双水相萃取体系（aqueous two-phase systems，ATPS）一般由2种聚合物、聚合物和盐、离子液体和盐、小分子亲水有机溶剂和盐组成^{[1, 2, 3, 4]}。当2种成相物质在水中充分溶解后，在分子间相互排斥力和空间阻碍作用的影响下，经过一段时间平衡，形成互不渗透的两相体系。随着研究的深入，一些具有特异分离性能的亲和分配型双水相体系、智能型双水相体系以及胶束和反胶束双水相体系不断地被开发和应用，并被用于目标分子的选择性分离。常用的能够形成ATPS的单体见表 1。ATPS的萃取原理与常规的液/液溶剂萃取原理相似，当目标分子进入ATPS后，在分子间氢键、电荷相互作用、范德华力、疏水作用、界面性质作用的影响下，目标分子从一相传质到另一相，导致其在两相间的浓度产生差异，实现分离。因此成相物质的种类和浓度、盐的种类和浓度、溶液pH值，以及目标分子的大小、极性、空间构象等理化性质对ATPS的分配行为都有一定的影响，不同生物大分子和有机小分子的分配系数由此展现出明显差异。

表 1(Table 1)

表 1 常用的形成双水相体系的单体 Table 1 Monomers commonly used to form ATPS 形成双水相的成分 类型 组成单体 聚合物 聚乙二醇、葡聚糖、聚丙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基葡聚糖、乙基羟乙基纤维素、琼脂糖、聚乙烯醇 亲水小分子有机溶剂 乙醇、正丙醇、异丙醇、丙酮 离子液体 [BMIm] Cl、[HMIm] Cl、[OMIm] Cl、[BPy] Cl、[TBA] Cl 表面活性剂 TTAC、CPC、C12NE、SDBS、SDS 无机盐 Na2HPO4、K2HPO4、(NH4)2SO4、K3PO4、K2SO4、K2CO3

表 1 常用的形成双水相体系的单体 Table 1 Monomers commonly used to form ATPS

中药体系中微量成分较多，并且初生代谢和次生代谢产物共存，有效与无效成分共存，相互干扰严重，采用传统的分离纯化手段需要经过提取、萃取和多次反复的色谱分离才能得到高纯化合物。分离步骤繁多、繁琐耗时、产率偏低，很难满足后续活性筛选、结构改造等研究的需要。因此，选择适当的方法，简化分离步骤，一直受到学者的关注和重视。ATPS作为一种新型液/液萃取分离技术，具有易于放大、可连续化操作、易集成技术、绿色环保等优点^[5]，自1956年Albertsson^[6]首次应用ATPS技术实现叶绿素的分离以来，在分离纯化蛋白质、基因、生物纳米分子、细胞和天然产物等领域有着广泛应用^{[2, 3, 4]}。本文系统综述近5年ATPS在中药活性成分提取分离中的应用进展，以期抛砖引玉，推动中药活性成分分离的进步和发展。

ATPS作为一种绿色环保的新型分离技术，在中药活性成分分离领域得到了广泛的应用，文献调研显示其研究主要集中于黄酮、生物碱、萜类、多酚、色素和蒽醌等几类化合物，但其分离多局限于样品初级回收，分离对象多为中药的有效组分，需要集成色谱分离手段才能得到高纯单体化合物。

