中药配方颗粒是以符合炮制规范的中药饮片为原料，经现代工艺提取、浓缩、干燥、制粒而成的系列产品，作为中药饮片在中医临床使用的一种补充形式，目前尚处于科研试点阶段，是中药传统汤剂的一个重大突破，具有计量准确、便于调配、服用方便、安全卫生等优点^[1]。

目前中药配方颗粒的制备工艺对大多数中药而言，较传统汤剂有效成分提取更充分、药材利用率更高。但对一些含挥发性成分的中药，常规工艺挥发性成分容易损失，而这些损失的挥发性成分正是有效成分，故影响其疗效。在《中国药典》2010年版收载的500多种药材中^[2]，有十分之一的中药含有挥发性成分，因而对这类中药的配方颗粒进行工艺研究是十分必要的。对于这类中药，现有的技术是将挥发性成分先提取出来，再在制粒过程中加入使有效成分的量得以提高，从而保证了药效。为了进一步防止挥发性成分在放置过程中的损失，可采用β-环糊精包合技术。

本实验以牡丹皮、肉桂为代表探究其配方颗粒的制备工艺。牡丹皮含有挥发性成分丹皮酚^[3]；肉桂含有大量的挥发油，主要成分是桂皮醛^[4]。本实验通过比较不同工艺制备的牡丹皮配方颗粒中丹皮酚的量、肉桂配方颗粒中桂皮醛的量，研究挥发性成分中药配方颗粒制备工艺的合理性。

高效液相色谱仪，包括LC-10A型高效液相色谱仪、SPD-10A紫外检测器、Anastar色谱工作站；BT-25-S型电子天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司；HS-3120型超声波清洗仪，天津市恒奥科技发展有限公司。

对照品丹皮酚（批号110708-200506，质量分数＞98%）、桂皮醛（批号110710-200915，质量分数为98.8%）均购于中国食品药品检定研究院；肉桂、牡丹皮饮片均购于天津饮片厂，均由天津市药品检验所吴贵华副主任药师鉴定，肉桂为樟科樟属植物肉桂Cinnamomum cassia Presl的干燥树皮、牡丹皮为毛茛科芍药属植物牡丹Peaonia suffruticosa Andr.的干燥根皮；甲醇、乙腈为色谱纯，水为蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

（1）工艺1：取牡丹皮饮片，加10倍量水煎煮2 h，滤过，药渣再加8倍量水煎煮1.5 h，滤过，合并2次滤液，浓缩，真空干燥，制粒，即得。每1 g颗粒相当于饮片5 g。

（2）工艺2：取牡丹皮饮片，加10倍量水，浸泡4 h，水蒸汽蒸馏，在3 h内收集3倍量蒸馏液，于蒸馏液中加入5% NaCl，冰箱（冷藏，4 ℃）放置过夜（10 h），析出白色结晶，滤过，用冷水洗涤，45 ℃以下干燥，备用；药渣再加8倍量水煎煮1.5 h，滤过，合并滤液，浓缩，真空干燥，制粒，喷入丹皮酚乙醇溶液，即得。每克颗粒相当于饮片5 g。

（3）工艺3：取牡丹皮饮片，按“2.1.1（2）”项工艺制备得到丹皮酚结晶，加适量乙醇溶解，在搅拌下缓缓滴入7倍量β-环糊精溶液（取β-环糊精加20倍量水，在50～60 ℃水浴中溶解，放置室温）中，滴毕后再搅拌30 min，冰箱（冷藏，4 ℃）放置过夜（10 h），滤过，用冷水洗涤，45 ℃以下干燥，备用；药渣再加8倍量水煎煮1.5 h，滤过，合并滤液，浓缩，真空干燥，加入包合物，混匀，制粒，即得。每克颗粒相当于饮片5 g。

（1）工艺1：取肉桂饮片，加8倍量水煎煮2 h，滤过，药渣再加8倍量水煎煮1.5 h，滤过，合并2次滤液，浓缩，真空干燥，制粒，即得。每克颗粒相当于饮片5 g。

（2）工艺2：取肉桂饮片，加入8倍水提油，收集挥发油；药渣再加8倍量水煎煮1.5 h，滤过，合并滤液，浓缩，真空干燥，制粒，喷入挥发油乙醇溶液，即得。每克颗粒相当于饮片5 g。

（3）工艺3：取肉桂饮片，按“2.1.2（2）”工艺得到肉桂挥发油，加适量乙醇溶解，在搅拌下缓缓滴入6倍量β-环糊精溶液（取β-环糊精加20倍量水，在50～60 ℃水浴中溶解，放置室温）中，滴毕后再搅拌30 min，冰箱（冷藏，4 ℃）放置过夜（10 h），滤过，用冷水洗涤，45 ℃以下干燥，备用；药渣再加水8倍量煎煮1.5 h，滤过，合并滤液，浓缩，真空干燥，加入包合物，混匀，制粒，即得。每克颗粒相当于饮片5 g。

色谱柱为Diamonsil C₁₈柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水（55∶45）；柱温35 ℃；体积流量1.0 mL/min；检测波长274 nm；进样量20 μL。理论板数按丹皮酚峰计算应不低于3 000。对照品、供试品溶液色谱图见图 1。

图 1 丹皮酚对照品 (A)、牡丹皮配方颗粒供试品溶液(B)、桂皮醛对照品 (C)、肉桂配方颗粒供试品溶液 (D) 的HPLC色谱图Fig.1 HPLC of paeonol reference substance (A), Moutan Cortex formula granule sample (B), cinnamaldehyde reference substance (C), and Cinnammi Cortex formula granule sample (D)

