本研究通过对青藏高原不同种红景天研究现状及存在问题的分析^[1]，利用基因编码区和基因间的SSR标记对不同种的红景天材料进行群体遗传分析，结合藏医药理论及藏药多组分、多疗效特点，查阅中国食品药品监督管理总局网站（CFDA）；发现目前已获批上市的含红景天原药材的药品7个及含有红景天药材的保健食品72个，因此有必要建立更接近于原药材的综合质量评价体系和方法。对青藏高原大花红景天Rhodiola crenulata (Hook. f. et Thoms.) H. Ohba而言，第1种是对已知的活性单体，如红景天苷^[2,3,4]、酪醇^[2,4]、没食子酸^[2,4]、对香豆酸^[2,4]进行测定，第2种是对已知的活性成分组^[5]，如总酚^[6]、总多糖^[7]、黄酮类^[8]等进行测定。无论是对哪一种活性单体或活性成分组测定，均不能完全反映原药材的本质，故本实验选择HPLC法，以没食子酸、红景天苷、酪醇、儿茶素、没食子酸乙酯、对香豆酸6种活性单体为对照，同时对青藏高原不同产地的大花红景天上述成分进行定量分析，旨在建立简单可控的检测方法，尽可能达到全面有效地质量评价大花红景天的质量。1 仪器与材料

天美（岛津LC-20A）液相色谱仪，配SPD-20A紫外可见检测器；Diamonsil C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；GraceSmart RP₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；梅特勒AE200电子天平；KQ-250DB超声清洗器（250 W，昆山超声仪器有限公司）。甲醇（色谱纯，Fisher公司）；30%乙醇；磷酸（分析纯）；蒸馏水（自制）。没食子酸（批号110831-200803）；红景天苷（批号110818-201206）购自中国食品药品检定研究院；酪醇（批号L-042-130713）、儿茶素（批号154-23-4）、没食子酸乙酯（批号831-61-8）、对香豆酸（批号501-98-4）购自北京盛世康普化工技术研究院，质量分数均大于98%。西藏自治区不同地区产样品均经嘎务教授鉴定为大花红景天Rhodiola crenulata (Hook. f. et Thoms.) H. Ohba的根茎。 2 方法与结果 2.1 色谱条件

Phenomenex Luna C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈（A）-0.3%磷酸溶液（B），梯度洗脱（0～10 min，7% A；10～25 min，7%～14% A；25～40 min，14%～20% A）；柱温25 ℃；体积流量1 mL/min，检测波长275 nm，进样量10 μL。取供试品溶液，在上述色谱条件下进样分析，样品中各待测组分与相邻峰的分离度均＞1.5，拖尾因子在0.95～1.05，塔板数按没食子酸峰计算不低于4 000。对照品与样品的色谱图见图 1。

图 1 混合物对照品 (A) 和样品 (B) HPLC图 Fig. 1 HPLC of mixtures reference substances (A) and sample (B)

分别取没食子酸、红景天苷、酪醇、儿茶素、没食子酸乙酯、对香豆酸对照品适量，精密称定，加30%乙醇制成含没食子酸0.34 mg/mL、红景天苷0.18 mg/mL、酪醇0.24 mg/mL、儿茶素0.21 mg/mL、没食子酸乙酯0.23 mg/mL、对香豆酸0.16 mg/mL的混合对照品溶液。2.3 供试品溶液制备

取本品粉末约2.5 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加30%乙醇20 mL，20 ℃超声处理（功率250 W，频率40 kHz）2 min，静置室温，加30%乙醇稀释至

刻度，摇均，精密量取5 mL，置25 mL量瓶中，加30%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.4 线性关系考察