黄酮类化合物是广泛存在于植物中的一大类天然产物，在自然界中大部分以糖苷的形式存在，小部分以游离态苷元形式存在。黄酮类化合物能够抑制特异性关键酶，调节神经递质的释放，显示调血脂、降胆固醇、保肝抗炎等多样的生物活性^[7]。近5年，共有9种黄酮包括金丝桃苷、橙皮苷、芦丁、葛根素、黄芪苷、金雀异黄酮、鹰嘴豆素A、芹黄素和异槲皮苷通过ATPS从中药中分离纯化获得。葛根素能够治疗心血管疾病，Bi等^[8]结合气浮溶剂浮选技术，考察了聚合物的相对分子质量、(NH₄)₂SO₄的浓度和溶液pH值等因素对ATPS萃取葛根中葛根素效率的影响，发现以50% 聚乙二醇（PEG）600和350 g/L (NH₄)₂SO₄构建双水相体系，在pH 5.0时，以20 mL/min的浮选速率，浮选100 min，葛根素的回收率达到87%，双水相气浮溶剂浮选比 [PEG 600/(NH₄)₂SO₄] ATPS展现更高的分配因子达到26.1，而ATPS仅为3，最后经高速逆流色谱分离纯度超过95%；范杰平等^[9]利用离子液体耦合超声辅助建立了分离葛根素的新方法，经响应面设计法优化确定在总体积为5 mL的体系中[Bmim] Br的质量浓度为0.36 g/mL，K₂HPO₄的质量浓度为0.30 g/mL，加入葛根粉末0.3 g，在420 W、35 ℃条件下超声15 min，葛根素的提取率可达到89.90%，与热回流提取和普通超声提取相比，ATPS与超声耦合提取效率更高。对于橘皮中橙皮苷的研究，朱红菊等^[10]采用2种有机溶剂和3种无机盐分别建立异丙醇/Na₂CO₃、异丙醇/K₂HPO₄、丙酮/ Na₂CO₃、丙酮/K₂HPO₄ 4种ATPS体系，考察粗提物用量、pH值和温度对橙皮苷的分配效果，发现用28%丙酮和20% K₂HPO₄组成ATPS体系，在pH 10，粗提物0.4 g，室温条件下，橙皮苷回收率达到96.69%，最后经制备型高效液相制备得到纯度为96.09%的样品；文赤夫等^[11]研究ATPS萃取橙皮苷的成相体系时发现，90%丙酮和(NH₄)₂SO₄溶液各取10 mL，(NH₄)₂SO₄用量为4.0 g，加入样品0.35 g，pH值为4的条件下，橙皮苷在有机相中的回收率达到98.22%。Bi等^[12]研究黄芩中黄芩苷的双水相气浮溶剂浮选分离时发现，以50% PEG 4000水溶液和300 g/L (NH₄)₂SO₄溶液构建ATPS体系，在pH值为2～3条件下，以30 mL/min的浮选速率，浮选30 min，黄芩苷的回收率超过90%，黄芩苷的富集因子超过27，其效果比溶剂浮选、ATPS和液/液萃取的效果都要好。金彦等^[13]结合微波技术考察了28%乙醇和22% (NH₄)₂SO₄构建的ATPS体系萃取鹿蹄草中金丝桃苷的能力，经响应面实验设计优化发现在温度为50 ℃，液固比为36∶1，微波功率为300 W，提取22 min，金丝桃苷的得率可达0.098 2%，质量分数达0.443%。Ma等^[14]建立了一种微波辅助ATPS萃取分离降香叶中金雀异黄酮和鹰嘴豆素A的方法，经响应面设计优化发现以25%乙醇和20% K₂HPO₄溶液建立ATPS体系，加入1.0 g降香叶干粉，在45.5 ℃条件下，300 W微波辅助提取10 min，金雀异黄酮和鹰嘴豆素A的得率分别达到0.103 4%和0.202 3%，其在提取液中的浓度比单纯用微波提取和回流提取的浓度高2～3倍。Zhang等^[15]采用微波辅助ATPS体系对木豆根中金雀异黄酮和芹黄素进行了萃取研究，结果发现28%乙醇和22% K₂HPO₄建立的ATPS体系效果最好，温度是影响微波提取效果的最主要参数，在料液比为1∶30，50 ℃条件下，微波辅助提取10 min，金雀异黄酮和芹黄素的得率分别达到0.043 9%和0.020 7%，质量分数比用80%甲醇提取分别增加110%和80%，达到0.471%和0.233%。Lin等^[16]结合微波技术，研究了离子液体ATPS体系对罗布麻中金丝桃苷和异槲皮素的分离能力，用正交实验设计优化参数，结果发现0.4 g/mL离子液体 [Bmim] [BF₄] 和NaH₂PO₄建立ATPS体系，在料液比为0.02 g/mL，60 ℃条件下微波辅助提取，金丝桃苷和异槲皮素的回收率分别为97.29%和99.40%，其富集效率分别为66.4%和65.7%。此外，还有对荷叶^[17]、金银花^{[18, 19]}、山楂叶^[20]、椒蒿^[21]、柠檬渣^[22]、连钱草^[23]、黄柏^[24]、竹叶兰^[25]、狗枣猕猴桃叶^[26]、竹叶^[27]、蒲公英^[28]和桑黄^[29]等植物中总黄酮进行ATPS萃取研究的报道（表 2）。从文献中可以看到，ATPS技术与其他分离技术（如微波辅助、超声技术、溶剂浮选技术等）进行有效组合，实现了不同技术间的相互渗透、相互融合，能够改善双水相体系相分离时间长，易乳化的缺点，有效提高了ATPS的分离效率，进一步拓展了该技术的应用范围。

