中草药  2016, Vol. 47 Issue (23): 4134-4136
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引用本文doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.23.002
杨艳, 邢欢欢, 马航赢, 周玲, 李银科, 叶艳青, 胡秋芬, 周敏, 李建钢 . 羊脆木根皮中1个新的异苯并呋喃内脂类化合物及其细胞毒活性[J]. 中草药, 2016, 47(23): 4134-4136.
YANG Yan, XING Huan-huan, MA Hang-ying, ZHOU Ling, LI Yin-ke, YE Yan-qing, HU Qiu-fen, ZHOU Min, LI Jian-gang . A new isobenzofuranlactone from root barks of Pittosporum kerrii and its cytotoxicity[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2016, 47(23): 4134-4136 .
羊脆木根皮中1个新的异苯并呋喃内脂类化合物及其细胞毒活性
杨艳1, 邢欢欢1, 马航赢1, 周玲1, 李银科1, 叶艳青1, 胡秋芬1, 周敏1, 李建钢1,2     
1. 云南民族大学 民族药资源化学国家民委教育部重点实验室, 云南 昆明 650500 ;
2. 云南省曲靖市第一人民医院 麻醉科, 云南 曲靖 655000
收稿日期: 2016-06-29
基金项目: 国家自然科学基金资助项目（21362044，21032085）；云南省高校科技创新团队资助项目（IRTSTYN2014-11）
作者简介: 杨艳(1992-), 女, 硕士在读, 主要从事中药及天然药物活性成分研究。E-mail:915810485@qq.com
通信作者: 李建钢, 男, 硕士, 主治医师, 主要从事临床药学和麻醉相关工作。Tel:(086)68329045, E-mail:huqiufena@aliyun.com
摘要: 目的 对羊脆木Pittosporum kerrii根皮的化学成分进行研究。 方法 运用硅胶、凝胶及RP-HPLC等多种色谱技术进行分离纯化，并根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。 结果 从羊脆木根皮70%丙酮提取物中分离鉴定了3个异苯并呋喃内酯类化合物，分别为5-羟基-6-异戊烯基-异苯并呋喃-1（3H）-酮（1）、5-甲基-6-异戊烯基-异苯并呋喃-1（3H）-酮（2）、5-甲氧基-6-（3-O-乙酰基）-丙酰基-异苯并呋喃-1（3H）-酮（3）。其中化合物1为新化合物，命名为羊脆木素A。并对化合物1进行了细胞毒活性测试，其对NB4、SH-SY5Y、PC3、A549和MCF-7细胞的IC50值分别为3.6、5.2、8.8、5.7和6.0 μmol/L。 结论 化合物1~3均为首次从羊脆木中分离得到，化合物1为新化合物，且表现出细胞毒活性。
关键词: 羊脆木     异苯并呋喃内脂     细胞毒活性     5-羟基-6-异戊烯基-异苯并呋喃-1(3H)-酮     羊脆木素A    
A new isobenzofuranlactone from root barks of Pittosporum kerrii and its cytotoxicity
YANG Yan1, XING Huan-huan1, MA Hang-ying1, ZHOU Ling1, LI Yin-ke1, YE Yan-qing1, HU Qiu-fen1, ZHOU Min1, LI Jian-gang1,2     
1. Key Laboratory of Chemistry in Ethnic Medicinal Resources, State Ethnic Affairs Commission & Ministry of Education, Yunnan Minzu University, Kunming 650500, China ;
2. Department of Anesthesiology in Qujing First People's Hospital, Qujing 655000, China
Abstract: Objective To research the chemical constituents in the root barks of Pittosporum kerrii. Methods The chemical constituents in the root barks of P.kerrii were isolated by silica gel, Sephadex LH-20 column chromatographies, and RP-HPLC methods.Their structures were elucidated using various spectroscopic techniques, including extensive 1D and 2D NMR techniques. Results Three isobenzofuranlactones were isolated from the 70% acetone extract in the root barks of P.kerrii.They were 5-hydroxy-6-prenyl-isobenzofuran-1(3H)-one (1), 5-methyl-6-prenyl-isobenzofuran-1(3H)-one (2), and 3-(6-methoxy-3-oxo-1, 3-dihydroisobenzofuran-5-yl)-3-oxopropyl acetate (3). Conclusion Compounds 1-3 are isolated from P.kerrii for the first time.Compound 1 is a new compound and it is identified as 5-hydroxy-6-prenyl-isobenzofuran-1(3H)-one, named as kerriin A.And it displays obvious cytotoxicity against NB4, SH-SY5Y, PC3, A549, and MCF7 cells with IC50 values of 1.8, 2.6, 3.5, 4.2, and 2.3 μmol/L, respectively.
Key words: Pittosporum kerrii Craib     isobenzofuranlactone     cytotoxicity     5-hydroxy-6-prenyl-isobenzofuran-1(3H)-one     kerriin A    