取没食子酸、红景天苷、酪醇、儿茶素、没食子酸乙酯、对香豆酸对照品适量，精密称定，用30%乙醇制成含没食子酸19.11 μg/mL、红景天苷150.83 μg/mL、酪醇9.92 μg/mL、儿茶素8.54 μg/mL、没食子酸乙酯2.28 μg/mL、对香豆酸3.19 μg/mL的混合对照品标准溶液，分别精密吸取混合对照品溶液0.5、1.0、2.0、2.5、3.5、4.0、4.5、5.0 mL置10 mL量瓶中，加30%乙醇稀释至刻度，摇匀，分别精密进样10 μL，测定峰面积，以色谱峰面积（A）对进样量（C）进行线性回归，结果表明各组分在各自进样量范围内线性关系良好，线性范围、回归方程、回归系数见表 1。

表 1(Table 1)

表 1 6种活性成分的线性关系 Table 1 Linear relationshipof six active ingredient 对照品 回归方程 r 线性范围/(ng·mL-1) 没食子酸 A＝3 000 000 C－1 251.4 0.999 8 38.2～382.0 红景天苷 A＝320 864 C＋993.34 0.999 9 301.0～3 010.0 酪醇 A＝451 064 C＋863.33 0.999 6 19.8～198.0 儿茶素 A＝549 020 C－705.01 0.999 6 17.1～171.0 没食子酸乙酯 A＝3 000 000 C－813.63 0.999 8 4.5～45.0 对香豆酸 A＝3 000 000 C＋1 175.6 0.999 4 6.4～63.8

表 1 6种活性成分的线性关系 Table 1 Linear relationshipof six active ingredient

取混合对照品溶液（没食子酸0.22 mg/mL、红景天苷0.24 mg/mL、酪醇0.22 mg/mL、儿茶素0.21 mg/mL、没食子酸乙酯0.22 mg/mL、对香豆酸0.24 mg/mL），按“2.1”色谱条件测定，重复进样6次，测得峰面积，计算没食子酸、红景天苷、酪醇、儿茶素、没食子酸乙酯、对香豆酸RSD分别为0.40%、0.41%、0.47%、0.43%、0.40%、0.39%，表明仪器精密度良好。 2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液（山南桑日样品），按上述色谱条件测定，2 h测定1次，每次进样10 μL，共6次，测得没食子酸、红景天苷、酪醇、儿茶素、没食子酸乙酯、对香豆酸峰面积的RSD分别为1.48%、1.78%、1.64%、1.25%、1.43%、1.57%，表明本样品稳定性较好。2.7 重复性试验

取样品（山南措那）6份，按“2.1”项条件，每次进样10 μL，测得没食子酸、红景天苷、酪醇、儿茶素、没食子酸乙酯、对香豆酸质量分数的RSD分别为0.29%、0.41%、1.58%、0.93%、0.63%、1.61%，表明本方法重复性较好。2.8 加样回收率试验

精密称取适量的已测定的大花红景天药材粉末（林芝江达县）9份，分为低、中、高3个质量浓度，分别精密加入混合对照品，低质量浓度（没食子酸0.25 mg/mL、红景天苷0.94 mg/mL、酪醇0.11 mg/mL、儿茶素0.19 mg/mL、没食子酸乙酯0.09 mg/mL、对香豆酸0.07 mg/mL），中质量浓度（没食子酸0.32 mg/mL、红景天苷1.2 mg/mL、酪醇0.14 mg/mL、儿茶素0.23 mg/mL、没食子酸乙酯0.11 mg/mL、对香豆酸0.09 mg/mL）、高质量浓度（没食子酸0.40 mg/mL、红景天苷1.45 mg/mL、酪醇0.17 mg/mL、儿茶素0.28 mg/mL、没食子酸乙酯0.14 mg/mL、对香豆酸0.11 mg/mL），制样并测定，计算加样回收率，结果没食子酸、红景天苷、酪醇、儿茶素、没食子酸乙酯、对香豆酸的平均加样回收率分别为101.5%、100.8%、100.2%、101.8%、98.8%、100.5%，RSD值分别为2.2%、1.9%、1.9%、2.3%、2.4%、2.0%。 2.9 样品测定

分别精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液各10 μL，按上述色谱条件进行测定，计算其中没食子酸、红景天苷、酪醇、儿茶素、没食子酸乙酯、对香豆酸在原药材中的质量分数。结果见表 2。

表 2(Table 2)

