口腔溃疡是口腔黏膜病中的常见病症，发病率很高，其发病特点为在局部形成溃疡后可继发感染，造成溃疡局部组织炎症和坏死。口腔溃疡病因复杂，与多种因素有关，如口腔细菌或病毒感染、免疫失调、创伤、营养缺乏等因素^{[1, 2]}，目前尚无较好的治疗方法。清咽滴丸由甘草、诃子、青黛、人工牛黄、薄荷脑、冰片6味药材组成，具有疏风清热、解毒利咽之功效^[3]。清咽滴丸对急慢性咽炎具有显著的疗效^{[4, 5]}，现代研究表明，清咽滴丸具有抗病毒和抑菌作用^[6]。本研究根据其临床适应症及应用特点，制备大鼠口腔溃疡模型，观察清咽滴丸对口腔溃疡的治疗作用，并初步探讨其相关机制。

SPF级健康SD大鼠，体质量180～220 g，雄性，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号为SCXK（京）2006-0012。大鼠购入后检疫与驯化饲养1周，使其适应新环境并剔除体质量差异较大的动物。动物在室温18～24 ℃、湿度40%～50%条件下饲养，实验期间动物自由进食、饮水，昼夜节律正常。

清咽滴丸（天津中新药业集团股份有限公司，批号622047）；桂林西瓜霜（桂林三金药业股份有限公司，批号130861）；肿瘤坏死因子（TNF-α）试剂盒（上海宝曼生物科技有限公司）；冰醋酸（天津市化学试剂供销公司）。

酶标仪（Tecan）；游标卡尺（成都三和量具有限公司）；低温高速离心机（美国Beckman公司）；U-CMAD3型光学显微镜、C5060-ADU型光镜照相机（日本Olympus公司）；820 ROTARY MICROTOME型石蜡切片机（美国American Optical公司）。

SD大鼠60只，随机分为对照组，模型组，清咽滴丸10、30、90 mg/kg组（中剂量为临床等效剂量）、阳性药组（桂林西瓜霜200 mg/kg），每组10只。

参考文献方法^{[7, 8]}并结合本实验室前期建立的方法制备大鼠口腔溃疡模型，具体操作：将大鼠用10%水合氯醛（3 mL/kg）ip麻醉，于大鼠口腔左侧颊部黏膜下注射10%醋酸，0.1 mL/只，对照组注射等量的生理盐水，大鼠在24 h后即可形成口腔溃疡。

造模后第2天开始给药，将清咽滴丸研磨成粉，桂林西瓜霜直接取药粉，给药时将药粉（每只大鼠剂量的1/4）均匀涂于溃疡面上，每次给药均保证药物在口腔内停留3 min，剩余药粉（每只大鼠剂量的3/4）以水溶解后ig给予大鼠。模型组和对照组分别同法用等量生理盐水处理，连续给药10d。用游标卡尺测量各组大鼠给药前及给药后第4、7、10天的口腔溃疡的最大横径（d₁）及最大纵径（d₂），计算溃疡面积（溃疡面积＝π×d₁×d₂×1/4，π取值3.14）。各组大鼠于末次测量后，处死，并取下口腔溃疡处组织，部分溃疡组织加入9倍量的生理盐水进行匀浆处理，4 ℃、3 000 r/min离心10 min，分离上清液，按试剂盒方法测定TNF-α。剩余溃疡组织，10%甲醛固定，石蜡包埋，切片，镜检，观察各组口腔溃疡组织形态变化。

计量资料以表示，用SPSS 13.0软件包进行统计学处理，检验方法采用单因素方差分析（Oneway-AVONA），组间比较用LSD方法。

观察各组大鼠口腔溃疡面的大体形态，结果显示对照组无溃疡出现。注射醋酸后可出现明显的口腔溃疡，肉眼观察溃疡面的黏膜呈凹陷性缺损，大致呈圆形，表面为黄白色，周围充血水肿，说明口腔溃疡模型制备成功。

大鼠口腔溃疡模型呈现一定自愈性，随着时间的延长，溃疡面积逐渐减小。实验开始时各组大鼠口腔溃疡面积无显著性差异；在给药第4、7、10天，与模型组比较，高剂量清咽滴丸组和桂林西瓜霜组大鼠口腔溃疡面积均显著减小（P＜0.05、0.01）。结果提示清咽滴丸对醋酸诱导的口腔溃疡具有一定治疗作用，见表 1。

表 1(Table 1)