表 2(Table 2)

表 2 ATPS技术在植物中总黄酮分离富集中的应用 Table 2 Application of ATPS in separation and enrichment of total flavonoids from plants 样品 双水相体系和最佳条件 实验结果 文献 荷叶 PEG4000/(NH4)2SO4质量比5∶2，25 ℃，3 mL粗提液，成相后总质量为20 g 97.89% a 17 金银花 乙醇/(NH4)2SO4体积比0.7，盐质量浓度0.27 g/mL，50 ℃，超声辅助75 min，2.0 g粉末 1.97% b 18 乙醇/NaH2PO4 36%乙醇，4.6 g盐，25 ℃，pH 5.0，总体积10 mL，0.1 g粉末 98.56% a、49.726% b 19 山楂叶 乙醇/(NH4)2SO4 5 mL乙醇，5 mL水，5 g盐，0.151 1 g粗提物 89. 2% a 20 椒蒿 乙醇/K2HPO4 7 mL乙醇，盐1.5 g，3 mL粗提物，总体积10 mL 96.9% a 21 柠檬渣 乙醇/(NH4)2SO4 60%乙醇，24 g盐，55 ℃，30 min，料液比1∶20，2.0 g粉末 1.58% b 22 连钱草 正丙醇/(NH4)2SO4 50%正丙醇，盐30%，55 ℃，料液比1∶30，超声辅助30 min，5.0 g粉末 5.04% b 23 黄柏 乙醇/(NH4)2SO4醇水比0.71，料液比1∶26，盐浓度0.28 g/mL，超声辅助77 min，4 g粉末 3.23% b 24 竹叶兰 正丙醇/(NH4)2SO4质量比55∶20，超声辅助50 min，总体积25 mL，1.0 g粉末 3.53% b 25 狗枣猕猴桃叶 PEG400/Na2SO4质量比24∶15，KCl 2%，pH 9，25 ℃，双水相总质量10 g，3 mL粗提液 96.90% a 26 竹叶 PEG400/(NH4)2SO4质量比31∶11，NaCl 0.7%，pH 3.9，20 ℃，竹叶提取液51.5% 97.8% a 27 蒲公英 正丙醇/NaH2PO4 2.0 mL正丙醇，2.5 g盐，50 ℃，超声辅助30 min，适量水，50 mg粉末 4.12% b 28 桑黄 [C4mim] Cl/K2HPO4 3 mL [C4mim] Cl，2.5 mL 50%盐，pH 9.53，浮选速率30 mL/min，浮选时间50 min，1 mL粗提液 85.31% a 29 a回收率指富集相中目标物质的质量与投入原料粗提液中目标物质的质量之比；b得率指富集相中目标物质的质量与投入原料的质量之比，下表同 a Recovery rate indicates the ratio between target substance quality in enrichment phase and target substance quality in crude extract of raw material b Yield indicates the ratio between target substance quality in enrichment phase and raw material,same as below

