中草药  2015, Vol. 46 Issue (4): 486-489
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引用本文doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.04.005
郭珮怡, 杨林, 戴均贵, 郭顺星. 国产沉香二萜类化合物研究(Ⅲ)[J]. 中草药, 2015, 46(4): 486-489.
GUO Pei-yi, YANG Lin, DAI Jun-gui, GUO Shun-xing. Diterpenoids from Aquilariae Lignum Resinatum (Ⅲ)[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2015, 46(4): 486-489.
国产沉香二萜类化合物研究(Ⅲ)
郭珮怡1, 杨林1 , 戴均贵2 , 郭顺星3    
1. 中央民族大学生命与环境科学学院, 北京 100081;
2. 中国医学科学院 北京协和医学院药物研究所, 北京 100050;
3. 中国医学科学院 北京协和医学院药用植物研究所, 北京 100193
收稿日期: 2014-10-15;
基金项目： 国家自然科学基金资助项目(81273405)
作者简介：郭珮怡(1989-), 女, 在读硕士研究生.
通讯作者：杨林, E-mail:15116995486@163.com;戴均贵, E-mail:jgdai@imm.ac.cn
摘要：目的 研究国产沉香Aquilariae Lignum Resinatum的小极性化学成分.方法 采用硅胶、Sephadex LH-20凝胶、半制备高效液相色谱等方法进行分离纯化,并通过NMR、MS等波谱学方法鉴定化合物的结构.结果 从国产沉香的石油醚提取物的中分离得到9个化合物,分别鉴定为18-降去氢松香酸-4α,7α-二醇(1)、18-降去氢松香酸-4α,7β-二醇(2)、7α-羟基去氢松香酸(3)、2α-羟基去氢松香酸(4)、2β-羟基去氢松香酸(5)、7α,15-二羟基去氢松香酸甲酯(6)、7-羰基-13β-羟基松香-8(14)-烯-18-羧酸(7)、2β-羟基海松酸(8)、3β-羟基海松醇(9).结论 化合物1～9均为首次从沉香属植物中分离得到的二萜类化合物,其中化合物1和2为降二萜类化合物,化合物3～9为二萜类化合物.
关键词： 沉香     二萜类     降二萜类     18-降去氢松香酸-4α,7α-二醇     18-降去氢松香酸-4α,7β-二醇     2β-羟基海松酸    
Diterpenoids from Aquilariae Lignum Resinatum (Ⅲ)
GUO Pei-yi1, YANG Lin1, DAI Jun-gui2, GUO Shun-xing3    
1. College of Life and Environmental Sciences, Minzu University of China, Beijing 100081, China;
2. Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Beijing 100050, China;
3. Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Beijing 100193, China
Abstract: Objective To study the chemical constituents of small polar in Aquilariae Lignum Resinatum. Methods The column chromatography on silica gel, Sephadex LH-20, and semi-preparative HPLC was used to separate and purify the compounds, their structures were elucidated by NMR and MS spectroscopic data analyses. Results Nine compounds were isolated from the petroleum ether of Aquilariae Lignum Resinatum and identified as 18-nor-abieta-8,11,13-triene-4α,7α-diol (1), 18-norabieta-8,11,13-triene-4α, 7β-diol (2), 7α-hydroxydehydroabietic acid (3), 2α-hydroxydehydroabietic acid (4), 2β-hydroxydehydroabietic acid (5), 7α,15-dihydroxy-methyl-dehydroabietate (6), 7-oxo-13β-hydroxyabiet-8(14)-en-18-oic acid (7), 2β-hydroxypimaric acid (8), and 3β-hydroxypimarol (9). Conclusion All the compounds are isolated from the plants of Aquilaria Lam. for the first time, among them, compounds 1 and 2 are norditerpenoids and compounds 3-9 are diterpenoids.
Key words: AquilariaeLignum Resinatum     diterpenoids     norditerpenoids     18-nor-abieta-8,11,13-triene-4α,7α-diol     18-norabieta-8,11,13-triene-4α,7β-diol     2β-hydroxypimaric acid    