色谱柱为Diamonsil C₁₈（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈-水（35∶65）；柱温35 ℃；体积流量1.0 mL/min；检测波长290 nm；进样量20 μL。理论板数按桂皮醛峰计算应不低于3 000。对照品、供试品溶液色谱图见图 1。

分别取丹皮酚、桂皮醛对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成含丹皮酚168.3 μg/mL、桂皮醛129.8 μg/mL的溶液，作为储备液。再分别精密吸取3.0 mL至25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

取牡丹皮、肉桂配方颗粒适量，研细，精密称取200 mg，置锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声处理30 min，放凉，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液1.0 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

取上述2种对照品储备液，分别精密吸取0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL置25 mL量瓶中，以甲醇稀释至刻度，摇匀。按“2.2.1”和“2.2.2”项色谱条件分别进样，测定峰面积值。以进样量为横坐标（X），相应的峰面积值为纵坐标（Y），进行线性回归，得丹皮酚回归方程：Y＝2 642 476.3 X－3 691.3，r＝0.999 9；桂皮醛回归方程：Y＝3 942 103.6 X－6 221.6，r＝0.999 9。结果表明，丹皮酚在13.46～673.20 ng，桂皮醛在10.38～519.20 ng与峰面积值呈良好的线性关系。

取质量浓度分别为丹皮酚20.196 μg/mL、桂皮醛15.576 μg/mL的对照品溶液，按“2.2.1”和“2.2.2”项色谱条件重复进样6次，测定峰面积值，其RSD值分别为0.67%和0.56%，结果表明仪器精密度良好。

分别吸取牡丹皮供试品溶液、肉桂供试品溶液，按“2.2.1”和“2.2.2”项色谱条件分别在0、1、2、4、6、8、24 h进样，测定峰面积值，RSD值分别为1.68%、1.45%。结果表明牡丹皮供试品溶液在24 h、肉桂供试品溶液在8 h内测定是稳定的。

分别取牡丹皮配方颗粒、肉桂配方颗粒，按“2.2.4”项下方法操作，平行制备6份，按“2.2.1”和“2.2.2”项色谱条件测定峰面积值，计算丹皮酚平均质量分数为4.919%，RSD为1.11%；桂皮醛平均质量分数为3.846%，RSD为1.21%。

精密称取已测定的配方颗粒各100 mg，分别添加丹皮酚对照品溶液（337.2 μg/mL，甲醇配制）2.0 mL、桂皮醛对照品溶液（1.321 2 mg/mL，甲醇配制）3.0 mL，按“2.2.4”项下方法操作，各平行制备6份，按“2.2.1”和“2.2.2”项色谱条件测定峰面积值，计算回收率。结果丹皮酚的平均回收率为99.50%，RSD为1.53%；桂皮醛的平均回收率为99.01%，RSD为1.41%。

分别取不同工艺制备的牡丹皮、肉桂配方颗粒各3批，适量，研细，按“2.2.4”项下方法制备供试品溶液。按“2.2.1”和“2.2.2”项色谱条件测定，并计算牡丹皮、肉桂配方颗粒中丹皮酚、桂皮醛的量。结果见表 1、2。

表 1(Table 1)

表 1 牡丹皮配方颗粒中丹皮酚测定结果 Table 1 Determination of paeonol in Moutan Cortex formula granule 批次 丹皮酚/(mg∙g−1) 工艺1 工艺2 工艺3 1 0.91 9.83 10.47 2 1.62 12.91 14.24 3 1.39 11.61 12.31

表 1 牡丹皮配方颗粒中丹皮酚测定结果 Table 1Determination of paeonol in Moutan Cortex formula granule

表 2(Table 2)

表 2 肉桂配方颗粒中桂皮醛测定结果 Table 2 Determination of cinnamaldehyde in Cinnamomi Cortex formula granule 批次 桂皮醛/(mg∙g−1) 工艺1 工艺2 工艺3 1 0.51 7.68 8.42 2 0.83 9.25 10.28 3 0.67 8.63 9.54

表 2 肉桂配方颗粒中桂皮醛测定结果 Table 2Determination of cinnamaldehyde in Cinnamomi Cortex formula granule

为进一步探究含挥发性成分配方颗粒的工艺合理性，本实验选择了组方中含有牡丹皮、肉桂的桂附地黄汤为例，测定了桂附地黄汤传统饮片汤剂中丹皮酚、桂皮醛的量，对应3批结果换算成牡丹皮中含丹皮酚为3.74、5.95、4.82 mg/g；肉桂中含桂皮醛为1.93、3.00、2.36 mg/g。结果表明，常规工艺制得的配方颗粒2种成分的量远远低于传统饮片汤剂，而采用先将挥发性成分提取出来，再在制粒中加入的工艺2种成分的量均高于传统饮片汤剂，说明此工艺是合理的，按此工艺制备的配方颗粒是可以代替饮片使用的。

据文献报道^{[7, 8]}，采用β-环糊精包合丹皮酚技术，可以大大提高丹皮酚稳定性。因β-环糊精与挥发性成分的包合过程是一个物理过程，不发生化学变化，保证挥发性成分的药理作用，提高其在储存过程中的稳定性^{[9, 10]}。因此本实验也采用先提取发性成分，再用β-环糊精包合的工艺，提高了中药配方颗粒中丹皮酚和桂皮醛的量。