表 2 ATPS技术在植物中总黄酮分离富集中的应用 Table 2 Application of ATPS in separation and enrichment of total flavonoids from plants

生物碱是一类含有氮元素的碱性有机化合物，活性显著，比如苦参碱、粉防己碱、盐酸小檗碱等都具有显著的抗肿瘤活性，一直备受关注。罗凯文等^[30]采用20%乙醇和35% (NH₄)₂SO₄ ATPS体系，辅助加热回流，对防己粉末中粉防己碱进行了萃取研究，结合高效液相色谱考察了乙醇质量分数、(NH₄)₂SO₄体积分数、料液比、pH值、回流时间和提取次数对粉防己碱萃取率的影响，发现在料液比为1∶8，pH值为9时，粉防己碱在上相中的回收率为84.50%，回流提取1次120 min，防己粗提物的得率为1.98%，质量分数为20.30%。赵鹂等^[31]在研究益母草中水苏碱ATPS萃取过程中，考察了乙醇、丙醇、丙酮、PEG 2000和 (NH₄)₂SO₄、NaNO₃、Na₂CO₃、Na₃PO₄、Na₂SO₄、K₂HPO₄、NaCl的成相能力，发现乙醇/K₂HPO₄ ATPS效果最好，在4 mL水和6 mL乙醇混合后加入2 g K₂HPO₄，乙醇相中水苏碱回收率达到94%，在此条件下，缓慢回流1～2 h，其得率达到0.349%。刘小琴等^[32]用乙醇、聚乙二醇和Triton X-100与 (NH₄)₂SO₄、K₂HPO₄、Na₂CO₃和Na₂SO₄构建ATPS体系，结合高效液相色谱考察其对氧化苦参碱和苦参碱的萃取性能，发现38%乙醇和18% (NH₄)₂SO₄萃取效果最好，在pH 7.0、30 ℃下搅拌萃取15 min，氧化苦参碱与苦参碱的分配系数和回收率分别为4.46、5.10和96.17%、95.74%，通过更换上相溶液，用该体系对苦参水提取液萃取3次，氧化苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱、苦参碱及槐果碱的回收率分别达到97.89%、98.78%、98.00%、97.50%和97.22%，其相对质量分数分别为35.55%、13.56%、3.64%、12.39%和4.68%。罗凯文等^[33]用PEG400/(NH₄)₂SO₄ ATPS体系对黄柏中盐酸小檗碱进行了提取研究，发现15% PEG400，(NH₄)₂SO₄浓度为3.4 mol/L，pH 9.0，粗提液加入体积与萃取前下相体积比为1.0时，其回收率可达99.52%。石瑶等^[34]采用8% PEG6000和20% (NH₄)₂SO₄构建ATPS体系，结合高效液相色谱对丽江山慈菇中秋水仙碱进行了萃取研究，结果显示在pH 7.0时，秋水仙碱回收率达82.09%，富集倍数为6.84。Jiang等^[35]将正丙醇、异丙醇、乙醇和KH₂PO₄、(NH₄)₂SO₄、柠檬酸三钠构建ATPS体系，结合高效液相色谱研究了其对蒜粉中蒜碱的萃取能力，经正交实验设计优化后发现20%正丙醇和19% (NH₄)₂SO₄ ATPS体系，在pH 2.35、30 ℃条件下，添加一定量的8.54% NaCl溶液，蒜碱的得率达到0.204%，提取效果比传统的好，经阳离子交换树脂分离纯化，质量分数达到76%。此外，采用PEG6000/(NH₄)₂SO₄^[36]和Acetone/KH₂PO₄^[37] ATPS体系对烟叶中烟碱进行了萃取研究，效果良好；吴佳等^[38]采用正丙醇和(NH₄)₂SO₄组成ATPS体系，辅助超声萃取60 min，对石榴皮中总生物碱进行了萃取研究，得率达到0.055 9%。