国产沉香为瑞香科Thymelaeaceae沉香属Aquilaria Lam. 植物白木香Aquilaria sinensis (Lour.) Gilg含有树脂的木材。是中国、日本、印度、东南亚以及中东国家传统名贵的香料和药材[1]。沉香的药用已有悠久的历史，中医主要用沉香治疗喘息、呕吐、脘腹胀痛、大肠虚秘等症[2]。目前已对沉香的化学成分进行了开拓性研究，从中分离得到了倍半萜和色酮类化合物[3, 4, 5, 6]。本研究小组在前期研究中，从国产沉香中分离得到多个具有良好生物活性的新结构化合物，包括色酮类、二萜类和倍半萜类化合物[7, 8, 9]。为进一步研究其化学成分，合理开发利用沉香资源，本课题组继续对国产沉香的石油醚提取物进行分离纯化，从中得到9个二萜类化合物，分别鉴定为18-降松香-8,11,13-三烯-4α,7α-二醇（18-nor-abieta-8,11,13-triene-4α,7α-diol，1）、18-降松香-8,11,13-三烯-4α,7β-二醇（18-nor-abieta-8, 11,13-triene-4α,7β-diol，2）、7α-羟基去氢松香酸（7α- hydroxydehydroabieticacid，3）、2α-羟基去氢松香酸（2α-hydroxydehydroabietic acid，4）、2β-羟基去氢松香酸（2β-hydroxydehydroabietic acid，5）、7α,15-二羟基去氢松香酸甲酯（7α,15-dihydroxymethyl- dehydroabietate，6）、7-羰基-13β-羟基松香-8(14)-烯-18-羧酸 [7-oxo-13β-hydroxyabiet-8(14)-en-18- oic acid，7]、2β-羟基海松酸（2β-hydroxypimaric acid，8）、3β-羟基海松醇（3β-hydroxypimarol，9）。化合物1～9均为首次从沉香属植物中分离得到，其中化合物1和2为降二萜类化合物。

1 仪器与材料

MP 400型核磁共振波谱仪；半制备型高效液相色谱仪：岛津LC-6AD，岛津RID-10A示差检测器，威马龙数据工作站。反相半制备色谱柱为Grace Adsorbosphere XL C18（250 mm×10 mm，5 μm，W. R. Grace & Co. -Conn. Alltech Associates，Inc.，美国），正相半制备色谱柱为Grace Allsphere Silica（250 mm×10 mm，5 μm，W. R. Grace & Co. -Conn. Alltech Associates，Inc.，美国）；柱色谱用硅胶和GF254硅胶板为青岛海洋化工厂生产；Sephadex LH-20（Amersham Biosciences）；实验所用试剂均为分析纯，北京化工厂生产。

药材沉香于2009年购自海南省寿南山参业有限公司，由中国医学科学院药用植物研究所郭顺星研究员鉴定为白木香Aquilaria sinensis (Lour.) Gilg含树脂的木材。