羊脆木Pittosporum kerrii Craib为海桐花科（Pittosporaceae）海桐花属Pittosporum Bank植物，在我国主要分布在云南的东南至西南部，其根皮及树皮可入药，具有疏风、解表、止疟功效[1]。李祖强等[2-5]研究了羊脆木枝叶树皮的化学成分，主要报道的化合物有脂肪酸、黄酮、苯丙素、甾醇、三萜等类型。为充分利用我国丰富的天然植物药资源，进一步从天然植物宝库中发掘活性化合物，本实验对羊脆木根皮的化学成分进行了研究，从中分离得到3个异苯并呋喃内脂类化合物，分别鉴定为5-羟基-6-异戊烯基-异苯并呋喃-1(3H)-酮（5-hydroxy-6-prenyl-isobenzofuran-1(3H)-one，1）、5-甲基-6-异戊烯基-异苯并呋喃-1(3H)-酮[5-methyl-6-prenyl-isobenzofuran-1(3H)-one，2]、5-甲氧基-6-(3-O-乙酰基)-丙酰基-异苯并呋喃-1(3H)-酮[3-(6-methoxy-3-oxo-1, 3-dihydroisobenzofuran-5-yl)-3-oxopropyl acetate，3]。化合物1~3均为首次从羊脆木根皮中分离得到，化合物1为新化合物，命名为羊脆木素A，该化合物对NB4、SH-SY5Y、PC3、A549和MCF-7细胞的IC50值分别为3.6、5.2、8.8、5.7和6.0 μmol/L，具有明显的细胞毒活性。

1 仪器与材料

UV-2401A紫外光谱仪（日本岛津公司）；Bio-Rad FTS-185傅里叶变换红外光谱仪（美国BIO-RAD公司）；DRX-500型核磁共振仪（瑞士布鲁克公司）；LC-8A型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；Zorbax PrepHT GF（250 mm×21.2 mm，7 μm）色谱柱和Zorbax C18（250 mm×9.4 mm，5 μm）色谱柱（美国安捷伦公司）。柱色谱硅胶（80~100、200~300目）、GF254（100 mm×100 mm）硅胶板，均为青岛海洋化工厂生产；Sephadex LH-20凝胶为美国通用电气公司生产；薄层色谱法显色，显色剂为5% H2SO4乙醇溶液，喷洒后适当加热即可；工业用三氯甲烷、甲醇、醋酸乙酯、石油醚；色谱纯乙腈、四氢呋喃；超纯水。

羊脆木样品采于云南红河州河口县，经云南民族大学杨青松副教授鉴定为海桐花科海桐花属植物羊脆木Pittosporum kerrii Craib。本实验中所用材料为该植物的根皮部分。

2 提取与分离

取2.2 kg晒干的羊脆木根皮粉碎到30目，70%的丙酮水溶液提取4次，每次3.0 L，室温浸泡、超声4次（每次30 min），滤过。合并提取液，浓缩，醋酸乙酯萃取3次（每次2 L），减压浓缩得浸膏55.2 g。浸膏用80 g粗硅胶（80~100目）拌样，烘干，用320 g硅胶（150~200目）柱色谱分离，三氯甲烷-丙酮（9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、1:2）梯度洗脱，分成6个部分。选取8:2洗脱部分（3.2 g）通过HPLC进一步分离，过葡聚糖凝胶柱净化，可得化合物1（10.6 mg）、2（12.2 mg）、3（14.5 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：浅黄色胶状物；HR-ESI-MS m/z: 241.083 2 [M+Na]+（计算值241.084 1，C13H14NaO3）。结合1H-NMR和13C-NMR谱确定分子式为C13H14O3，不饱和度为7。IR光谱显示化合物中有羟基（3 389 cm−1）、羰基（1 715 cm−1）和芳环（1 610、1 566和1 467 cm−1）信号，UV在305、272和210 nm有最大吸收，也证实化合物中存在芳环结构。从1H-和13C-NMR谱（表 1）信号可以看出化合物中有1个1, 2, 4, 5-四取代的苯环δC 126.0 (s), 159.2 (s), 111.2 (d), 144.7 (s), 116.4 (s), 130.2 (d)；δH 6.74 (s), 7.78 (s)；1个异戊烯基δC 27.2 (t), 124.2 (d), 133.3 (s), 17.6 (q), 25.8 (q)；δH 3.27 (d, J=6.8 Hz)、5.30 (t, J=6.8 Hz)、1.57 (s)、1.81 (s)；1个氧化亚甲基δC 68.9 (t)和δH 5.52 (s)；1个酯羰基δC 168.6 (s)；1个酚羟基δH 10.44 (s)信号。根据H2-1′ (δH 5.52)和C-2′ (δC 168.6)、C-3 (δC 111.2)、C-4 (δC 144.7)、C-5 (δC 116.4)，H-3 (δH 6.74)和C-1 (δC 111.2)，H-6 (δH 7.78)和C-2′ (δC 168.6)的HMBC相关（图 1）可证实化合物1为异苯并呋喃内酯类化合物[6]，C-1′和C-2′通过氧原子连接形成了五元内酯环。根据H-8 (δH 5.30)和C-1 (δC 126.0)，H-7 (δH 3.27)和C-1 (δC 126.0)、C-2 (δC 159.2)、C-6 (δC 130.2)，H-6 (δH 7.78)和C-7 (δC 27.2)的HMBC相关可证实异戊烯基连接在苯环的1位，根据酚羟基(δH 10.44)和C-1 (δC 126.0)、C-2 (δC 159.2)、C-3 (δC 111.2)的HMBC相关可证实酚羟基取代在C-2位。至此化合物1的结构得以确定（图 2），命名为羊脆木素A。