刘琳等^[39]采用25%乙醇和19% (NH₄)₂SO₄建立ATPS体系，结合微波技术考察了其对盾叶薯蓣中多种薯蓣皂苷元的萃取效果，结果显示在料液比为1∶21时，盾叶新苷、三角叶皂苷、薯蓣皂苷元-葡萄糖三糖苷、薯蓣皂苷元-葡萄糖二糖苷、延龄草次苷的最大分配系数分别达89、91、93、117和153，回收率分别为99.8%、97.4%、97.3%、86.6%和63.2%。此外，Liu等^[40]采用30%乙醇、17% (NH₄)₂SO₄和40%醋酸乙酯组成三相体系，辅助微波萃取，对盾叶薯蓣中薯蓣皂苷进行了研究，发现薯蓣皂苷元在上相中的回收率达97.42%，薯蓣皂苷富集于中间相，其中盾叶新苷、三角叶皂苷、薯蓣皂苷元-葡萄糖二糖苷的回收率接近100%，延龄草次苷和薯蓣皂苷元-葡萄糖三糖苷的回收率分别为96.03%和98.82%，多糖基本都富集于下相，回收率达到72.01%。Liu等^[41]采用0.5 mol/L [C₈MIM] [PF₆] 和乙醇建立ATPS体系，辅助超高压条件对丹参中二萜类成分进行了研究，在料液比为1∶20，200 MPa超高压条件下，二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮II_A和丹参新酮的得率分别达到0.406%、0.930%、2.030%、3.740%和0.059%。肖世基等^[42]利用体积比为1的乙醇-水和一定量的NaH₂PO₄组成ATPS体系，从雷公藤中富集得到雷公藤甲素的有效部位，雷公藤甲素得率为0.000 55%，经硅胶柱色谱和重结晶纯化后质量分数达98.2%。罗建平等^[43]研究乙醇/(NH₄)₂SO₄ ATPS萃取灵芝酸能力时发现，灵芝酸的提取率和分配系数均随 (NH₄)₂SO₄和乙醇量的增加以及温度的升高而增大，随pH值的升高而下降；最后在 (NH₄)₂SO₄和乙醇的质量分数分别为22%和27.63%，温度70 ℃时，灵芝酸的提取率可达74.23%，分配系数为6.63。此外，采用乙醇/ (NH₄)₂SO₄ ATPS体系对柠檬中柠檬苦素^[44]和白英中总皂苷^[45]进行了富集研究，效果良好。张儒等^[46]研究了PEG相对分子质量、成相物质质量分数、pH值和温度等因素对ATPS体系萃取人参皂苷的影响，发现PEG3350质量分数为12%，(NH₄)₂SO₄质量分数为16%，pH值为7. 0，温度为60 ℃时，人参皂苷回收率可达88.94%。