2 提取与分离

国产沉香7.5 kg，粉碎，用石油醚回流提取3次，每次6～8 h。减压回收溶剂得石油醚提取物258 g。取石油醚提取物212 g，经硅胶柱色谱，石油醚-醋酸乙酯（100∶0→0∶100）梯度洗脱得8个流分Fr. 1～8。Fr. 7（12.65 g）用石油醚-丙酮（99∶1→9∶1）梯度洗脱得到11个亚流分Fr. 7a～7k。Fr. 7c（0.95 g）经Sephadex LH-20凝胶色谱后得到3个亚流分Fr. 7c-1～7c-3，Fr. 7c-3（330 mg）经正相半制备HPLC（正己烷-醋酸乙酯 3∶2，4 mL/min），反相半制备HPLC（乙腈-水56∶44，3 mL/min），得到化合物9（2.5 mg）。Fr. 7d（1.46 g）先经Sephadex LH-20凝胶色谱，再经硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇（99∶1→97∶3）梯度洗脱，然后通过正相半制备HPLC（正己烷-醋酸乙酯7∶3，4 mL/min），以及反相半制备HPLC（甲醇-水3∶1，3 mL/min），得到化合物1（42 mg），经反相半制备HPLC（甲醇-水13∶7，3 mL/min）得到化合物2（6 mg）。Fr. 7e（500 mg）经正相半制备HPLC（正己烷-醋酸乙酯 3∶2，4 mL/min），反相半制备HPLC（甲醇-水3∶1，3 mL/min），得到化合物3（10 mg）。Fr. 7f（1.48 g）经硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇（99∶1→9∶1）梯度洗脱得到11个亚流分Fr. 7f-1～7f-11，Fr. 7f-5（448 mg）经Sephadex LH-20凝胶色谱后，通过反相半制备HPLC（甲醇-水3∶1、7∶3、67∶33，3 mL/min），得到化合物4（42 mg）、5（2.9 mg）、8（3.2 mg）和6（5.0 mg）。Fr. 7g（980 mg）经Sephadex LH-20凝胶色谱和反相半制备HPLC（甲醇-水3∶2，3 mL/min），得到化合物7（80 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：白色固体。ESI-MS m/z: 289 [M＋H]+，分子式为C19H28O2。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 1.90 (1H, brd, J = 13.0 Hz, H-5), 4.78 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-7β), 7.17 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-11), 7.10 (1H, dd, J = 8.0, 2.0 Hz, H-12), 7.14 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-14), 2.85 (1H, sept, J = 6.8 Hz, H-15), 1.22 (6H, d, J = 6.8 Hz, 16, 17-CH3), 1.13 (3H, s, 19-CH3), 1.05 (3H, s, 20-CH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 37.8 (C-1), 20.7 (C-2), 42.8 (C-3), 72.0 (C-4), 46.6 (C-5), 27.3 (C-6), 68.4 (C-7), 136.1 (C-8), 146.6 (C-9), 38.9 (C-10), 124.9 (C-11), 126.8 (C-12), 146.7 (C-13), 128.4 (C-14), 33.7 (C-15), 24.0 (C-16), 24.3 (C-17), 22.7 (C-19), 23.7 (C-20)。以上数据与文献报道一致[10]，故鉴定化合物1为18-降去氢松香酸-4α,7α-二醇。

化合物2：白色固体。ESI-MS m/z: 289 [M＋H]+，分子式为C19H28O2。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 2.22 (1H, brd, J = 13.2 Hz, H-5), 4.86 (1H, brd, J = 8.0 Hz, H-7α), 7.16 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-11), 7.10 (1H, dd, J = 8.0, 1.2 Hz, H-12), 7.41 (1H, brs, H-14), 2.88 (1H, sept, J = 6.8 Hz, H-15), 1.24 (6H, d, J = 6.8 Hz, 16, 17-CH3), 1.24 (3H, s, 19-CH3), 1.21 (3H, s, 20-CH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 38.0 (C-1), 20.4 (C-2), 42.5 (C-3), 71.8 (C-4), 50.9 (C-5), 29.1 (C-6), 70.9 (C-7), 137.7 (C-8), 146.2 (C-9), 38.8 (C-10), 124.5 (C-11), 125.2 (C-12), 146.5 (C-13), 125.9 (C-14), 33.7 (C-15), 24.8 (C-16), 24.1 (C-17), 23.1 (C-19), 23.9 (C-20)。以上数据与文献报道一致[11]，故鉴定化合物2为18-降去氢松香酸-4α,7β-二醇。

