.2”项下供试品溶液制备方法制备6份供试品溶液，进样测定，计算回收率。结果大花红天素、红景天苷、酪醇、没食子酸、哈巴苷、哈巴俄苷、安格洛苷C、肉桂酸的平均回收率分别为100.8%、100.1%、100.8%、98.9%、98.9%、99.6%、100.7%、99.2%，RSD分别为0.64%、0.35%、0.65%、0.56%、0.26%、0.58%、1.00%、0.64%。

分别取不同批号的复方红景天胶囊适量，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.4”项下色谱条件测定，记录色谱图，计算8种成分质量分数。结果见表 1。

表 1 (Table 1)

表 1 6批复方红景天胶囊样品中8种成分定量测定结果 (n = 3) Table 1 Detemination of six batches of samples in Compound Rhodiola Capsule (n = 3) 批号 质量分数/(mg∙粒−1) 大花红天素 没食子酸 红景天苷 酪醇 哈巴苷 哈巴俄苷 安格洛苷C 肉桂酸 140914 33.78 4.42 29.80 8.52 27.46 24.11 22.88 2.72 141015 38.48 3.98 31.42 8.14 26.45 22.79 23.19 3.79 141201 31.23 4.56 32.06 10.44 26.87 20.82 23.76 3.45 150311 32.19 5.31 30.12 14.57 25.43 19.45 21.82 2.98 150314 35.26 5.29 28.23 13.29 24.18 20.19 22.01 4.15 150316 33.19 3.52 26.18 12.18 23.49 21.45 24.79 5.29

表 1 6批复方红景天胶囊样品中8种成分定量测定结果 (n = 3) Table 1 Detemination of six batches of samples in Compound Rhodiola Capsule (n = 3)

复方红景天胶囊中大花红天素紫外无吸收，哈巴苷为末端吸收，故选用蒸发光散射检测器（ELSD）对2种成分进行分析。ELSD虽为通用型质量检测器，但灵敏度较紫外检测器低，同时测定该制剂中8种成分较困难，故选择紫外检测器对红景天苷、酪醇、没食子酸、哈巴俄苷、安格洛苷C及肉桂酸6种成分进行分析，所以本实验建立了UV检测器与ELSD串联同时测定复方红景天胶囊中8种成分^{[11, 12, 13]}。

分别取红景天苷、酪醇、没食子酸、哈巴俄苷、安格洛苷C及肉桂酸的甲醇溶液用PDA检测器在200～400 nm扫描，结果表明没食子酸、红景天苷、酪醇在275 nm处有最大吸收，哈巴俄苷、肉桂酸在280 nm处有最大吸收，安格洛苷C在275、330 nm处均有吸收，故选择275 nm波长下测定6种成分，各指标成分峰峰型良好，基线平稳，分离度高。

考察了0、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%冰醋酸体积分数对分离度的影响。结果不同醋酸体积分数对峰的保留时间影响较大，对峰型和分离度也有一定的影响，以0.3%冰醋酸体积分数为佳。

以大花红天素、没食子酸、红景天苷、酪醇、哈巴苷、哈巴俄苷、安格洛苷C和肉桂酸的提取率为考察指标，考察了提取溶剂（甲醇及95%、70%乙醇）、提取方式（超声处理和回流提取）、提取溶剂用量（25、50、100 mL）、提取时间（15、30、45 min）的提取效果，结果表明采用甲醇50 mL超声处理30 min，提取收率最高。