Guo等^[47]采用乙醇/(NH₄)₂SO₄ ATPS体系，辅助超声技术对丹参中丹酚酸B进行了萃取研究，结果显示由30%乙醇和22% (NH₄)₂SO₄组成的100 g ATPS体系，结合中心复合实验设计优化，在固液比为1∶20，pH值为2时，52.1 W条件下超声42.6 min，丹酚酸B的得率为4.249%，质量分数为55.28%，而采用传统的超声溶剂提取（功率572.1 W，超声42.2 min，10 g样品粉末，60%乙醇100 g），丹酚酸B的得率达到4.312%，但其质量分数仅为8.29%。郭永学等^[48]采用29%乙醇和20% (NH₄)₂SO₄ ATPS体系对丹参粗提液中丹酚酸B的萃取工艺进行了放大研究，在pH值为2.0，30 ℃时，丹酚酸B的分配系数为58.7，回收率为97.3%，质量分数为57.4%；放大40倍后，其分配系数、回收率和质量分数均无显著差异，分别为59.3、98.2%和58.6%。在花青素研究中，Liu等^[49]采用25%乙醇和22% (NH₄)₂SO₄构建ATPS体系，结合响应面实验设计对紫甘薯中花色素进行了研究，发现在料液比为1∶45，pH 3.3条件下，花色素的提取率和分配因子分别为90.02%和19.62，经HPLC-ESI-MS色谱确定了8种化合物的结构。Wu等^[50]研究了桑椹中花色素的双水相萃取效果，发现采用30%乙醇和20% (NH₄)₂SO₄溶液，在料液比为1∶4，pH 4.5，温度35 ℃时，花色素提取率能够达到90%，最后结合HPLC-ESI-MS色谱确定了5种化合物的结构。张喜峰等^[51]采用响应面试验设计优化超声集成ATPS体系提取葡萄籽中原花青素的最佳工艺条件，发现21.45%乙醇和23.46% (NH₄)₂SO₄组成ATPS体系，在料液比1∶7，50 ℃下超声提取45.46 min，葡萄籽中原花青素的提取率可达30.23%，分配系数可达11.5。Dang等^[52]采用微波辅助ATPS萃取技术对葡萄籽中多酚类化合物进行了研究，考察了丙酮和柠檬酸三铵不同比例组成的萃取效果，发现32%丙酮和16%柠檬酸三铵组成ATPS体系效果最好，总多酚、黄酮和原花青素的得率分别达到8.27%、5.26%和3.07%，回收率分别为97.1%、97.9%和99.3%，其效果比单纯使用索氏提取、回流提取和ATPS提取效果都好。此外，还对路边青^[53]、芒果核^[54]、橡树果实^[55]、桉树^[56]中的总多酚类成分进行了双水相萃取研究，效果良好。双水相萃取技术在植物中总多酚分离富集中的应用见表 3。

表 3(Table 3)

表 3 ATPS技术在植物中总多酚分离富集中的应用 Table 3 Application of ATPSin separation and enrichment of total polyphenols from plants 样品 双水相体系和最佳条件 实验结果 文献 路边青 乙醇/(NH4)2SO4：醇水比0.8，盐质量浓度0.27 g/mL，固液比1∶20，60 ℃，超声辅助萃取60 min，1 g粉末 3.04% b 53 芒果核 正丙醇/(NH4)2SO4：60%正丙醇，盐质量浓度3 g/L，固液比1∶20，超声辅助萃取15 min，2 g粉末 61.96% b 54 橡树果实 丙酮/(NH4)2SO4：80%丙酮，盐质量浓度0.16 g/mL，固液比1∶45，超声辅助萃取25 min，1 g粉末 0.330 3% b 55 桉树 PEG2000/(NH4)2SO4：16.37% PEG2000，15.21%盐，质量比1.08，提取270 min，65 ℃，固液比1∶20，双水相体系总质量50 g，2.5 g粉末 1.88% b 56

表 3 ATPS技术在植物中总多酚分离富集中的应用 Table 3 Application of ATPSin separation and enrichment of total polyphenols from plants