表 2 样品测定结果 Table 2 Determination results of samples 产地 质量分数/(mg·g-1) 没食子酸 红景天苷 酪醇 儿茶素 没食子酸乙 酯 对香豆酸 山南 4.54 11.53 2.02 0.92 0.77 1.16 山南措那 2.54 8.90 0.38 1.75 1.62 0.82 山南桑日 16.91 21.61 2.04 1.47 6.40 0.38 山南措美卡雷拉山 1.34 0.24 － 1.10 0.48 0.08 日喀则 2.53 19.45 2.47 0.82 1.32 1.46 日喀则昂仁县 2.17 27.85 1.63 1.88 1.89 1.07 日喀则南木林县 9.04 6.98 5.18 0.89 2.41 0.27 当雄 5.55 0.74 2.30 1.32 2.32 0.22 那曲 1.55 8.12 </ td> 1.23 0.87 0.47 0.99 那曲县 5.94 7.55 0.70 0.57 3.28 0.27 林芝 2.29 16.15 2.77 0.81 0.18 1.03 林芝江达县 3.14 11.69 1.41 2.30 1.09 0.86 林芝色季拉山 4.11 2.41 1.43 0.08 1.42 0.72 林芝米林县 7.03 2.68 4.87 0.4 3 3.25 0.52 林芝朗县 3.39 5.87 2.28 0.80 1.85 0.65 林芝米拉山 1.04 17.43 2.33 1.21 0.49 平均值 4.57 10.57 1.94 1.15 1.87 0.69

表 2 样品测定结果 Table 2 Determination results of samples

每个地区收购、采挖的红景天各活性成分质量分数有高有低，采收季节均在9～10月份，并且储藏时间短，当年采收的药材（山南、山南桑日、日喀则、日喀则昂仁县、那曲县、林芝产地样品）其活性成分的质量分数较高；受采收季节的影响，在9月前或10月后采收的红景天（山南措美卡雷拉山、林芝色季拉山）的活性成分质量分数较低；收购的样品（山南措那、日喀则南木林县、当雄、那曲、林芝江达县），其经过加工炮制，切段，未去皮，储藏时间长久，其活性成分质量分数也较低。另外其测得各组分之间质量分数变化的关系，有待更进一步研究。3 讨论

本实验采用HPLC法测定青藏高原大花红景天中没食子酸、红景天苷、酪醇、儿茶素、没食子酸乙酯、对香豆酸，线性关系良好，相关系数均在0.999 4以上，精密度、重复性、回收率均符合要求，样品稳定性好，此法能有效控制大花红景天的质量。3.1 流动相选择

比较不同比例的甲醇-水、甲醇-0.04%磷酸、乙腈-水、乙腈-0.04%磷酸等流动相，乙腈-0.04%磷酸溶液梯度洗脱分离效果好。3.2 波长选择

选择了没食子酸、红景天苷、酪醇、儿茶素、没食子酸乙酯、对香豆酸各自的吸收波长223、261、274、275、308、310 nm，综合评价后选择275 nm为测定波长，各指标峰峰形较好。3.3 溶剂选择

分别考察了100%、70%、50%、30%甲醇，100%、70%、50%、30%乙醇为溶剂的影响，发现用30%乙醇提取样品效果及色谱成分峰形均最佳。3.4 样品测定

从样品测定结果可以看出，青藏高原大花红景天中没食子酸的量平均值为4.57 mg/g、红景天苷的量平均值为10.57 mg/g（《中国药典》2010年版规定红景天苷质量分数大于5 mg/g，在16个样品中，有4个样品低于《中国药典》规定值）、酪醇量平均值为1.94 mg/g、儿茶素量平均值为1.15 mg/g、没食子酸乙酯量平均值为1.87 mg/g、对香豆酸量平均值为0.69 mg/g。

目前对大花红景天药材的质量控制主要以红景天苷为指标，这样不能完全体现红景天药材的质量，多个活性成分的测定更接近对原药材的质量控制，更符合祖国传统医学中“多成分”、“多靶点”的思维模式，因而更加客观、科学。