化合物3：白色固体。ESI-MS m/z: 317 [M＋H]+，分子式为C20H28O3。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 2.48 (1H, brd, J = 12.4 Hz, H-5), 4.82 (1H, d, J = 3.2 Hz, H-7β), 7.18 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-11), 7.13 (1H, dd, J = 8.4, 1.6 Hz, H-12), 7.20 (1H, brs, H-14), 2.87 (1H, sept, J = 6.8 Hz, H-15), 1.24 (6H, d, J = 6.8 Hz, 16, 17-CH3), 1.27 (3H, s, 19-CH3), 1.17 (3H, s, 20-CH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 37.6 (C-1), 18.8 (C-2), 36.4 (C-3), 47.2 (C-4), 40.0 (C-5), 31.1 (C-6), 68.5 (C-7), 135.8 (C-8), 146.9 (C-9), 37.9 (C-10), 124.5 (C-11), 126.9 (C-12), 146.8 (C-13), 128.5 (C-14), 33.8 (C-15), 24.3 (C-16), 24.1 (C-17), 182.5 (C-18), 16.5 (C-19), 31.1 (C-20)。以上数据与文献报道一致[12]，故鉴定化合物3为7α-羟基去氢松香酸。

化合物4：白色固体。ESI-MS m/z: 317 [M＋H]+，分子式为C20H28O3。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 4.06 (1H, dd, J = 11.6, 4.8 Hz, H-2β), 2.14 (1H, dd, J = 12.0, 2.0 Hz, H-5), 7.15 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-11), 7.00 (1H, dd, J = 8.0, 1.2 Hz, H-12), 6.89 (1H, brs, H-14), 2.82 (1H, sept, J = 6.8 Hz, H-15), 1.22 (6H, d, J = 6.8 Hz, 16, 17-CH3), 1.26 (3H, s, 19-CH3), 1.21 (3H, s, 20-CH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 36.9 (C-1), 75.4 (C-2), 27.5 (C-3), 53.7 (C-4), 45.5 (C-5), 21.6 (C-6), 30.3 (C-7), 134.7 (C-8), 146.3 (C-9), 36.7 (C-10), 124.3 (C-11), 124.5 (C-12), 146.2 (C-13), 127.1 (C-14), 33.7 (C-15), 24.2 (C-16), 24.2 (C-17), 182.6 (C-18), 10.7 (C-19), 25.4 (C-20)。其MS、1H-NMR数据与文献报道一致[13]，故鉴定化合物4为2α-羟基去氢松香酸。

化合物5：白色固体。ESI-MS m/z: 317 [M＋H]+，分子式为C20H28O3。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 4.11 (1H, m, H-2α), 2.24 (1H, dd, J = 12.0, 2.0 Hz, H-5), 7.18 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-11), 7.02 (1H, dd, J = 8.0, 1.2 Hz, H-12), 6.90 (1H, brs, H-14), 2.83 (1H, sept, J = 6.8 Hz, H-15), 1.22 (6H, d, J = 6.8 Hz, 16, 17-CH3), 1.32 (3H, s, 19-CH3), 1.27 (3H, s, 20-CH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 44.3 (C-1), 65.1 (C-2), 47.1 (C-3), 48.7 (C-4), 45.2 (C-5), 20.9 (C-6), 29.8 (C-7), 134.2 (C-8), 146.1 (C-9), 38.6 (C-10), 123.9 (C-11), 124.1 (C-12), 145.8 (C-13), 127.0 (C-14), 33.5 (C-15), 24.0 (C-16), 23.9 (C-17), 182.6 (C-18), 17.3 (C-19), 26.0 (C-20)。其MS、1H-NMR数据报道与文献报道一致[13]，故鉴定化合物5为2β-羟基去氢松香酸。

化合物6：白色固体。ESI-MS m/z: 347 [M＋H]+，分子式为C21H30O4。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 2.51 (1H, dd, J = 12.8, 1.6 Hz, H-5), 4.77 (1H, d, J = 3.2 Hz, H-7β), 7.24 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-11), 7.37 (1H, brd, J = 8.4 Hz, H-12), 7.47 (1H, brs, H-14), 1.57 (3H, s, 16-CH3), 1.56 (3H, s, 17-CH3), 1.29 (3H, s, 19-CH3), 1.17 (3H, s, 20-CH3), 3.69 (3H, s, 1′-CH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 37.7 (C-1), 18.5 (C-2), 36.5 (C-3), 47.2 (C-4), 39.6 (C-5), 31.2 (C-6), 68.1 (C-7), 136.0 (C-8), 147.5 (C-9), 37.5 (C-10), 124.2 (C-11), 124.7 (C-12), 146.9 (C-13), 126.1 (C-14), 72.3 (C-15), 31.6 (C-16), 31.7 (C-17), 178.7 (C-18), 16.5 (C-19), 24.1 (C-20), 52.1 (C-1′)。其NMR数据与文献报道基本一致[7]，故鉴定化合物6为7α,15-二羟基去氢松香酸甲酯。