其他类型活性成分主要包括蒽醌、香豆素、木质素、色素等类型化合物。Tan等^{[57, 58, 59]}采用聚合物/盐、醇/盐和离子液体/盐分别对芦荟中蒽醌类化合物进行了萃取研究，其中在质量比为2∶1的PEG6000/(NH₄)₂SO₄组成的ATPS体系中，通过调节pH值至3.0，40 ℃条件下，添加0.6 g NaCl，芦荟叶中蒽醌的回收率达到90.54%，通过调节pH值至8～14，使蒽醌从聚合物相反萃取至富盐相，其反萃取回收率最高达70.15%；采用17.84%正丙醇和26.66% (NH₄)₂SO₄组成ATPS体系，在室温不调节pH值的条件下，蒽醌在有机相中的回收率达到95.56%，而采用1.0 mL [C₄mim] BF₄，1.0 g Na₂SO₄和5 mL水组成的ATPS体系，在pH 4.0时，蒽醌的回收率可达92.1%。谢玲等^[60]研究了TritonX-114/(NH₄)₂SO₄ ATPS体系对蛇床子中蛇床子素的萃取效果，结果显示在1.0% TritonX-114，(NH₄)₂SO₄浓度为0.8 mol/L，pH值为7.0，温度为45 ℃时，蛇床子素在离子液体相中的回收率为98.2%。彭胜等^[61]采用11% PEG4000和8% D40构建ATPS体系，在样品加入量为8 g，温度为60 ℃，pH 7时，实验重复3次，桃叶珊瑚苷有较高的回收率，可达到66.32%，质量分数为48.67%，远高于粗提物中的8.75%。Montalvo-Hernández等^[62]研究了西红花中西红花苷在聚合物/聚合物、聚合物/盐、乙醇/盐、离子液体/盐ATPS体系中分离效果，发现19.8%乙醇和16.5%磷酸二氢钾组成的ATPS体系，添加0.1 mol/L NaCl，超过75%的总西红花苷富集在上相，效果良好。藤毅等^[63]研究了超声波耦合乙醇/ K₂HPO₄ ATPS对密蒙花黄色素的萃取效果，发现在100 mL 50%乙醇中加入15 g盐，在500 W功率超声20 min条件下，3 g密蒙花粉中黄色素的得率为27.11%。刘庆华等^[64]利用超声与双水相体系相结合方法对红花红色素进行提取分离，结果发现温度为40 ℃，料液比为1∶20，70%丙酮，饱和硫酸铵溶液，超声2次，每次30 min，红花红色素提取率为0.136%。夏昊云等^[65]采用β-环糊精/ Na₂SO₄ ATPS体系对辣椒中辣椒素进行萃取研究，结果显示用0.5 g β-环糊精，0.1 g无水硫酸钠，温度为45 ℃，30 min，料液比1∶10时，效果最好，辣椒素回收率可达86%。信璨等^[66]研究发现采用25% PEG 400和18% Na₂SO₄组成ATPS体系，在pH 2.0，温度为30 ℃条件下，加入1 mL粗提液，月季花色素在上相中的回收率为98.45%。

中药中活性成分复杂，量差异大，对其进行分离纯化繁琐费时，效率和产率偏低，容易丢失微量成分。ATPS作为一种新型的分离技术，能够简化样品前处理过程，在中药活性成分的分离和分析中具有很好的应用前景，但单纯使用ATPS技术分离效率偏低，需要与其他色谱分离手段结合使用分离效果更好。该技术在实际应用中还有待开展大量的研究工作。今后ATPS研究应注意以下几点问题：（1）成本问题，对于PEG/Dextran、PEG/盐ATPS体系，成相聚合物的价格昂贵，黏度大，从聚合物中分离目标物比较困难，一些如超滤、电泳、色谱分离等技术成本也较高，因此采用一些廉价的变性淀粉、乙基羟乙基纤维素、羟基纤维素、聚乙烯醇等代替聚合物，开发新型双水相体系有待进一步研究。（2）分离缺少特异性和专一性，ATPS自首次在分离领域应用至今，仅仅作为1种低级的回收技术被使用，其主要原因就是其分离选择性偏低，缺少特异性和专一性，因此一些亲和分配型、智能型和胶束及反胶束双水相体系的构建，及其在天然产物领域的应用有待进一步研究。（3）双水相与其他相关技术的集成研究，双水相体系在应用时存在易乳化、相分离时间较长、分离效率不高等问题，超声、微波辅助、气浮浮选、高效色谱、电泳等技术的引入，能有效地解决这些问题，提高待分离物质的分离效率，简化了分离流程，拓展其应用范围。（4）循环利用问题，在大规模工业生产中，要特别注意原料的回收利用，循环利用环保又节约成本，比如聚合物，其常用的回收技术有2种，一种是加入盐使目标化合物转入富盐相进行回收，另一种是将聚乙二醇相通过离子交换树脂，用洗脱剂先洗去聚乙二醇，再洗出目标化合物，但效率不高，有待进一步研究。