表 1 化合物1的1H-NMR和13C-NMR数据(500/125 MHz, C5D5N) Table 1 1H-NMR and 13C-NMR data of compound 1 (500/125 MHz, C5D5N)

图 1 化合物1的主要HMBC（）相关 Fig.1 Key HMBC correlations () of compound 1

图 2 化合物1~3的结构 Fig.2 Structures of compounds 1-3

化合物2和3为已知化合物（图 2），通过其波谱数据与文献对比，分别鉴定为5-甲基-6-异戊烯基-异苯并呋喃-1(3H)-酮[7]、5-甲氧基-6-(3-O-乙酰基)-丙酰基-异苯并呋喃-1(3H)-酮[8]。

4 化合物的细胞毒活性

生物碱类化合物具有明显的细胞毒活性，因此对化合物1进行了细胞毒活性筛选。细胞毒活性检测参照文献方法[9]，采用改良的MTT测定法，以紫杉醇为阳性对照药，采用5种人源癌细胞株NB4、A549、SHSY5Y、PC3和MCF7。紫杉醇对5种癌细胞的IC50值分别为0.03、0.02、0.05、0.05和0.03 μmol/L，化合物1的IC50值分别为3.6、5.2、8.8、5.7和6.0 μmol/L，结果表明化合物1对所测试的人源肿瘤细胞具有细胞毒活性。

参考文献
[1] 江苏省植物研究所, 中国医学科学院药物研究所. 新华本草纲要(第3册)[M]. 上海: 上海科学技术出版社, 1990 .
[2] 罗蕾, 李祖强, 张吕丽, 等. 羊脆木的化学成分研究(I)[J]. 云南大学学报:自然科学版 , 2013, 35 (1) :83–86.
[3] 罗蕾, 张吕丽, 李祖强, 等. 羊脆木的化学成分研究(Ⅱ)[J]. 云南大学学报:自然科学版 , 2014, 35 (6) :903–906.
[4] 吴云飞, 罗蕾, 李祖强, 等. 羊脆木树皮的化学成分研究(I)[J]. 云南师范大学学报:自然科学版 , 2014, 34 (4) :61–64.
[5] 张吕丽, 任明丽, 海清, 等. 羊脆木树皮的化学成分研究(Ⅱ)[J]. 云南师范大学学报:自然科学版 , 2015, 35 (6) :50–52.
[6] Shen Q P, Li L, Xu X M, et al. Phenylpropanoids from the leaves of Nicotiana tabacum and their anti-tobacco mosaic virus activities[J]. Heterocycles , 2015, 91 (9) :1775–1780. DOI:10.3987/COM-15-13266
[7] Shen Q P, Xu X M, Zhang F M, et al. Two new benzolactones from the leaves of Nicotiana tabacum and their anti-tobacco mosaic virus activities[J]. Nat Prod Rep , 2016, 30 (13) :1464–1469. DOI:10.1080/14786419.2015.1104675
[8] Kong G H, Wu Y P, Shi J L, et al. Anti-tobacco mosaic virus phenylpropanoids from the stems of Nicotiana tabacum[J]. Phytochem Lett , 2015, 14 :230–233. DOI:10.1016/j.phytol.2015.10.023
[9] Hu Q F, Zhou B, Ye Y Q, et al. Cytotoxic deoxybenzoins and diphenylethylenes from Arundina Graminifolia[J]. J Nat Prod , 2013, 76 (10) :1854–1859. DOI:10.1021/np400379u