化合物7：白色针晶（甲醇）。ESI-MS m/z: 334 [M＋H]+，分子式为C20H30O4。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 2.38 (1H, overlap, H-5), 2.23 (1H, m, H-9), 6.75 (1H, brs, H-14), 1.77 (1H, overlap, H-15), 0.97 (6H, d, J = 6.8 Hz, 16, 17-CH3), 1.26 (3H, s, 19-CH3), 0.86 (3H, s, 20-CH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 37.6 (C-1), 18.0 (C-2), 37.0 (C-3), 46.2 (C-4), 45.0 (C-5), 39.1 (C-6), 200.1 (C-7), 137.0 (C-8), 50.9 (C-9), 36.4 (C-10), 20.7 (C-11), 36.0 (C-12), 72.8 (C-13), 141.7 (C-14), 33.0 (C-15), 17.2 (C-16), 17.2 (C-17), 182.7 (C-18), 16.3 (C-19), 14.4 (C-20)。以上数据与文献报道一致[14]，故鉴定化合物7为7-羰基-13β-羟基松香-8(14)-烯-18-羧酸。

化合物8：白色粉末。ESI-MS m/z: 318 [M＋H]+，分子式为C20H30O3。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 3.88 (1H, m, H-2α), 5.19 (1H, brs, H-14), 5.72 (1H, dd, J = 17.2, 10.4 Hz, H-15), 4.96 (1H, dd, J = 10.4, 2.0 Hz, H-16), 4.90 (1H, dd, J = 17.2, 2.0 Hz, H-16), 1.00 (3H, s, 17-CH3), 1.24 (3H, s, 19-CH3), 0.82 (3H, s, 20-CH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 47.7 (C-1), 64.9 (C-2), 45.6 (C-3), 48.7 (C-4), 48.6 (C-5), 35.7 (C-6), 24.2 (C-7), 137.1 (C-8), 51.7 (C-9), 39.6 (C-10), 19.3 (C-11), 35.3 (C-12), 38.9 (C-13), 129.4 (C-14), 147.4 (C-15), 113.2 (C-16), 29.6 (C-17), 183.1 (C-18), 18.1 (C-19), 16.2 (C-20)。以上数据与文献报道基本一致[15]，故鉴定化合物8为2β-羟基海松酸。

化合物9：白色粉末。ESI-MS m/z: 304 [M＋H]+，分子式为C20H32O2。1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 3.65 (1H, dd, J = 12.0, 4.2 Hz, H-3α), 5.13 (1H, d, J = 1.2 Hz, H-14), 5.69 (1H, dd, J = 17.4, 10.8 Hz, H-15), 4.93 (1H, dd, J = 10.8, 1.8 Hz, H-16), 4.89 (1H, dd, J = 17.4, 1.8 Hz, H-16), 0.97 (3H, s, 17-CH3), 3.70 (1H, d, J = 10.2 Hz, H-18), 3.42 (1H, d, J = 10.2 Hz, H-18), 0.91 (3H, s, 19-CH3), 0.77 (3H, s, 20-CH3)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 35.8 (C-1), 22.6 (C-2), 77.5 (C-3), 42.4 (C-4), 48.8 (C-5), 35.6 (C-6), 27.4 (C-7), 137.8 (C-8), 51.3 (C-9), 38.2 (C-10), 19.3 (C-11), 35.8 (C-12), 38.8 (C-13), 128.6 (C-14), 147.5 (C-15), 113.1 (C-16), 29.6 (C-17), 72.5 (C-18), 11.6 (C-19), 15.5 (C-20)。以上数据与文献报道基本一致[16]，故鉴定化合物9为3β-羟基海松醇。

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