表 1 清咽滴丸对大鼠口腔溃疡面积的影响 $\left( {\bar x \pm s,n = 10} \right)$ Table 1 Effects of QDP on oral ulcer area of rats $\left( {\bar x \pm s,n = 10} \right)$ 组别 剂量/(mg·kg−1) 溃疡面积/mm2 给药前 给药第4天 给药第7天 给药第10天 对照 — 0.0±0.0 0.0±0.0 0.0±0.0 0.0±0.0 模型 — 26.8±5.8△△ 24.5±4.2△△ 15.1±3.2△△ 7.8±2.1△△ 桂林西瓜霜 200 26.2±5.1 15.0±3.9** 8.5±5.0 3.2±2.5 清咽滴丸 10 25.5±4.9 21.0±3.7 12.6±4.5 7.0±3.6 30 25.4±5.0 20.0±4.0 13.2±5.6 6.5±2.3 90 26.1±6.0 14.6±5.1** 9.2±4.1 3.8±2.1 与对照组比较：△△P＜0.01；与模型组比较：P＜0.05**P＜0.01，下同 △△P < 0.01 vs control group; P< 0.05 **P< 0.01 vs model group,same as below

表 1 清咽滴丸对大鼠口腔溃疡面积的影响 $\left( {\bar x \pm s,n = 10} \right)$ Table 1 Effects of QDP on oral ulcer area of rats $\left( {\bar x \pm s,n = 10} \right)$

3.2 对大鼠口腔溃疡部位组织病理变化的影响

对照组大鼠口腔黏膜上皮完整，下方为疏松结缔组织；模型组大鼠口腔黏膜破损，鳞状上皮破溃脱落，表面覆盖坏死组织，黏膜下有大量炎细胞浸润；与模型组比较，桂林西瓜霜组和高剂量清咽滴丸组大鼠溃疡部位组织病变明显减轻，炎性细胞浸润明显减少，部分被新生肉芽组织替代，溃疡愈合后鳞状上皮完整、增厚，黏膜更接近疏松结缔组织。结果表明，清咽滴丸可以改善醋酸诱导的口腔溃疡病理结构的改变，见图 1。

图 1 清咽滴丸对大鼠口腔溃疡部位组织病理变化的影响 Fig.1 Effects of QDP on oral ulcer pathological changes of rats

3.3 对大鼠口腔溃疡部位组织中TNF-α水平的影响

与对照组比较，模型组大鼠口腔溃疡组织中TNF-α水平显著升高（P＜0.01），说明模型组大鼠出现显著炎性症状。与模型组比较，高剂量清咽滴丸组和桂林西瓜霜组大鼠口腔溃疡组织中TNF-α水平显著降低（P＜0.05），结果见表 2。结果提示清咽滴丸可以降低溃疡组织中TNF-α水平，可能是其治疗醋酸诱导口腔溃疡的作用机制之一。

表 2(Table 2)

表 2 清咽滴丸对大鼠口腔溃疡组织中TNF-α水平的影响 $\left( {\bar x \pm s,n = 6} \right)$ Table 2 Effect of QDP on TNF-α level in tissue of oral ulcer in rats $\left( {\bar x \pm s,n = 6} \right)$ 组别 剂量/(mg·kg−1) TNF-α/(ng·g−1) 对照 — 40.44±3.40 模型 — 56.21±3.18△△ 桂林西瓜霜 200 44.93±5.98 清咽滴丸 10 52.26±7.08 30 47.33±6.12 90 45.54±6.20

表 2 清咽滴丸对大鼠口腔溃疡组织中TNF-α水平的影响 $\left( {\bar x \pm s,n = 6} \right)$ Table 2 Effect of QDP on TNF-α level in tissue of oral ulcer in rats $\left( {\bar x \pm s,n = 6} \right)$

4 讨论

口腔溃疡俗称“口疮”，是一种常见的发生于口腔黏膜的溃疡性损伤病症，发作时疼痛剧烈，局部灼痛明显，严重者还会影响饮食及语言交流，对日常生活造成极大不便，其中以复发性口腔溃疡（recurrent oral ulcer，ROU）最为常见。ROU是口腔临床常见多发病，占口腔溃疡的90%以上，反复发作，给患者带来极大困扰，严重影响患者生活质量。其中40%～50%的ROU患者有家族病史，但是ROU的发病机制以及愈合的机制尚不清楚，目前还没有足够理想的模型模拟该病。

化学性口腔溃疡的致病因素明确，尽管与ROU的病因不同，但其主要的病理变化以及其愈合的过程基本一致。因此本实验采用化学性口腔溃荡的动物模型代替ROU模型，通过醋酸诱导的口腔溃疡模型，初步明确了清咽滴丸在达到一定剂量的前提下具有促进溃疡愈合的作用，可以使口腔溃疡的面积显著减小、改善醋酸所致大鼠口腔溃疡局部组织病理改变。

TNF-α是炎症性疾病中很重要的损伤性细胞因子之一，可诱导包括自身在内的多种细胞因子（白细胞介素1β、白细胞介素6等）以及一些炎症介质的产生，损伤组织，继而加重炎症反应^[9]。本实验结果表明模型大鼠口腔溃疡部位组织中TNF-α水平显著升高，高剂量清咽滴丸可使口腔黏膜组织中TNF-α下降，从而减轻口腔溃疡的程度、促进溃疡愈合，为临床使用清咽滴丸提供了一定的实验基础和理论依据。